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裸鼠乙酰膽堿酯酶(AChE) ELISA試劑盒操作方法
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裸鼠乙酰膽堿酯酶(AChE) ELISA試劑盒操作方法
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裸鼠乙酰膽堿酯酶(AChE) ELISA試劑盒操作方法
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2015-06-10 00:00
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- 人乙酰膽堿酯酶(AchE)ELISA試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關液體樣本中乙酰膽堿酯酶(AchE)含量。實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人乙酰膽堿酯酶(AchE)水平。用純化的人乙酰膽堿酯酶(AchE)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被的微孔中依次加入乙酰膽堿酯酶(AchE),再與HRP標記的乙酰膽堿酯酶(AchE)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的乙酰膽堿酯酶(AchE)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人乙酰膽堿酯酶(AchE)含量。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個1個酶標包被板1×481×962-8℃保存標準品:2250nmol/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。2.血漿:應根據標本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。操作步驟標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在**、第二孔中分別加標準品100μl,然后在**、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為1500nmol/L,1000nmol/L,500nmol/L,250nmol/L,125nmol/L)。加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。溫育:操作同3。洗滌:操作同5。顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。注意事項:試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(×n×5)。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物請避光保存。嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。計算:以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。(此圖僅供參考)試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上。2.批內與批間應分別小于9%和11%檢測范圍:100nmol/L-2000nmol/L保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-11-07 14:16
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裸鼠白細胞介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒說明書
- 裸鼠白細胞介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒說明書本試劑盒僅供研究使用。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中裸鼠白細胞介素1β(IL-1β)水平。用純化的裸鼠白細胞介素1β(IL-1β)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加白細胞介素1β(IL-1β),再與HRP標記的白細胞介素1β(IL-1β)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素1β(IL-1β)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中裸鼠白細胞介素1β(IL-1β)濃度。裸鼠白細胞介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(64ng/L)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。裸鼠白細胞介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒操作步驟1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。32ng/L5號標準品150l的原倍標準品加入150l標準品稀釋液16ng/L4號標準品150l的5號標準品加入150l標準品稀釋液8ng/L3號標準品150l的4號標準品加入150l標準品稀釋液4ng/L2號標準品150l的3號標準品加入150l標準品稀釋液2.0ng/L1號標準品150l的2號標準品加入150l標準品稀釋液2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50l,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l,然后再加待測樣品10l(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50l,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50l,再加入顯色劑B50l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.10.終止:每孔加終止液50l,終止反應(此時藍色立轉黃色)。11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。裸鼠白細胞介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒注意事項1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照裸鼠白細胞介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。保存條件及有效期1.試劑盒保存:2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2019-01-02 10:00
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裸鼠花生四烯酸(AA)試劑盒使用方法
- 裸鼠花生四烯酸(AA)試劑盒使用方法本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍:96T0.2pmol/L-8pmol/L使用目的:本試劑盒用于測定裸鼠血清、血漿及相關液體樣本中花生四烯酸(AA)含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中裸鼠花生四烯酸(AA)水平。用純化的裸鼠花生四烯酸(AA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入花生四烯酸(AA),再與HRP標記的花生四烯酸(AA)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的花生四烯酸(AA)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中裸鼠花生四烯酸(AA)濃度。[詳細]
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2018-12-30 10:00
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裸鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書
- 檢測范圍:96T1.5ng/L-40ng/L使用目的:本試劑盒用于測定裸鼠血清、血漿及相關液體樣本中腫瘤壞死因子α(TNF-α)含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中裸鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平。用純化的裸鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入腫瘤壞死因子α(TNF-α),再與HRP標記的腫瘤壞死因子α(TNF-α)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的腫瘤壞死因子α(TNF-α)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中裸鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(80ng/L)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。40ng/L5號標準品150l的原倍標準品加入150l標準品稀釋液20ng/L4號標準品150l的5號標準品加入150l標準品稀釋液10ng/L3號標準品150l的4號標準品加入150l標準品稀釋液5.0ng/L2號標準品150l的3號標準品加入150l標準品稀釋液2.5ng/L1號標準品150l的2號標準品加入150l標準品稀釋液2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50l,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l,然后再加待測樣品10l(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50l,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50l,再加入顯色劑B50l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50l,終止反應(此時藍色立轉黃色)。11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。操作程序總結:計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。注意事項1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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Fluoro AChE檢測試劑盒
- 貨號品名規格2017年價格AChE100-2FluoroAChE-100tests100Tests7225產品描述:保存溫度:2-8度主要優點:無需放射性物質。應用-流式細胞儀或熒光顯微鏡。檢測細胞水平的細胞溶解活性。適用于多種類型的哺乳動物細胞系。技術測量CMC/ADCCZ常用的方法是放射性鉻-51(51Cr)釋放試驗(2)。該測定有幾個缺點:昂貴的,難以加載某些細胞類型,由于嚴格的環境規定而處置昂貴,并且具有51Cr自發釋放的高背景。使用流式細胞儀,現在可以消除對放射性物質的需要,并增加在單個細胞基底上定量細胞溶解活性的能力。各組已經證明通過流式細胞術測量CMC/ADCC活性與傳統的51Cr釋放測定(3,4,5,6)具有強烈(95%)的相關性。測定原理細胞跟蹤染料CFSE(7,8,9)用于標記靶細胞群體。在測定完成實驗方案后,加入7AAD(活/死)(10,11)以測量細胞死亡。7AAD僅進入膜受損細胞并與DNA結合。流式細胞術用于門靶細胞并測量7AAD陰性對7AAD后細胞。%細胞毒性通過以下等式計算(參見下面的實驗例):7AAD正(右上象限)=R1/7AADPostitve(右上象限)=R1+7AAD負(右下象限)=R2×100ACT1為了測試豬gd淋巴細胞的自然殺傷能力,將K562細胞染色并調整至含有10%FBS的1×104個細胞/100μlPRMI的終濃度。以25:1,50:1和100:1的E/T比加入gd淋巴細胞,調節至400μlRPMI的總體積,然后在37℃,無菌封蓋的面管中孵育4小時。孵育后,將活/死染色劑直接加入每個管中,在冰上孵育15分鐘并通過流式細胞術分析。引用文獻a.Perussia,B.,(1998).CurrentTopicsinMicrobiologyandImmunology230,p63.b.Whiteside,T.L.,Rinaldo,C.R.andHerberman,R.B.(1992)CytolyticCellfunctions.In:N.R.Rose,E.C.deMacario(Eds.),ManualofClinicalLaboratoryImmunology.AmericanSocietyforMicrobiology.Washington,DC,p.220.Brunner,K.T.,Manuel,J.,Cerotini,J.C.,Chapuis,B.,(1968).QuantitativeAssayoftheLyticActionofImmuneLymphoidCellsonCr-labelledAllogenicTargetCellsin-vitro;InhibitionbyIso-antibodyandbyDrugs,Immunology14,181.Lee-MacAry,A.E.,Ross,E.L,Davies,D.,andWilkinson,R.W.,(2001).DevelopmentofaNovelFlowCytometricCell-mediatedCytotoxcityAssayUsingtheFluorophoresPKH-26andTO-PRO-3Iodide.J.Immunology.Met252,83-92.Gogoy-Ramirez,K.,Franck,K.,andGains,H.,(2000).ANovelMethodfortheSimultaneousAssessmentofNaturalKillerCellConjugateFormationandCytotoxicityattheSingle-cellLevelbyMulti-parameterFlowCytometry.JournalofImmunology.Met239,35-44.Goldberg,J.E.,Sherwood,S.W.,Clayberger,C.,(1999).ANovelMethodforMeasuringCTLandNKCell-mediatedCytotoxicityUsingAnnexinVandTwo-colorFlowCytometry.JournalofImmunology.Methods224,1.Hatam,L,.Schuval,S.,Bonagura,V.R.,(1994).FlowCytometricAnalysisofNaturalKillerCellFunctionasaClinicalAssay.Cytometry16,59.L.SDeClercketal.,J.Immunol.Meth.172,115(1994).M.Bronner-Fraser,J.CellBiol.101,610(1985).Rabinovitch,P.S.,etal.,J.Immunol.136,2769(1986).Su,X.,J.Immunol.156,156,4198(1996).Olin,MR.Lee,J.Choi,K,andMolitor,Tw.gdT-lymphocyteCytotoxicActivityagainstMycobateriumbovisAnalysedbyFlowCytometry:JournalofImmunologicalMethods;Publicationinprocess.Olin,MR.Thesis,K.Cho,J.andMolitor,T.W.MorphineSuppressesMicroglialDirectedCytolyticActivitybygdLymphocytes.JournalofNeuroimmunology;Publicationinprocess.[詳細]
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2018-09-29 10:02
產品樣冊
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裸鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書
- 檢測范圍:96T15ng/L-400ng/L使用目的:本試劑盒用于測定裸鼠血清、血漿及相關液體樣本中轉化生長因子β1(TGF-β1)含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中裸鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)水平。用純化的裸鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入轉化生長因子β1(TGF-β1),再與HRP標記的轉化生長因子β1(TGF-β1)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的轉化生長因子β1(TGF-β1)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中裸鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(800ng/L)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。400ng/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液200ng/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液100ng/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液50ng/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液25ng/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。操作程序總結:計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。注意事項1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月__[詳細]
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2018-10-03 10:00
產品樣冊
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大鼠鈣調神經磷酸酶ELISA試劑盒操作方法
- 大鼠鈣調神經磷酸酶ELISA試劑盒操作方法[詳細]
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2016-04-22 00:00
應用文章
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豬溶菌酶ELISA試劑盒操作方法
- 使用目的:本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關液體樣本中溶菌酶(LYS)的含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬溶菌酶(LYS)水平。用純化的豬溶菌酶(LYS)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入溶菌酶(LYS),再與HRP標記的溶菌酶(LYS)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的溶菌酶(LYS)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中豬溶菌酶(LYS)活性濃度。試劑盒組成120倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液3ml×1瓶2酶標試劑3ml×1瓶8標準品(160μg/L)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×4條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液3ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液3ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液3ml×1/瓶12密封袋1個[詳細]
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2018-10-01 10:00
產品樣冊
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