01.

實驗方法

圖1為等離子體納米柔性膜的制備以及絡氨酸酶活性的檢測示意圖。TYR 氧化多巴胺（DA）成多巴醌（DQ），在黑色素生成過程中，DQ 迅速自發地朝著黑色素形成方向發展，進一步氧化形成 5，6-二羥基吲哚（DHI）和 5，6-二羥基吲哚-2-羧酸（DHICA）。借助便攜式拉曼光譜儀，觀察到在拉曼光譜中產生兩個寬帶，中心分別位于約 1400 cm^-1 和 1600 cm^-1 處，這與文獻中報道的類似化合物的光譜位置一致，基于特征峰 SERS 強度的變化直接反應TYR 活性的變化。

圖 1等離子體納米柔性膜的制備以及絡氨酸酶活性的檢測示意圖

02.

AuNRs的表征

AuNRs 通過UV-Vis 吸收光譜以及 TEM 進行表征。通過紫外光見吸收光譜圖觀察到AuNRs 的各向異性形狀產生了兩種不同的LSPR模式，在520 nm處有弱的紫外吸收峰，在841 nm處則顯現強的紫外吸收峰（圖2A），兩者分別代表了AuNRs的寬度和長度。圖2 B顯示了Au NRs相應TEM 圖像，表明 AuNRs的成功合成。

圖 2  AuNRs的紫外可見吸收光譜（A）和AuNRs的TEM圖像（B）

03.

BCM-AuNRs柔性SERS基底的表征及性能優化

圖3A-E分別為0.70、1.4、2.1、2.8、3.5 nM濃度的AuNRs負載到BCM上的形貌圖。圖3F為柔性膜基底中AuNRs的密度與AuNRs分散體濃度的關系圖，BCM上AuNRs的密度隨AuNRs溶液濃度的增加而增加。將五種不同濃度的AuNRs制備出來的基底浸入R6G中，測量了R6G的SERS信號，如圖3G所示。圖3H為R6G在1509 cm^-1處特征峰（芳香族C-C拉伸振動）的SERS 強度與Au NRs濃度的直方圖。結果表明，當1.4nM濃度的Au NRs加載到BCM上時，BCM-Au NRs柔性膜的SERS性能最佳。

圖 3 不同濃度的AuNRs制備而成的BCM-AuNRs柔性膜的SEM圖像（A：0.7nM；B：1.4nM；C：2.1nM；D：2.8nM；E：3.5nM）；（F）BCM-AuNRs柔性膜中AuNRs的密度與AuNRs濃度的關系圖；（G）BCM-AuNRs柔性膜上R6G的SERS光譜；（H）R6G在1509 cm-1處SERS特征峰信號強度直方圖

04.

BCM-AuNRs柔性基底的靈敏度分析

將負載AuNRs的纖維素膜剪切至3 mm×3 mm，分別浸泡在10^-3M~10^-9M的R6G 溶液中2h后，干燥，用的RMS1000便攜式拉曼光譜儀進行靈敏度檢測。如圖4所示，BCM-AuNRs柔性基底對R6G有較好的SERS信號響應，檢測至10^-9M仍有R6G特征峰信號產生。

圖 4不同濃度的R6G在BCM-AuNRs柔性基底上的SERS光譜

05

BCM-AuNRs柔性基底均勻性評價

以R6G位于1509 cm^-1處的SERS特征峰強度作為成像條件，掃描20μm×20μm區域內1509 cm^-1特征峰的拉曼信號強度，通過二維圖像中的顏色強度分布來表示信號的強弱和均勻性。如圖5所示，BCM-AuNRs柔性基底的SERS信號的相對標準偏差（RSD）為12.66%，呈現出良好的均勻性。

圖 5 R6G在1509 cm-1處特征峰的mapping圖像

06.

BCM-AuNRs柔性基底不同批次間可重復性分析

采集10^-5MR6G在不同批次制備的BCM-AuNRs柔性膜上的SERS光譜。結果如圖6所示，在五個不同批次的BCM-AuNRs柔性SERS基底上R6G在1509 cm^-1 處的SERS信號表現基本一致，說明BCM-AuNRs柔性基底具有良好的重現性。

圖 6 R6G在不同批次的BCM-AuNRs柔性基底上的SERS信號強度直方圖

07.

BCM-AuNRs柔性基底的時間穩定性評價

圖7表明BCM-AuNRs柔性膜在常溫下儲存30天后，其SERS光譜基本沒有變化，從而證實了所制備的BCM-AuNRs柔性膜具有優異的時間穩定性，具有實際應用的潛力。

圖 7 R6G在存放不同時間段后的BCM-AuNRs柔性基底上的SERS光譜

08.

絡氨酸酶活性的測定

將TYR和DA溶液混合，收集反應1~90min所獲得的SERS光譜，如圖8a所示，DA溶液在加入TYR后迅速發生氧化反應，在SERS光譜區域中顯示了幾個明顯的寬帶，通過對新的特征峰進行歸位認證，生成的產物與黑色素的生成物基本一致，說明此方法檢測TYR活性可行。此外，采集TYR與DA混合后的紫外可見吸收光譜，如圖8b所示。圖8c和圖8d為檢測到的TYR活性的標準曲線，在0.01U/mL~100U/mL濃度范圍內，SERS強度與TYR對數濃度呈良好線性關系，線性方程為Y=-420.77X+1327.71，R²=0.9828，說明兩者具有良好的線性關系。

圖 8（A）TYR與DA反應不同時間的SERS光譜（a~i）分別為0，1，5，10，15，30，40，60，90min；（B）TYR與DA反應不同時間的紫外可見吸收光譜；（C）在0.01 U/mL~100 U/mL內，TYR與DA的氧化反應產物的SERS光譜；（D）1390 cm^-1處的SERS信號強度與TYR濃度之間的線性關系

09.

實際樣品檢測

以美白祛斑乳液作為實際樣本，配置不同濃度的乳液（0.1g/mL、0.2g/mL、0.3g/mL、0.4g/mL、0.5g/mL），分別與100U/mL的TYR孵育15min后，加入1mMDA溶液，均勻后滴加在BCM-AuNRs柔性基底上。表1為美白祛斑乳液對絡氨酸酶活性的影響，表明乳液中的美白功效成分對TYR活性的有效抑制。

表 1美白祛斑乳液對酪氨酸酶活性的影響

文中所使用的RMS1000現已更新為RMS3000微型拉曼光譜儀。