特色應用 | 人工牛黃中膽酸類的測定

2025-07-18 15:15:19 54閱讀次數

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摘要：本文建立了人工牛黃中膽酸類的HPLC測定方法。參照2025版《中國藥典》人工牛黃含量測定項下膽酸類色譜方法，采用色譜柱ShimNex RX C18分析，系統適用性溶液中，4種膽酸峰形良好，牛磺膽酸與牛磺豬去氧膽酸的分離度大于2.0，鵝去氧膽酸與去氧膽酸的分離度大于1.5，且牛磺膽酸峰的理論塔板數遠高于10000；對照品溶液中，牛磺膽酸、牛磺去氧膽酸、甘氨膽酸、甘氨去氧膽酸、膽酸、豬去氧膽酸等6種膽酸峰形良好，且可完全分離，滿足《人工牛黃》公示稿要求。此方法可為人工牛黃中膽酸類含量測定提供參考。

關鍵詞：人工牛黃膽酸類 ShimNex RX C18 HPLC

1、實驗部分

1.1 實驗儀器及耗材

Shimadzu LC-40D高效液相色譜儀；

色譜柱：ShimNex RX C18 (5 μm，4.6×250 mm；P/N：380-01214-50)；

純水機：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L水箱 + 取水器）；

SHIMSEN Disc HPPTFE針式過濾器（P/N：380-00341）；

LC-MS認證樣品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

Nichipet Air移液槍：Nichipet Air 0.5-10 μL（P/N：00-NAR-10）；

Nichipet Air 10-100 μL（P/N：00-NAR-100）；

Nichipet Air 100-1000 μL（P/N：00-NAR-1000）；

Nichipet Air 1000-10000 μL（P/N：00-NAR-10000）。

1.2系統適用性溶液的制備

各取牛磺膽酸對照品、牛磺豬去氧膽酸對照品、鵝去氧膽酸對照品及去氧膽酸對照品適量，加甲醇制成每1 mL各含0.2 mg的溶液，作為系統適用性溶液。

1.3對照品溶液的制備

取牛磺膽酸對照品、牛磺去氧膽酸對照品、甘氨膽酸對照品、甘氨去氧膽酸對照品、膽酸對照品、豬去氧膽酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含牛磺膽酸0.4 mg、牛磺去氧膽酸0.2 mg、甘氨膽酸0.4 mg、甘氨去氧膽酸0.2 mg、膽酸0.5 mg、豬去氧膽酸1 mg的混合溶液，即得。

1.4供試品溶液的制備

取本品約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱重，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，加甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

1.5分析條件

色譜柱：ShimNex RX C18 (5 μm，4.6×250 mm；P/N：380-01214-50)

柱溫：40 ℃

檢測器：ELSD-LTⅢ，漂移管溫度：40℃，增益：5，過濾器：4

流速：1.2 mL/min

進樣量：5 μL

流動相：A：0.2%三氟乙酸水

B：乙腈

梯度程序如下：

時間	0	30	45	45.1	52	0
A（%）	75	48	48	75	75	75
B（%）	25	52	52	25	25	25

2、實驗結果

按照上述色譜條件（1.5）進行采集，系統適用性溶液、對照品溶液和供試品溶液色譜圖如下：

系統適用性溶液

對照品溶液

供試品溶液

重現性

系統適用性溶液重現性

3、實驗結果

本文建立了人工牛黃中膽酸類的HPLC測定方法。參照2025版《中國藥典》人工牛黃項下膽酸類含量測定方法，采用色譜柱ShimNex RX C18分析，系統適用性溶液中，4種膽酸峰形良好，牛磺膽酸與牛磺豬去氧膽酸的分離度大于2.0，鵝去氧膽酸與去氧膽酸的分離度大于1.5，且牛磺膽酸峰的理論塔板數遠高于10000；對照品溶液中，牛磺膽酸、牛磺去氧膽酸、甘氨膽酸、甘氨去氧膽酸、膽酸、豬去氧膽酸等6種膽酸峰形良好，且可完全分離，滿足《人工牛黃》公示稿要求。此方法可為人工牛黃中膽酸類含量測定提供參考。