應用EZsepMAX固相萃取柱建立動物性食品中碘醚柳胺殘留量的檢測方法

2024-08-02 18:15:12 179閱讀次數

掃碼分享

前言

碘醚柳胺是鹵化水楊酰苯胺類殺吸蟲藥，可以抑制蟲體線粒體的磷酸化過程，從而阻止蟲體內三磷酸腺甙Chemicalbook（ATP）的合成，導致蟲體能量代謝的活力迅速減弱而死亡。它與血液蛋白有很強的親和力，所以藥效在血液中有較長的持續時間，造成藥物在動物體內富集，而人類食用這些肉類會使獸藥殘留進入人體，從而影響身體健康。

本文參照《動物性食品中碘醚柳胺殘留量的測定液相色譜-串聯質譜法（征求意見稿）》，利用EZsep?MAX固相萃取柱（60mg/3mL，貨號：PZ12802）進行凈化，再用高效液相色譜串聯質譜儀進行檢測，建立了一種對動物性食品中碘醚柳胺殘留量的分析方法。

關鍵詞：

動物性食品，碘醚柳胺，固相萃取

實驗過程

1.1 儀器與試劑

MPREP-SPE08手動固相萃取裝置，貨號：PZ0008，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

E.T.氮吹濃縮儀，貨號：C020017，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

4500質譜系統，SCIEX公司；

EZsep?MAX固相萃取柱（60mg/3mL，貨號：PZ12802），北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

冷凍離心機，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科學儀器廠；

甲醇（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

乙腈（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

甲酸，氨水，三乙胺等化學品均為分析純或以上，購自國藥集團化學試劑有限公司。

1.2 工作液配制

碘醚柳胺標準物質：100mg/瓶，購自壇墨質檢標準物質中心。

碘醚柳胺標準儲備液：取碘醚柳胺標準品適量(相當于有效成分約10mg)，精密稱定，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為1000μg/mL的碘醚柳胺標準儲備液。

碘醚柳胺標準中間液：移取碘醚柳胺標準儲備液0.1mL，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為10μg/mL的碘醚柳胺標準中間液。

碘醚柳胺標準使用液：碘醚柳胺標準中間液0.1mL，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為0.1μg/mL的碘醚柳胺標準使用液。

移取0.1μg/mL的碘醚柳胺標準使用液0.02、0.1、0.5、2.0、5.0mL分別置于10mL容量瓶中用甲醇定容至刻度，標準濃度為0.2μg/L、1μg/L、5μg/L、20μg/L、50μg/L。

1.3 實驗部分

1.3.1 樣品制備

取羊腰試樣2g，置于50mL聚丙烯離心管中，加10.0mL1%三乙胺乙腈溶液均質5min,超聲提取10min，8000r/min離心5min，收集上清液至另一50mL離心管中殘渣中加10.0mL1%三乙胺乙腈溶液，重復提取一次，合并兩次上清液，混勻，取提取液5.0mL備用待凈化。

1.3.2 固相萃取凈化

EZsep?X固相萃取柱（60mg/3mL，貨號：PZ12802）用5mL乙腈進行活化，取1.3.1待凈化液上樣，上樣結束后用5mL乙腈淋洗萃取柱，再用5mL5%甲酸乙腈洗脫萃取柱，收集洗脫液，以E.T.氮吹濃縮儀，45℃氮氣濃縮至近干，加2.0mL甲醇，渦旋混勻過微孔濾膜后供LC-MS/MS測定。

1.3.3 LC-MS/MS儀器條件

色譜柱：Shim-pack Velox C18（2.7μm，2.1*100mm）；

檢測方式：多反應監測（MRM）；

流動相：A：0.1%氨水水溶液 B：甲醇；

流速：0.3mL/min；

進樣量：5μL。

表1 流動相梯度洗脫表

實驗結果

表2 加標回收率結果

圖1 標液色譜圖

圖2 碘醚柳胺標準曲線圖

結論

本次實驗展示了使用EZsep?MAX固相萃取柱（60mg/3mL，貨號：PZ12802）對動物性食品中碘醚柳胺殘留量進行凈化，通過高效液相色譜串聯質譜進行測定，其加標回收率在85.0%~93.3%之間，RSD在3.6%，能夠滿足標準要求。說明EZsep?MAX固相萃取柱（60mg/3mL，貨號：PZ12802）能很好地完成方法中的凈化工作，并且結果穩定、可靠。