揭秘!胎牛血清出現沉淀是污染了嗎?
什么是胎牛血清
胎牛血清是通過對未出生的胎牛進行穿刺采血,再經過一系列處理(如自然層析、離心、多級微濾等)后得到的上清液,其富含生長因子和營養成分,能夠為細胞提供充足的能量和營養物質,以及促進細胞生長、保護細胞、提供蛋白酶抑制和貼壁因子等。
作為培養細胞的必需工具,胎牛血清的品質決定了細胞培養的成敗。
什么是WB(Western Blot)
本文將圍繞胎牛血清沉淀及培養中出現小黑點的情況,逐一解開大家心中的疑惑。
什么是WB(Western Blot)
Q
胎牛血清沉淀是什么?
胎牛血清解凍后發現渾濁及白色絮狀物質,并且在充分搖晃混勻后也還存在,無需太過于擔心,這屬于正常現象。
常見的幾種胎牛血清的沉淀:
1、纖維蛋白:血纖維蛋白是參與凝血過程的蛋白之一,血清中可能殘留少量血纖維蛋白,其在解凍后也可能形成肉眼可觀察到的、較大的達到1-2mm的沉淀物。越差的血清,沉淀越多,但好的血清在2-8℃條件下放1-2個月后也會出現少量的沉淀。
2、磷酸鈣:常見的一種沉淀物,會造成胎牛血清渾濁,并且在37℃培養的時候會增加。
3、脂蛋白:脂蛋白在血清中可能因各種原因發生變性,從而形成沉淀。
4、血清融解時,由于冰塊和蛋白融化的速度不一樣,因此局部可能因蛋白濃度過高而產生沉淀。
Q
胎牛血清沉淀是污染嗎?
上面介紹的幾種常見的胎牛血清沉淀并不是污染。
如何判斷胎牛血清是否被污染呢?比較有效的方法是通過將胎牛血清接種在細菌培養基上進行培養,觀察是否存在細菌增殖,并且進行革蘭氏染色,用油鏡觀察直接判斷是否為微生物污染。
Q
胎牛血清產生沉淀需不需要去除?
胎牛血清沉淀的多少與胎牛血清質量不成正比。如有胎牛血清沉淀產生,不用特意去除,可以將胎牛血清放置一會,通過分裝血清時,去掉最后少量的血清即可。若有少許沉淀進入,不會影響實驗,但可能會影響視野/細胞接觸抑制。如要完全去除沉淀物,可以在400-500g離心力下離心3min,去除大顆粒沉淀,取上清液使用即可。
溫馨提醒:胎牛血清不建議過濾后使用,過濾可能會導致胎牛血清中部分營養成分的流失。
Q
胎牛血清沉淀會影響細胞生長嗎?
胎牛血清出現沉淀是胎牛血清的正常特性,各類胎牛血清均有沉淀的出現,根據細胞培養測試經驗,胎牛血清沉淀的多少與胎牛血清的使用效果沒有必然關系。
Q
細胞培養過程中為什么會產生小黑點?
1、生產工藝
在細胞培養過程中加入胎牛血清出現了小黑點,并且隨著培養過程小黑點越來越多,這與胎牛血清的生產工藝有很大關系。
目前胎牛血清的生產主要有兩種工藝:
① 自然凝聚生產獲得血清,該生產控制要求嚴格,自然凝集的胎牛血幾乎不會出現小黑點。
② 離心生產血清,該工藝可能會導致小黑點的產生。
2、細胞老化
在細胞的表面出現小黑點,表明細胞老化,在細胞間隙間出現的小黑點,說明細胞營養不足導致細胞碎片化,需要更換細胞或者更換等級更高的血清。
3、實驗污染
細胞培養中出現的小黑點也有可能是因為出現了污染。當有小黑點形成后判斷是細胞污染還是細胞碎片,首先通過在鏡下觀察小黑點運動狀態,很多會動的小黑點只是發生布朗運動的細胞碎片,而細菌在運動上則較為活躍和浮躁。然后判斷培養基的渾濁程度,如果細胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養基就會迅速變黃、變混濁。
示例
無小黑點
有明顯小黑點
Q
如何避免胎牛沉淀出現及培養基中小黑點的生成?
采用正確的解凍方法
1、2℃~8℃解凍;
2、解凍的過程中間斷搖勻(隔一段時間輕柔搖勻);
3、室溫或者水浴溶解均易造成沉淀增多。
正確使用和保存
1、非必須不用熱滅活(熱滅活會使血清中部分蛋白質變性析出,影響血清品質);
2、不宜37℃預熱,血清和完全培養基通常室溫預熱即可;
3、避免反復凍融;
4、避免紫外線照射;
5、避免2-8℃長期保存,分裝后-20℃長期保存,按需溶解。
Q
好的胎牛血清具備哪些品質?
1、高度純凈:血清經過多重過濾和凈化,以確保其純凈度,適合各種細胞培養。
2、營養成分豐富:血清含有豐富的氨基酸、維生素和微量元素,能夠滿足細胞生長的各種需求。
3、良好的細胞適應性:血清已經被證明能夠支持多種細胞的生長和分化,具有良好的適應性。
4、嚴格的質量控制:遵循嚴格的質量控制標準,確保每一批次的血清都符合最高的。
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