離子交換主要包括強陽離子交換、弱陽離子交換、強陰離子交換和弱陰離子交換4種，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質、核酸及多肽的分離純化。

CM弱陽離子交換層析填料FF以高度交聯的6%瓊脂糖為基架，可耐受較高的流速及更高的化學穩定性，適合實驗室及工業大規模純化。本品帶電基團-O-CH₂COO^–。

本品CM弱陽離子交換預裝柱是CM弱陽離子交換層析填料FF的中壓預裝柱，規格為1 mL，該預裝柱具有標準接口，可以適配商品化的各類中壓色譜系統，如ÄKTA等，方便客戶操作。

產品性質

運輸和保存方法

冰袋運輸。2-8℃保存，有效期2年。

使用方法

1 緩沖液的準備

應選擇緩沖基團不與介質作用的緩沖鹽，平衡緩沖液宜采用低鹽和低 pH（通常低于目的物等電點 1 個 pH 單位）緩沖液以有利于目的物的結合，同時需要考慮目的物在緩沖液中的穩定性。洗脫緩沖液通常為在平衡緩沖液中加入高濃度鹽（如 1M NaCl）的緩沖液或高 pH 洗脫。所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾。

表1：陽離子交換緩沖液

2 樣品準備

樣品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，減少雜質，提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。

3 樣品純化

1）將泵管道中注滿去離子水。去掉上塞子，將層析柱連接至色譜系統中。再折斷下口，將預裝柱接到色譜系統中，并旋緊。

2）用3-5倍柱體積的去離子水沖洗出存儲緩沖液。

3）使用至少5倍柱床體積的結合Buffer平衡色譜柱。

4）利用泵或注射器上樣。

【注】樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少也會導致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過柱子的結合能力。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓，使得進樣器更難使用。

5）用洗雜Buffer沖洗柱子，直到紫外吸收達到一個穩定的基線（一般至少10-15個柱體積）。

6）用洗脫Buffer采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫中，通常5倍柱體積洗脫液就足夠了。可以用一個小的梯度，例如20倍柱體積或更多，來分離不同結合強度的蛋白質。

5 填料清洗

離子交換填料每次使用后可以用1M NaCl甚至更高離子強度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱體積的Buffer進行平衡至離子強度或pH值穩定。

CIP（Cleaning In Place）清洗

離子交換填料可以重復使用而無需再生，但隨著非特異性結合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和結合載量都下降，這時可按照下面方法對填料進行清洗。

1）去除一些沉淀或變性物質

用2倍柱體積的1 M NaOH溶液進行清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH7.4清洗。

2）去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質

用3-4倍柱體積的70%乙醇或3-4倍柱體積的1% Triton™ X-100清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH7.4清洗。

3）去除一些離子鍵結合物質

用3-4倍柱體積的2 M NaCl清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH 7.4清洗。

注意事項

1）請勿冷凍保存本產品。

2）為了得到良好的分離效果，避免緩沖液與層析柱有太大溫差變化。

3）層析柱可以放在層析冷柜中使用，但是需要適當降低流速。

4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

5）本產品僅作科研用途！

附表 問題及解決方案

HB220708