CE-SDS-LIF方法測(cè)定腺相關(guān)病毒的結(jié)構(gòu)蛋白純度

來(lái)源：SCIEX（愛博才思）      分類：應(yīng)用方案 2021-03-11 11:22:34 4216閱讀次數(shù)

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腺相關(guān)病毒（AAV）是常用于細(xì)胞/基因ZL的載體，由衣殼蛋白及包裝的核酸組成。AAV具有表達(dá)時(shí)間長(zhǎng)、特異性強(qiáng)、安全性高、免疫原性低等優(yōu)勢(shì)，是細(xì)胞/基因ZL中重要的組成部分。AAV衣殼主要分為VP1、VP2和VP3三種蛋白構(gòu)成，三種結(jié)構(gòu)蛋白的純度分析是AAV產(chǎn)品質(zhì)量和安全的重要檢測(cè)項(xiàng)目；而AAV產(chǎn)品具有多種血清型，且普遍濃度較低，需開發(fā)一種針對(duì)不同血清型均具有較高分離度和靈敏度的分析方法。

PA 800 Plus藥物分析系統(tǒng)連接激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器（LIF）（圖1）并使用SDS-MW分子量測(cè)定試劑盒是分析AAV結(jié)構(gòu)蛋白純度的有效方法，檢測(cè)結(jié)果如圖2。

圖1. PA 800 Plus藥物分析系統(tǒng)與SDS-MW試劑盒

相比于其他方法，SCIEX提供的CE-SDS-LIF解決方案具有以下優(yōu)勢(shì)：

· 分辨率高：可將VP1、VP2、VP3進(jìn)行基線分離，便于對(duì)雜質(zhì)及結(jié)構(gòu)蛋白含量的測(cè)定；

· 靈敏度高：使用超高靈敏度的LIF檢測(cè)器，檢出限 （LOD）可達(dá)1×109 GC/mL；

· 樣品前處理簡(jiǎn)單：兩步加熱即可完成樣品的變性及標(biāo)記（染料為P503），無(wú)需進(jìn)行染料的洗脫；

· 重現(xiàn)性好：遷移時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）＜0.5%，純度的RSD＜5%（n=6）；

· 線性范圍寬：樣品濃度1×1010 GC/mL至1.6×1014 GC/mL的R2為0.9989；

· 方法簡(jiǎn)便：使用SDS-MW試劑盒即可完成檢測(cè)。

圖2. CE-SDS-LIF方法分析AAV的結(jié)構(gòu)蛋白純度

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