- 2025-06-27 11:29:42細胞計數儀
- 細胞計數儀是一種自動化的細胞計數設備，通過圖像識別技術快速、準確地計數細胞數量。其基本原理是采集細胞樣本的圖像，利用圖像處理算法識別并計數細胞。細胞計數儀廣泛應用于生物醫學研究、臨床診斷、藥物篩選等領域，具有計數準確、操作簡便、高通量等優勢，是細胞生物學研究和臨床應用中不可或缺的重要工具。
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細胞計數儀問答
- 2023-08-18 11:00:43如何分辨“真“、”假”全自動細胞計數儀？
- // 上一篇《給大家推薦一種細胞計數儀性能檢測的方法》中，我們發現全自動細胞計數儀檢測細胞樣品的重復性和梯度稀釋的結果準確性上，都比半自動插板式細胞計數儀更有優勢。那么大家可能會問：“導致這樣的性能差異原因是什么呢？另外，目前市場上都自詡所賣的細胞計數儀是全自動的，那我們如何區分哪個是‘真’，哪個又是‘假’的呢？”要回答這2個問題，首先我們需要對圖像法細胞計數的過程做下回顧。下面是圖像法臺盼藍染色細胞計數和活率分析的基本流程。01細胞吹打混懸后定量吸取樣品02等體積吸取臺盼藍吹打染色03染色好的細胞加到血球計數板或細胞計數板上04顯微鏡下手動或自動統計死活細胞數，然后計算活細胞密度和活率05清洗血球計數板或更換新的細胞計數板傳統顯微鏡下手工細胞計數，以上5步操作都要操作人員來完成。這種方法因為人為操作帶來的誤差，導致結果差異有時會很大，甚至超出通常可以接受的±10%偏差范圍。并且隨著樣品數越多，操作人員會逐漸造成眼疲勞，無法繼續進行有效并準確地計數。手工顯微鏡法細胞計數的照片和計算方法插板式半自動細胞計數儀的出現，省去了操作人員肉眼統計和分析死活細胞數的步驟，儀器操作只需要將樣品混勻、定量染色和上樣分析（有時要手動對焦），測試結束后更換新的細胞計數板做下一個樣品。用于半自動細胞計數儀的各類細胞計數板移液槍加樣的照片半自動細胞計數儀的缺點在于：由于每塊細胞計數板的檢測樣品數量有限，所以檢測新的樣品需要更換新的板子。但板子批次間存在差異，樣品和臺盼藍體積需要手動定量，取樣量少代表性差（從30-50mL樣品中一般就只吸取20uL樣品），染色后的細胞樣品通過移液槍加樣有時還產生氣泡而報廢，用后廢棄的細胞計數板會產生二次污染物，這些目前都還沒有好的處理方法。那有沒可能細胞的混勻和染色，以及細胞的計數和分析過程全部實現自動化，同時不用手動更換新的細胞計數板而自動做下一個樣品呢？答案是使用全自動細胞計數和活率分析儀。全自動細胞計數儀相比半自動插板式細胞計數儀的優勢點小結：01全自動吹打混懸和臺盼藍染色全自動細胞計數儀的一個顯著特點是：能夠自動完成細胞的吹打混懸和臺盼藍染色。要實現全自動吸取等體積的細胞樣品和臺盼藍染料，首先需要由儀器內部的步進馬達精確地完成加樣體積的控制。其次，因為可以全自動吸取樣品，所以全自動細胞計數儀會有1個轉盤或孔板放置其他待測樣品。對于排在后面的細胞若發生沉降，就需要在測試前對樣品進行吹打混懸，以防止細胞沉降導致測試結果出現偏差。而這2步操作，半自動細胞計數儀都只能通過手動來完成，從而引入人為操作誤差。同時，Vi-CELL BLU全自動細胞計數儀單個樣品檢測的取樣體積200±20uL，加樣體積不需要很準確，儀器自動會完成定量取樣。相比半自動細胞計數儀只有10-50uL的取樣體積，而且由手動操作完成。取樣體積大代表性更好，測試結果更容易接近真實值。02動態百圖分析Vi-CELL BLU全自動細胞計數儀測試細胞樣品，單個樣品拍攝的照片達到了100張，分析的細胞數量更多，1x10e6個/mL的細胞懸液拍攝100張照片的細胞數差不多2600個。單個樣品檢測拍攝的細胞數越多，檢測結果的系統誤差越小，測試結果的重復性和準確性也相應更高。其中1張照片（上左圖）和100張照片的分析柱狀圖03高通量和不間斷檢測全自動細胞計數儀的另一個特點是高通量和不間斷檢測，即待測樣品可以先放到轉盤或96孔板上，根據軟件中設置好的分析條件，儀器會自動按要求完成細胞的計數和活率分析。Vi-CELL BLU全自動細胞計數和活率分析儀一次最多可以放21個樣品（使用24位轉盤）或96個樣品（使用96孔板）進行分析測試。若使用24位轉盤，在檢測過程中還可以實現不間斷上樣測試，即樣品測試過程中，還可以放入新的待測樣品。綜上所述，全自動細胞計數儀在細胞樣品混懸和染色方面避免了人為操作帶來的誤差，同時百圖分析拍攝的細胞數多，結果代表性更好。所以，在細胞計數方面重復性和準確性上相比半自動插板式細胞計數儀更有優勢。同時，全自動細胞計數儀的高通量和不間斷檢測功能，又滿足實驗室樣品量大，不同老師共用該儀器的檢測需求。并且每個樣品測試結束后，儀器會自動進行管路清洗，儀器本身還帶有自動過夜清洗功能，使得儀器一直處于待機狀態。所以，在操作便捷性上，全自動細胞計數儀也勝過半自動插板式細胞計數儀。以上這些特點可以用于區分我們使用的細胞計數儀是“全自動”還是“半自動”，同時也是為何全自動細胞計數儀性能上要優于半自動的地方。希望大家可以通過這些方法來分辨“真”、“假”全自動細胞計數儀。
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- 2023-05-25 15:24:22Vi-CELL BLU細胞計數儀在工程細胞株開發中的特點和優勢
- 工程細胞株開發（Cell Line Development: CLD）的主要目的是通過高通量篩選手段獲得數個高產穩定表達的細胞株，為后續的工藝開發及優化提供基礎。能否構建適合于生產的高表達穩定細胞株，將直接影響后期重組蛋白或單克隆蛋白等藥物的開發效率和生產成本。細胞培養是細胞株開發的基礎，無論是細胞轉染、高通量克隆篩選、培養基優化、還是抗體表達，都需要在細胞培養的基礎上完成細胞生長狀態的檢測，其中包括活細胞密度（VCD）和活率（Viability）檢測。通過檢測結果將細胞密度和活率達不到要求的細胞排除掉。最 終，從數以千計的克隆細胞中篩選到穩定高產的單克隆細胞株。由于要篩選的克隆細胞量很大，對所培養的細胞生長狀態的檢測，通常需要使用高通量分析設備，有時甚至結合移液工作站來完成自動化檢測。譬如，使用96孔板檢測細胞密度和活率，同時根據需要可整合自動化移液工作站，從而大大提高篩選分析通量，并實現測試的標準化，減少人為操作誤差，最 終使我們能在有限的平臺基礎上實現高產細胞株的篩選。貝克曼庫爾特生命科學的Vi-CELL BLU全自動細胞計數和活率分析儀就是這樣一款滿足高通量上樣、全自動檢測，并可與自動化移液工作站整合的分析儀器。它具有以下一些優點滿足細胞株開發過程中對克隆細胞的VCD和Viability準確和快速地檢測。96孔板上樣檢測Vi-CELL BLU全自動細胞計數儀除了可以使用24位轉盤做不間斷檢測外，同時可以采用96孔板進行高通量樣品分析測試（如下圖所示），使用配套的封板膜可以減少檢測過程中樣品的揮發，防止待測樣品受到外部環境的污染，對于有生物安全的細胞樣品，也可降低對操作人員的危害風險。Vi-CELL BLU 96孔板檢測照片和移液工作站整合為了解決那些重復操作、通量高、易污染、需要大量人力操作的實驗步驟，如梯度稀釋、細胞培養、細胞換液、高通量篩選、克隆挑選等步驟，從而使得上游更通暢，并保證數據的完整性，可以使用貝克曼庫爾特Biomek系列自動化移液工作站來完成這些工作。那細胞計數和活率分析操作是否也可以整合進來，讓自動化工作站控制完成相關檢測呢？答案是可以的。Vi-CELL BLU細胞計數儀可通過OPC UA Server和自動化移液工作站實現有效地整合，進一步實現細胞計數和活率分析檢測的自動化目的，避免無謂的重復實驗操作。Biomek自動化移液工作站整合Vi-CELL BLU細胞計數儀的彩頁全自動和標準化分析使用96孔板的高通量細胞計數和活率分析時，可以在Cell Type檢測參數表中設置染色前的吹打混懸次數（Aspiration cycles）和染色混合次數（Mixing cycles），以此讓儀器自動對沉降的細胞吹打均勻。然后，在保證細胞樣品均一性的前提下，吸取等體積臺盼藍吹打完成細胞的均勻染色。最 后，再通過Cell Type中的細胞識別參數，對拍攝得到的細胞進行有效地識別分析。檢測結束后儀器自動對管路清洗，接著儀器自動對下一個樣品進行標準化分析。Cell Type參數表單個樣品的百圖分析每個細胞樣品按默認Cell Type方法檢測可以得到100張細胞照片，相比于其他細胞計數儀的拍攝1張、3張或6張照片，同一樣品拍攝100張照片得到的細胞數更多，因而該細胞計數方法的系統偏差更小，測試結果的代表性更好。CHO細胞第59張照片（共100張）同一焦平面下的細胞直徑檢測細胞培養過程中平均直徑的監測通常會被忽略，同時這也是一個不太容易被細胞計數儀檢測準確的參數，但這個直徑參數有時影響會很大。在細胞轉染病毒或質粒后，一般細胞平均直徑會發生變化。有客戶發現在Fed-Batch培養過程中細胞平均直徑有時會過大，從而可能因為不耐受培養過程中的剪切力，最 終導致Peak-VCD相對其他細胞更低。Vi-CELL BLU全自動細胞計數儀通過使用聚焦質控品完成自動對焦（如下圖所示），之后細胞樣品檢測都在同一焦平面下完成。然后通過檢測L10粒徑質控標樣的平均粒徑結果是否在標稱值±10%范圍內，以此判斷自動對焦好壞。同時，可把L10粒徑質控品作為質量控制標樣，定期監測儀器對焦狀態是否正常，以此保證所有的細胞樣品都是在同一焦平面下檢測，提高細胞平均直徑檢測的準確性。聚焦質控品和儀器自動對焦示意圖同一個CHO細胞三次測試結果（考察細胞密度、活率和直徑的重復性）若您希望更多地了解Vi-CELL BLU全自動細胞計數和活率分析儀，請撥打400-821-8935和我們聯系。*本產品僅供工業和科研使用，不用于臨床診斷
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- 2023-01-14 16:41:53如何提高細胞計數測試的準確性，及細胞計數儀在高產穩定CHO細胞株開發中的應用回顧
- 01如何提高細胞計數和活率分析的準確性？姚金龍貝克曼庫爾特高級應用專員講座簡介：在各種細胞計數和活率分析方法中，臺盼藍染色細胞計數無疑是細胞活率分析的金標準。目前，通過臺盼藍染色分析細胞活率的方法包括：傳統的光學顯微鏡+血球計數板法，也有市場上很普遍的插片式半自動細胞計數儀，以及無需手動混勻和染色的全自動細胞計數和活率分析儀。其中，后兩個分析儀器的出現，不僅很大程度地解放了人力，同時相比于顯微鏡+血球計數板法會更省時，更合規，所以被各大制藥企業所使用。而全自動細胞計數和活率分析儀更是在工藝開發和生產質控方面表現出特有的優勢，即減少了人為的樣品吹打混勻和臺盼藍染色操作誤差，而且每種細胞標準化的測試條件，提高了儀器間數據的一致性而廣受歡迎。但是大家在使用這些儀器一段時間后，可能會遇到這樣一些問題，譬如：自動細胞計數儀的測試結果為何有時和血球計數板的結果對不上，我該相信哪一個？細胞計數儀測試標樣沒有問題，但一檢測細胞怎么就不行了呢？為何同樣都是CHO細胞，同事測試結果是符合預期的，我的為何就不行呢？以上問題其實歸結一下都是我們測試結果的準確性的問題，如何減小測試方法的人為誤差？如何提高我們使用的細胞計數和活率分析儀的測試結果的準確性？這些問題都將在此次講座中和大家一起來探討交流。02高產穩定CHO細胞株構建策略劉玉梅上海復宏漢霖生物醫藥有限公司高級研究員講座簡介：探討影響穩定細胞株構建要素，包括載體，宿主細胞等。基于平臺優化篩選方式，在stable pool基礎上結合高通量技術進行穩定細胞株篩選，分享快速開發案例，實現快速、高效、穩定細胞株篩選。
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