激光散斑如何優化大小鼠全腦缺血再灌注模型
大腦中動脈阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型的制作已經成熟,但對活體成功模型的評判標準尚欠客觀,目前國內對活體大鼠模型成功與否的評價仍無明確客觀的標準,多以大鼠麻醉清醒后出現插栓對側前肢不能前伸、運動旋轉追尾等表現評價,具有一定的主觀性。能否利用客觀可行的方法提高對模型成功與否評價的客觀性?
1975年SterS次報道了用激光多普勒血流測定法(laserDoppler flowmetry, LDF)監測皮膚血流量。1987年Rosenblum將LDF用于神經外科術中腦皮質血流量測定。激光多普勒血流監測是一種實時動態、微創和敏感的微循環血流監測技術,可用于神經外科術中對局部腦血流量( Regional cerebral blood flow, RCBF)的監測,自90年代起就開始用于監測rCBF的實驗研究,Schmid-Elsaesser等用LDF監測大鼠MCAO模型,發現持續腦血流監測可以用來證明模型制作是否成功,并認為動態血流監測對發現術中出現的蛛網膜下腔出血高度敏感。
有研究表明MCAO模型成功的大鼠插栓時腦血流降幅距基線達到70%以上(圖1),且拔栓后血流迅速恢復接近基線,模型成功為88%。而有1只出現缺血期間局部血流不能完全阻斷,腦血流平均降幅僅達到基線的50%(圖2),此時線栓已插入深度達18mm且線栓插入和拔出均困難,血流阻斷不完全的腦血流圖特點。
圖1 MCAO過程中血流動態變化(成功)
圖2 MCAO過程中血流動態變化(不成功)
根據血流量數據結果顯示,成功大鼠MCAO模型插栓后區域血流量平均值比基線區域下降幅度≥70%,拔栓后區域血流量平均值基本恢復至基線水平,無顯著差異,P>0.05。而后面TTC染色病理組織學驗證MCAO模型成功,模型成功大鼠TTC染色顯示的白色區域為新鮮梗死病灶(圖3),腦梗死平均體積為48.4%,24h后神經功能評分平均值為10.35分;模型不成功大鼠TTC染色則沒有顯示白色的局灶梗死損害(圖4),24h后神經功能評分平均值為0分。
圖3 MCAO成功模型TTC染色
圖4 MCAO不成功模型TTC染色
激光散斑血流成像(Laser Speckle Flowgraphy,LSFG)技術采用了生物醫學領域血流變化監測的一種無需掃描全場光學成像方法,與其它技術相比具有一些獨到的優點, 具有非接觸、無創傷、快速成像等優點,此技術非常適用于血液微循環的測量,使用激光散斑技術可以測量血管管徑、血管密度、血液流速和血流灌注等微循環參數,其有效性已經在近20年中被眾多的臨床實例所證明。經過多年的發展,該方法在理論和系統上趨于完善和多樣。
激光散斑成像技術實時監測局灶性腦缺血模型的血流和血管管徑時空變化,不同栓塞時間對栓塞后腦血流以及再灌注腦血流的影響實驗結果表明60分鐘栓塞腦缺血使得腦血流降低到基值的20 ±3%,30 分鐘栓塞腦缺血的腦血流降低到35 ± 3%,快速充血過程持續10 ~ 15分鐘充血恢復的灌注量是栓塞前的80 ±10%, 充血過程后低灌注狀態維持在基值的60 ~ 70%,60 分鐘栓塞的低灌注水平要比30分鐘低灌注水平低10%。60分鐘栓塞使得血管管徑降低到基值的80 ±3%,30分鐘栓塞的血管管徑降低到基值的90 ±3%,低灌注狀態的血管管徑保持在基值的90%左右。
實驗結果驗證了低灌注水平狀態與腦缺血時間相關,腦缺血時間越長,低灌注水平越低,低灌注現象開始的時間越靠后。監測腦缺血區域的缺血和再灌注過程中的血流,血管的時空變化,不僅可以為缺血性中風的預防和臨床藥物ZL提供幫助,并且可以為研究缺血再灌注損傷的機制提供血液動力學方面的證明和啟示。
瑞沃德RFLSI Ⅲ激光散斑血流成像系統,基于全新的LSCI (LaserSpeckle Contrast Imaging/LSCI,激光散斑襯比分析成像)技術設計,以獨有的非接觸、高時間和空間分辨率、全場快速成像的技術優勢,為生命科學基礎研究及臨床YL提供了一種實時動態血流監測和視頻成像記錄手段,是了解組織、器官病理或生理指標至關重要的依據。儀器無需任何造影劑,時間分辨率可達毫秒量級,空間分辨率可達微米量級, 實現了科研人員實時觀察微血管的血流分布狀態及血流數值相對變化的功能需求。
瑞沃德RFLSI Ⅲ激光散斑血流成像系統
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