1.什么是RIPA裂解液？

RIPA裂解液（Radio Immunoprecipitation Assay Lysis buffer，放射免疫沉淀法裂解緩沖液）是一種傳統的可用于裂解細胞或組織的快速裂解液，其原理為利用表面活性劑等裂解細胞膜（包括核膜），從組織或細胞中抽取可溶性蛋白。RIPA裂解液裂解后得到的蛋白一般可直接用于常規的WB、IP、co-IP等實驗。

2.RIPA裂解液里有什么？

    RIPA裂解液的配制方法有很多種，主要包括裂解成分、蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑三種組分。裂解成分可通過破壞細胞膜和蛋白間的相互作用等方式裂解組織或細胞；蛋白酶抑制劑可有效抑制各類蛋白酶的活性，避免蛋白過度降解；磷酸酶抑制劑可有效抑制去磷酸化作用。各組分具體作用見表1。

   值得注意的是，由于RIPA裂解液中含有一些穩定性相對較弱的酶類抑制劑，故應放在-20℃保存。其中PMSF的穩定性極弱，半衰期只有0.5 h，所以必須現配現用。

表1.RIPA裂解液里的成分及其作用

3.RIPA裂解液有哪些種類？

目前市面上的裂解液根據其主要裂解成分等不同大致分為強、中、弱等幾類。表2列舉了翌圣生物提供的四種RIPA裂解液，可滿足不同實驗需求。

表2.翌圣生物的四種RIPA裂解液及其基本特點

4.如何選擇合適的RIPA裂解液？

     如果您只是要做普通的WB、IP或者co-IP，我們建議您使用免疫印跡及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液(20118)，該裂解液在裂解細胞或組織后一般不會形成粘滯的透明狀DNA團塊，不必采用超聲處理就可進行下一步操作。同時，該裂解液還適用于磷酸化蛋白的WB檢測。

     如果使用免疫印跡及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液(20118)的效果不是很好，那您的蛋白可能比較特殊，我們建議您可以嘗試另外幾種裂解液。如果您的蛋白是難溶性的蛋白，建議您可以嘗試使用裂解強度更高的裂解液，如RIPA裂解液(強/中)；如果您在做IP實驗的時候發現背景很高，即有很多非特異性蛋白被IP下來，這時候您需使用裂解強度較強的裂解液，比如RIPA裂解液(強/中)。反之，如果您發現目的蛋白無法IP下來，則說明您使用的裂解液強度過強，此時需使用裂解強度較弱的裂解液，比如RIPA裂解液(弱)。

5. RIPA裂解液適用于哪些細胞？

幾乎適用于所有實驗室培養的動物細胞和各種組織。包括各種懸浮細胞、貼壁細胞及動物組織等。

6. 如何判斷細胞的裂解程度？

細胞裂解：加入RIPA后，充分裂解的細胞，沒有細胞沉淀，很粘稠。如果像渾濁的水一樣粘性很小則可能是裂解液得量加太多導致的；相反，如果RIPA裂解液后出現膠狀物體，離心不能沉淀則可能是蛋白太多，RIPA裂解液加入的量太少導致的。

組織裂解：先將組織剪成細小的碎片，之后利用勻漿器或超聲破碎的方法，鏡檢顯示細胞破碎率大于90%，同時組織已經完全裂解，沒有明顯的小組織塊。之后按照細胞裂解的步驟進行裂解，裂解程度的判斷標準與細胞裂解一致。

RIPA裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物，該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清進行后續實驗；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則需通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子，如NF-κB、p53等時，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉錄因子。

7. RIPA儲存出現白色沉淀，為什么？

一般是由于裂解液中SDS在儲存的時候沉淀析出導致，這時只需將裂解液放置于37℃水浴加熱后恢復室溫即可使用。

8. RIPA裂解液可以獲得細胞中的不同蛋白嗎？ 

RIPA裂解液提取的是全蛋白，包括核蛋白、漿蛋白、膜蛋白等。如果要提取特定的蛋白（如：核蛋白、膜蛋白）則可利用專門提這類蛋白的試劑盒進行提取。

紙上得來終覺淺，覺知此事要躬行。小翌在這里給出的建議僅供大家參考，具體裂解液的選擇和使用，還需要根據您自己的實驗需求和實驗效果選擇適合您實驗的RIPA裂解液。

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