毛細(xì)管凝膠電泳法（CGE-LIF）對質(zhì)粒DNA的純度分析

來源：SCIEX（愛博才思）      分類：應(yīng)用方案 2021-03-17 13:42:04 5328閱讀次數(shù)

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質(zhì)粒DNA作為基因制劑的傳遞載體，被廣泛應(yīng)用于基因ZL、細(xì)胞ZL、疫苗等生物制品領(lǐng)域。質(zhì)粒DNA主要有三種拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，超螺旋、開環(huán)和線性形式。超螺旋質(zhì)粒在細(xì)胞轉(zhuǎn)染及基因表達(dá)方面優(yōu)于其他形式，所以，高質(zhì)量、高純度的超螺旋質(zhì)粒DNA是確保基因制劑安全性和有效性的前提條件。歐洲藥物評審組織（EMEA）在關(guān)于“慢病毒載體的生產(chǎn)與開發(fā)”指導(dǎo)方針中指出，有必要在慢病毒載體的生產(chǎn)中使用高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA。美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）用于基因制劑質(zhì)粒DNA指導(dǎo)意見的要求，超螺旋質(zhì)粒百分比需大于80%。我國《生物技術(shù)藥物研究開發(fā)和質(zhì)量控制》一書中指出，對于質(zhì)粒類生物制品超螺旋比例一般要大于90%。

在質(zhì)粒的研發(fā)和生產(chǎn)過程中，質(zhì)粒的純化工藝研究，制劑配方工藝研究，大規(guī)模生產(chǎn)的批次一致性，都需要對質(zhì)粒的超螺旋結(jié)構(gòu)進(jìn)行質(zhì)控檢測。

圖1. PA800 Plus藥物分析系統(tǒng)與dsDNA 1000 試劑盒

使用SCIEX PA800 Plus藥物分析系統(tǒng)，結(jié)合激光誘導(dǎo)熒光檢測器（LIF）和dsDNA 1000 試劑盒（貨號477410）（圖1），可以對質(zhì)粒的三種拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)進(jìn)行GX分離，并能準(zhǔn)確計(jì)算超螺旋百分比，用于質(zhì)粒的純度檢測（圖2）。

該毛細(xì)管凝膠電泳（CGE-LIF）方法具有如下優(yōu)勢：

·分離度好：超螺旋、開環(huán)及線性質(zhì)粒可以得到基線分離，易于產(chǎn)品的定量及質(zhì)控；

·重復(fù)性好：超螺旋質(zhì)粒峰的遷移時間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）＜0.3%，純度RSD＜0.5%（n=18）；

·適用范圍廣：適用于不同大小范圍的質(zhì)粒的分析；

·操作簡單：具有商品化的試劑盒，自動化程度高；

·靈敏度高：使用激光誘導(dǎo)熒光的檢測模式，可提供超高的檢測靈敏度；

·符合法規(guī)：儀器具有操作（OQ）認(rèn)證，操作軟件能夠進(jìn)行權(quán)限設(shè)置和審計(jì)追蹤。

圖2  CGE-LIF方法分析質(zhì)粒的純度

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