NGS，即下一代測序技術，是近年來基因測序領域的一次重大突破。相較于傳統的測序方法，NGS具有高通量、高準確性、低成本等諸多優勢，使得基因測序變得更加高效和便捷。通過NGS技術，科學家們能夠更深入地了解基因組的結構和功能，為疾病診斷、治療以及新藥研發等領域提供了強有力的支持。

Hieff NGS^® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V3（Cat#12194）

Hieff NGS^® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V3 是一款可用于Illumina^®和MGI^®高通量測序平臺的新一代酶切法建庫試劑盒。本試劑盒將片段化模塊與末端修復模塊合二為一，極大的降低了建庫的時間和成本、連接模塊的酶和buffer預混，簡化了操作流程，更加適合于自動化建庫。

圖1.酶切法建庫原理

以不同質量等級的FFPE DNA樣本建庫，樣本投入量100 ng，采用同一酶切條件4℃ 1 min，37℃10 min，72℃ 20 min，4℃ hold，文庫主峰在300 bp左右；數據顯示不同降解程度的FFPE樣本同一酶切條件下，文庫主峰基本一致。

圖2.FFPE DNA的酶切文庫峰圖

Human gDNA為模板，以不同的樣本投入量，12194與競品W試劑盒相比，12194的文庫產量與競品相當。數據顯示不同投入量文庫產量對比，12194有高效的文庫轉化效率。

NGS建庫引入的假陽性問題主要包括嵌合序列和堿基錯摻等因素，在酶切法片段化時將會引入一些假的嵌合序列，12194對片段化酶全面升級，解決了酶切假陽性的痛點。

用12194酶法片段化建庫試劑盒對3種標準品樣本（FFPE標準品、gDNA標準品、ctDNA標準品）建庫，并和競品W進行了頭對頭的比較。數據顯示，無論是FFPE樣本、gDNA、還是ctDNA，12194的Soft Clip、false chimeric都低于或近似于競品W。

圖4.12194與競品W的數據質量對比

用12194和競品W建庫雜交捕獲測序對比，模板類型為腫瘤SNV 5% gDNA標準品GW-OGTM006和腫瘤gDNA野生型標準品GW-OGTM005，將突變位點稀釋為 0.5% 和0.1%，模板投入量100ng，PCR擴增循環數為7，捕獲panel為何因Cancer SLC Panel，平均測序深度為5000×，比較捕獲測序數據。數據顯示12194對突變位點檢出率與目標檢出率一致。

圖5.12194與競品W的低頻位點檢出率

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