DNA合成反轉錄酶活性的介紹、活性和作用
反轉錄是指在基因工程進行過程中,將RNA作為模板,將DNA遺傳信息提取出來的過程。對于DNA生物合成而言,反轉錄是一種特殊的方式。將RNA作為模板,利用反轉錄酶,合成DNA的過程,即是反轉錄。
反轉錄酶活性
多種酶活性為大多數反轉錄酶所具有,分別為下述幾種活性。
1、DNA聚合酶活性
利用RNA作為模板,對dNTP進行催化使DNA合成的過程。需要將RNA作為此酶為引物。色氨酸的tRNA占多數,DNA以5′→3′方向在引物tRNA3′-末端合成。反轉錄酶催化合成的DNA有比較高的出錯率,因為3′→5′外切酶活性不為反轉錄酶所具備,即是校正功能其不具備。
2、RNase H活性
RNase H從RNA5′端將通過反轉錄酶催化合成的cDNA與模板RNA形成的雜交分子的RNA分子水解掉。
3、DNA指導的DNA聚合酶活性
底物使用dNTP,模板使用反轉錄合成的第yi條DNA單鏈,再次將第二條DNA分子合成。
4、其他
另外,DNA內切酶活性還存在于某些反轉錄酶中,這也許和在宿主細胞染色體DNA中整合病毒基因相關聯。
介紹
反轉錄酶,又叫做依賴RNA的DNA聚合酶(RDDP),其在反轉錄過程中起催化作用,就是利用RNA作為模板為DNA鏈的合成進行催化。
合成的DNA鏈叫做與RNA互補DNA(cDNA)。在一些RNA病毒中存在反轉錄酶,病毒的惡性轉化可能與其相關。人類免疫缺陷病毒(HIV)亦是一種RNA病毒,反轉錄酶亦包含其中。反轉錄酶亦存在于小鼠及人的正常細胞和胚胎細胞中。推測細胞分化和胚胎發育可能與其相關。
作用
反轉錄酶的發現大大推動了遺傳工程技術的發展,到目前為止,其作為一種工具酶,起到非常重要的作用。mRNA通過組織細胞被提取,并且將其作為模板,在反轉錄酶的作用下,將互補的DNA(cDNA)合成出來,通過這將cDNA文庫(cDNA library)構建出來,從中將特異的目的基因篩選出來,使目的基因在基因工程技術中獲得,其為Z常用的方法。
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