表面多孔硅膠CORTECS色譜柱在GLP-1液相分析中的應(yīng)用
近年來，隨著度拉糖肽、司美格魯肽、替爾泊肽等多個爆款藥物的獲批，尤其是諾和諾德司美格魯肽的減肥適應(yīng)癥獲批后，銷售額指數(shù)增長，成為挑戰(zhàn)K藥“藥王”地位的一匹黑馬。借此契機(jī)，GLP-1產(chǎn)品迅速火遍全球，成為全球Z熱門藥物研發(fā)領(lǐng)域之一，截至2023年11月，全球約90款多肽藥物上市，其中中國約有40余款。
多肽藥物常采用固相合成法，在合成過程中多會產(chǎn)生一些與目標(biāo)肽結(jié)構(gòu)類似的雜質(zhì)，如缺失肽、插入肽、錯結(jié)肽和差向肽等，導(dǎo)致分離難度增加。相較于傳統(tǒng)的全多孔型填料，使用同規(guī)格的沃特世表面多孔型填料CORTECS能提高近40%的柱效，很大程度上解決了多肽分析時分離度低的難題。所以在多肽類藥物分析中深受客戶的認(rèn)可。今天小編來給大家介紹兩款獨(dú)具特色的CORTECS系列色譜柱。
圖1. CORTECS色譜柱填料橫截面示意圖。
圖2. 同規(guī)格CORTECS色譜柱可提供更高柱效，改善分離度。
CORTECS C18+
表面帶正電，改善峰型
多肽藥物既有弱酸性官能團(tuán)（羧基），又有弱堿性官能團(tuán)（氨基），可同時帶正電和負(fù)電，又被稱為兩性離子。采用反相進(jìn)行多肽藥物分析時需要在流動相中加入添加劑，如三氟乙酸（TFA），即可通過低pH使得酸性側(cè)鏈質(zhì)子化，又可與堿性側(cè)鏈形成離子對，進(jìn)而達(dá)到改善峰形增強(qiáng)保留的效果。在TFA體系下，CORTECS C18+填料表面帶有正電荷，與可能存在的帶正電側(cè)鏈有電荷排斥作用，有助于收斂峰形，改善分離效果。
圖3. CORTECS C18+色譜柱分析索瑪魯肽。
CORTECS T3（ C18柱）
可使用100%水相
基于表面多孔硅膠的CORTECS T3色譜柱與多全孔HSS T3色譜柱類似，均采用三鍵鍵合、中等鍵合密度、專利封端的技術(shù)，使其在低pH下耐受性更好，同時還可以使用100%水相，而不會發(fā)生疏水塌陷。
在極性肽分析中，沃特世肽分析專用柱HSS T3，可顯著增強(qiáng)其保留。
圖4. HSS T3色譜柱分析胰泌素。
CORTECS T3色譜柱在提高極性化合物保留的同時，還能改善靈敏度，提高分離度。
圖5. 同樣規(guī)格CORTECS T3可提供更高分離度。
MaxPeak HPS技術(shù)
使結(jié)果更準(zhǔn)確
在多肽藥物分析中，含有天冬氨酸(D)或谷氨酸(E)等酸性氨基酸的數(shù)量越多，可能會因與色譜柱金屬表面的強(qiáng)吸附性導(dǎo)致峰拖尾因子增加、分離度下降，甚至導(dǎo)致個別雜質(zhì)定量不準(zhǔn)確。沃特世采用MaxPeak HPS技術(shù)的Premier系列色譜柱可以應(yīng)對這一挑戰(zhàn)。如下圖所示，Premier色譜柱主峰拖尾明顯改善，雜質(zhì)能夠準(zhǔn)確檢出。
圖6. 使用傳統(tǒng)不銹鋼色譜柱（A）和Premier色譜柱（B）分析酸性肽。
綜上，基于表面多孔型硅膠的表面帶電CORTECS C18+、水相柱CORTECS T3與MaxPeak HPS技術(shù)相結(jié)合，在雜質(zhì)相似度極高的多肽類藥物分析中有獨(dú)到優(yōu)勢。此外，沃特世還有BEH、CSH等經(jīng)典肽分析專用柱，可用于多肽藥物分析。
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采用MaxPeak HPS技術(shù)的ACQUITY Premier可提高RPLC-MS方法分析酸性肽的色譜性能 CORTECS Premier色譜柱 CORTECS色譜柱
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