菌株篩選進(jìn)入"刷臉時(shí)代":微觀圖像+拉曼光譜賦能菌落高效去重
一、應(yīng)用優(yōu)勢(shì)
顛覆傳統(tǒng)|RAcolony高通量智能菌落篩選系統(tǒng):
1.雙模態(tài)"刷臉"去重:微觀圖像+拉曼光譜“人臉識(shí)別”技術(shù),去重效率>95%;
2.日篩千菌:全自動(dòng)高通量菌株篩選,加速構(gòu)建菌種庫(kù);
3.降本增效:智能高效篩選,大幅縮減周期和成本;
4.功能篩選:拉曼代謝指紋挖掘高價(jià)值菌株。
突破微生物資源開(kāi)發(fā)瓶頸,為構(gòu)建戰(zhàn)略菌種庫(kù)提供智能利器!
二、研究方法
1. 樣品制備:① 活性污泥均質(zhì)化處理(震蕩+超聲);② PBS梯度稀釋(10-3-10-5);③ 涂板培養(yǎng)(30℃, 24h);
2.全自動(dòng)檢測(cè):① 菌落宏觀成像精準(zhǔn)定位和計(jì)數(shù);② 全皿菌落微觀成像;③ 菌落拉曼“分子指紋”檢測(cè);
3.AI智能去重:① 圖像智能分析,22項(xiàng)菌落關(guān)鍵表型特征提取和相似性聚類;② 智能光譜分析:分子指紋特征提取和相似性聚類。
三、研究結(jié)果
圖1 RAcolony菌落智能識(shí)別對(duì)比
A) 原始菌落平皿宏觀圖;B) 智能計(jì)數(shù)和定位(373個(gè)菌落)
RAcolony系統(tǒng)基于旋轉(zhuǎn)分割算法精準(zhǔn)計(jì)數(shù)10-5梯度平皿共有373個(gè)菌落,該結(jié)果與人工評(píng)估一致,為后續(xù)高效去重奠定基礎(chǔ)。
圖2 RAcolony去重篩選結(jié)果展示
A)“去重”后靶向13個(gè)菌落微觀圖像;B) 和C)對(duì)應(yīng)菌落拉曼光譜信噪比和光譜。
圖2展示了RAcolony智能去重后的13個(gè)菌落的“人臉識(shí)別”信息,其微觀形態(tài)和拉曼光譜均呈現(xiàn)顯著差異,驗(yàn)證了系統(tǒng)突出的去重性能。
圖3 RAcolony全皿去重篩選結(jié)果展示
RAcolony從全皿菌落中精準(zhǔn)篩選13個(gè)目標(biāo)菌株,經(jīng)自動(dòng)挑取后全部擴(kuò)培成功,驗(yàn)證了系統(tǒng)的高效性與可靠性。
表1 RAcolony去重篩選菌株測(cè)序驗(yàn)證
全皿共373個(gè)菌落,RAcolony菌落去重篩選13個(gè)菌落,覆蓋全皿80%的物種多樣性,并發(fā)現(xiàn)1株測(cè)序漏檢新菌種,效率明顯優(yōu)于人工方法。
四、結(jié)論
RAcolony高通量智能菌落篩選系統(tǒng)“刷臉認(rèn)證”下的突破性表現(xiàn):
1)單皿375菌落智能分析,去重率高達(dá)96.5%;
2)僅需挑取13個(gè)菌落即覆蓋全皿80%及以上的物種多樣性;
3)更發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)測(cè)序漏檢新菌種!
為環(huán)境微生物資源開(kāi)發(fā)提供智能高效的解決方案。
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