產(chǎn)品描述

MitoTracker^® Green FM是一種細(xì)胞滲透型的carbocyanine結(jié)構(gòu)衍生物，包含標(biāo)記線粒體的弱巰基反應(yīng)性的氯甲基官能團(tuán)。本品是一種亮綠色熒光探針（（Ex=490 nm，Em=523 nm）），其在水溶液中幾乎不發(fā)熒光，只有當(dāng)聚集在線粒體的脂質(zhì)環(huán)境才能發(fā)熒光，背景熒光幾乎可忽略。使得操作步驟極其簡單，只需用探針孵育細(xì)胞，即可被動運(yùn)輸穿過細(xì)胞膜并直接聚集在活性線粒體上，可不經(jīng)過清洗直接觀察。

與MitoTracker^® Red CMXRos不同的是本品定位于線粒體的能力不受線粒體膜電位影響，使其可能作為定量線粒體質(zhì)量的一種工具。本品經(jīng)乙醛固定后染料不穩(wěn)定，因此更適合活細(xì)胞染色。

雖然傳統(tǒng)的線粒體熒光探針如TMR和羅丹明123，也能很容易的聚集在功能線粒體上，但是一旦線粒體膜電位喪失即會被洗掉，從而在一些需要細(xì)胞進(jìn)行醛類固定或者包含線粒體能量狀態(tài)影響因子的實(shí)驗(yàn)中，使其應(yīng)用大受限制。

產(chǎn)品性質(zhì)

運(yùn)輸和保存方法

室溫運(yùn)輸； -20℃避光干燥保存，有效期兩年。

注意事項(xiàng)

1、DMSO有毒，使用時請小心操作。

2、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

3、本產(chǎn)品僅作科研用途！

使用方法

1. 儲存液的配制

本品是以粉末形式提供，使用前需將本品回溫至室溫。

之后使用細(xì)胞培養(yǎng)級別的無水DMSO（如Yeasen，貨號：60313ES60）將其充分溶解至終濃度1 mM。

本品M. Wt.= 671.88 g/moL，換算下來，50 µg粉末只需加入74.4 µL DMSO即可得到1 mM儲存液?？筛鶕?jù)單次的使用量將儲存液分裝后放到-20℃避光，避免反復(fù)凍融。

2. 工作液的配制

根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖褂貌煌奶结槤舛龋韵碌钠鹗疾僮鳁l件僅作參考，可根據(jù)細(xì)胞類型和其他的相關(guān)因素如細(xì)胞或組織的透化等進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。

用適當(dāng)?shù)木彌_液或者細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋1 mM儲存液至工作液濃度。本探針MitoTracker^® Green FM的推薦濃度為20-200 nM，濃度過高可能對其他細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行染色。

3. 染色及檢測

3.1、貼壁細(xì)胞的染色

培養(yǎng)皿/板內(nèi)加入適量的培養(yǎng)基覆蓋蓋玻片進(jìn)行爬片培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞長至所需豐度，吸除培養(yǎng)液，加入37℃預(yù)熱的MitoTracker^® Green FM染色工作液。在所使用細(xì)胞正常培養(yǎng)條件下孵育15-45 min（最佳孵育時間需優(yōu)化）。染色結(jié)束后，使用新鮮培養(yǎng)液或緩沖液替換上述染色液，即可將其置于熒光顯微鏡下觀察或熒光酶標(biāo)儀下讀數(shù)。

3.2、懸浮細(xì)胞的染色

離心收集細(xì)胞，吸除上清，利用37℃預(yù)熱的MitoTracker^® Green FM染色工作液輕輕重懸細(xì)胞。在所使用細(xì)胞正常培養(yǎng)條件下孵育15-45 min（最佳孵育時間需優(yōu)化）。染色結(jié)束后，離心收集細(xì)胞，利用37℃預(yù)熱的新鮮培養(yǎng)液或緩沖液重懸細(xì)胞，被染色的細(xì)胞可用流式細(xì)胞儀、熒光酶標(biāo)儀、熒光顯微鏡進(jìn)行分析。

HB220418