本文由 上海恒遠ELISA試劑盒供應(yīng)商 整理匯編

2018-11-16 10:02 2072閱讀次數(shù)

收藏 評價 舉報

• 分享

立即下載

參與評論

評論

登錄后參與評論

掃碼登錄

登錄

• 驗證碼登錄
• 密碼登錄

獲取驗證碼

我已經(jīng)閱讀并同意《會員服務(wù)協(xié)議》和《用戶隱私政策》

驗證碼/密碼登錄

微信掃碼登錄

使用微信掃描下方二維碼
快速登錄儀器網(wǎng)賬號

掃碼登錄手機電腦聯(lián)動

更多資料

• 免疫熒光技術(shù)常見問題及分析

  免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescencetechnique）又稱熒光抗體技術(shù)，是標記免疫技術(shù)中發(fā)展Z早的一種。主要是利用熒光標記的抗體與待測抗原間反應(yīng)進行抗原或者半抗原物質(zhì)定位的技術(shù)。本文總結(jié)了免疫熒光技術(shù)常見的問題及解析。1、問：近期要做免疫熒光雙標，不知哪位有免疫熒光雙標技術(shù)的詳細步驟及其注意事項?參考見解：我正在做冰凍組織切片的免疫熒光雙染。我的經(jīng)驗是：（1）選取一抗時要來源于兩種不同的動物，我用的是來源于rabbit和rat的抗體，二抗則是不同熒光信號標記的，我用的是donkeyanti-rabbit-FITC（綠）和donkeyanti-rat-Tex-Red（紅）。（2）我的做法是兩種一抗同時孵育，然后兩種二抗同時孵育?？贵w濃度、孵育時間要仔細摸索，我感覺一抗4度孵育過夜比較好，背景比較清晰。（3）我的陽性對照用的是陽性組織切片，陰性對照則分別是家兔和大鼠的IgG，熒光標記物對照是PBS+熒光標記物。（4）封閉血清與二抗來源動物一致，我用的是10%的正常donkey血清。（5）其余步驟同一般免疫熒光單標操作。2、問：用免疫熒光方法做組織切片和培養(yǎng)細胞內(nèi)的蛋白，兩者操作過程有哪些不同?參考見解：只是固定方法不同。細胞固定用甲醇，切片固定用多聚甲醛，而染色方法是一樣的。3、問：本人擬做Brdu標記神經(jīng)干細胞免疫熒光，二抗為FITC標記，想請教各位大俠：（1）抗體分裝和熒光顯微鏡觀察時是否一定要在暗室中進行?（2）封片時是否用甘油緩沖液即可，還是用甘油和0.5mmol/LpH9.0-9.5的碳酸氫鹽緩沖液等量混合封片?（3）免疫酶染色中的3%過氧化氫及2N鹽酸是否還需要用?參考見解：（1）你的二抗是用FITC標記的，為避免熒光分解，分裝及熒光顯微鏡觀察時均要避光;（2）封片**用甘油加0.5mmol/LpH9.0-9.5的碳酸氫鹽緩沖液，后者能使玻片透明;（3）關(guān)于免疫酶染色，如果是用過氧化物酶做標記，就必須用3%H2O2以去除內(nèi)源性過氧化物酶;2N鹽酸需要使用，目的是使DNA變性，讓Brdu抗體能夠充分地與已經(jīng)摻入的Brdu結(jié)合。4、問：做間接法免疫熒光染色，如何設(shè)置對照?參考見解：**是同一視野在未用熒光激發(fā)下進行對照，看是否非特異性染色。（1）空白對照：如果你做的是石蠟切片免疫組化，這個對照必須有，目的是看自發(fā)熒光，脫蠟后直接在熒光顯微鏡下觀察。（2）陰性對照：標本直接滴加二抗，呈陰性反應(yīng)。（3）抗原對照：標本加同種動物的未免疫血清，以PBS沖洗后，在加抗免疫球蛋白熒光抗體。因未免疫動物的血清中無特異性抗體，應(yīng)呈陰性反應(yīng)。5、問：我做乳腺組織的免疫熒光染色，結(jié)果用激光共聚焦顯微鏡看很好：有陽性信號，陰性對照組也沒有熒光，但是拿到熒光顯微鏡下看，我的陰性對照組一片綠，像非特異性染色，到底哪個結(jié)果才是真實的呢?參考見解：激光共聚焦顯微鏡的分辨率比普通熒光顯微鏡要高的多，出現(xiàn)上述現(xiàn)象首先要排除熒光顯微鏡的問題，如是不是紫外燈泡壽命到期了或者別的原因，熒光顯微鏡沒有問題，那就以共聚焦顯微鏡的結(jié)果為主。免疫標記法可分為以下幾類：熒光免疫法、放射免疫法、酶聯(lián)免疫法（ELISA）、偶聯(lián)生物素親和素系統(tǒng)的酶免法、時間分辨熒光免疫分析、解離增強鑭系元素?zé)晒饷庖叻治?。免疫熒光實驗的主要步驟包括細胞涂片的制備、細胞的固定及通透（或稱為透化）、細胞封閉、一抗和二抗抗體孵育及熒光檢測等。[詳細]

  2018-11-16 10:02

  產(chǎn)品樣冊

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 三坐標測量機的日常維護及常見問題分析

  三坐標測量機作為功能強大的測量設(shè)備，在機械制造業(yè)占有極其重要的地位。它雖然價格昂貴，但用途廣泛，現(xiàn)在已經(jīng)基本普及，那么做好日常維護保養(yǎng)，了解常見故障就顯得至關(guān)重要。[詳細]

  2024-09-12 18:05

  期刊論文

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• TREF常見問題分析

  TREF常見問題分析[詳細]

  2011-09-22 00:00

  安裝說明

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• CRYSTAF 常見問題分析

  CRYSTAF 常見問題分析[詳細]

  2011-09-22 00:00

  課件

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• ELISA標準操作及技術(shù)服務(wù)的常見問題分析

  ELISA標準操作及技術(shù)服務(wù)的常見問題分析[詳細]

  2024-09-28 12:26

  選購指南

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 水質(zhì)中總氮分析常見問題及解決方法

  水質(zhì)中總氮分析常見問題及解決方法[詳細]

  2024-09-11 17:47

  應(yīng)用文章

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 凍干機維護及常見問題.

  凍干機維護及常見問題.[詳細]

  2013-07-03 00:00

  選購指南

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 7290A 常見問題及回答

  7290A 常見問題及回答[詳細]

  2015-07-06 00:00

  報價單

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 細胞培養(yǎng)常見問題及解答

  細胞培養(yǎng)常見問題及解答[詳細]

  2016-09-13 00:00

  期刊論文

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 免疫熒光標記

  免疫熒光標記[詳細]

  2024-09-28 07:01

  產(chǎn)品樣冊

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 實時無標記細胞分析技術(shù)（RTCA）常見問題解析

  實時無標記細胞分析技術(shù)（RTCA）常見問題解析[詳細]

  2016-06-27 00:00

  實驗操作

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 真空干燥試驗箱常見問題分析

  真空干燥試驗箱常見問題分析[詳細]

  2009-11-25 00:00

  操作手冊

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• RNA提取常見問題分析

  RNA提取常見問題分析[詳細]

  2015-10-21 00:00

  報價單

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 離子色譜儀使用常見問題分析

  基于在環(huán)境保護監(jiān)測站工作的實踐經(jīng)驗，分析離子色譜儀在現(xiàn)代科研、檢測工作中發(fā)揮的重要作用。闡述離子色譜儀的工作原理和日常維護，進而分析歸納出其在使用時常見問題和解決方案，以及其他的使用注意事項，以達到為離子色譜儀使用者提供幫助的目的。[詳細]

  2018-07-16 13:38

  標準

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 真空干燥試驗箱常見問題分析

  真空干燥試驗箱常見問題分析[詳細]

  2024-09-16 03:39

  期刊論文

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• ELISA試劑盒常見問題及對策

  ELISA試劑盒常見問題及對策[詳細]

  2015-08-25 00:00

  選購指南

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 超聲波清洗機常見問題及解決辦法

  超聲波清洗機常見問題及解決辦法[詳細]

  2014-11-12 00:00

  其它

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 雙層玻璃反應(yīng)釜常見問題及解決方法

  雙層玻璃反應(yīng)釜常見問題及解決方法[詳細]

  2014-08-28 00:00

  安裝說明

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 真空干燥箱原理及常見問題

  真空干燥箱原理及常見問題[詳細]

  2018-09-14 10:00

  產(chǎn)品樣冊

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• ELISA中常見問題及解決方法

  下面分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：1.選擇試劑選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。2.加樣可能原因：1）血清或血漿標本分離不好即進行加樣；2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內(nèi)溫度較高時）；3）加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。更多資料請下載文件小鼠elisa試劑盒[詳細]

  2018-10-08 10:01

  產(chǎn)品樣冊

  |

  • 
  • 
  • 
  •