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毛細(xì)管電泳實(shí)驗(yàn)常見問題解答

來源:北京凱奧科技發(fā)展有限公司      分類:科技文獻(xiàn) 2020-09-08 14:46:38 5264閱讀次數(shù)
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現(xiàn)象

檢查方案

檢查現(xiàn)象/結(jié)果

可能原因

解決方法

1無樣品峰出現(xiàn)

檢查電流是否穩(wěn)定

沒有電流

毛細(xì)管堵塞或斷裂

用水沖洗毛細(xì)管,并觀察是否有水流出,若無水流出請(qǐng)拆下卡盒檢查毛細(xì)管兩端和窗口是否斷裂;毛細(xì)管沒有斷裂的話可以用水反向高壓沖洗以試圖解決此問題。緩沖溶液需要過濾,將樣品過濾或者離心去除其中的顆粒。

電流波動(dòng)很大,直至幾乎消失

緩沖溶液中有氣泡產(chǎn)生或者區(qū)帶中樣品析出

將緩沖溶液超聲脫氣,如果還有此現(xiàn)象發(fā)生,則可能是樣品區(qū)帶有析出,可以通過降低樣品濃度/延長ramp time來試圖解決這一問題;對(duì)于在緩沖溶液中溶解度不高的樣品則需要在緩沖溶液中加入添加劑以解決此問題。

電流初始值較小,后逐漸增大

樣品進(jìn)樣量過大

減少進(jìn)樣量,通常進(jìn)樣參數(shù)設(shè)置在0.5psi,5sec左右

電流正常

樣品濃度過低

使用高濃度樣品測(cè)試,如果無法解決則有可能是以下其他原因

檢測(cè)波長設(shè)置不正確

請(qǐng)確認(rèn)被分析物的特征吸收,檢查方法中的檢測(cè)波長設(shè)置

分離極性錯(cuò)誤

對(duì)于蛋白樣品,請(qǐng)注意蛋白在分離條件下其PI及所帶電荷;對(duì)于核酸樣品,通常條件下會(huì)帶負(fù)電荷

樣品在毛細(xì)管內(nèi)壁吸附

對(duì)于蛋白及核酸樣品應(yīng)盡量采用涂層毛細(xì)管分離,或采用極端pH條件或動(dòng)態(tài)涂層防止樣品吸附。

光學(xué)檢測(cè)器或光纖損壞

進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)樣品的測(cè)試,如果沒有對(duì)應(yīng)的結(jié)果出現(xiàn),則有可能存在硬件問題,請(qǐng)聯(lián)系工程師

檢查毛細(xì)管窗口

是否有透明窗口

忘記開毛細(xì)管窗口或窗口位置不正

重新開毛細(xì)管檢測(cè)窗口,或?qū)⒋翱谡{(diào)整到正確位置

2 樣品峰出現(xiàn)拖尾

 

 

樣品在毛細(xì)管內(nèi)壁吸附

對(duì)于蛋白及核酸樣品應(yīng)盡量采用涂層毛細(xì)管分離,或采用極端pH條件或動(dòng)態(tài)涂層防止樣品吸附。

3 樣品峰形不對(duì)稱

毛細(xì)管入口

 

毛細(xì)管入口切口不平齊

重新切割毛細(xì)管入口,注意毛細(xì)管切割方法,不可以用力過猛或反復(fù)刮擦

更改樣品溶劑

 

緩沖溶液與樣品溶

液電解率差別過大

可采用緩沖溶液作為樣品溶劑

4 樣品峰過寬

降低樣品進(jìn)樣量

有改善

樣品濃度太大

可降低樣品濃度或減少進(jìn)樣量

無改善

樣品本身性質(zhì)不均一

此原因主要是針對(duì)蛋白樣品,小分子樣品發(fā)生的概率較低

5 遷移時(shí)間不穩(wěn)定

 

出峰時(shí)間不穩(wěn)定且無規(guī)律

緩沖溶液與毛細(xì)管內(nèi)壁平衡較慢

每次樣品運(yùn)行之間避免用NaOH沖洗毛細(xì)管

出峰時(shí)間依次后延

樣品中有物質(zhì)易發(fā)生吸附

首先在每次樣品運(yùn)行之前用0.1N NaOH短時(shí)間沖洗毛細(xì)管,看遷移時(shí)間能否重復(fù),如果效果不佳請(qǐng)使用涂層毛細(xì)管來改善結(jié)果或者將樣品再次處理,以去除樣品中易吸附的組分

6 峰形和出峰時(shí)間不穩(wěn)定

更換緩沖溶液種類

峰形和時(shí)間穩(wěn)定

緩沖溶液不穩(wěn)定,易電解,或者是樣品在原緩沖溶液條件下不穩(wěn)定

更換其它種類的緩沖溶液

峰形和出峰情況仍不穩(wěn)定

樣品中物質(zhì)易在毛細(xì)管內(nèi)壁吸附

可采用涂層毛細(xì)管來克服此問題,或?qū)悠愤M(jìn)行前處理

7 電流泄漏(Current Leakage)

檢查毛細(xì)管是否在窗口處斷裂

毛細(xì)管斷裂

毛細(xì)管內(nèi)緩沖溶液流出造成電流泄漏

更換新毛細(xì)管,并用水清洗光纖頭及檢測(cè)窗口

毛細(xì)管無斷裂

實(shí)驗(yàn)環(huán)境濕度過大

使用抽濕機(jī),并打開儀器Cartridge Cover;如果沒有抽濕機(jī)可以使用空調(diào),在濕度過大的情況下可在儀器關(guān)閉時(shí)放置干燥劑,但是在儀器運(yùn)行時(shí)一定要將干燥劑取出

8 無法加氣壓

檢查瓶塞是否蓋緊或更換瓶塞

更換后問題解決

瓶塞老化,失去彈性

請(qǐng)購買新的瓶塞,并注意瓶塞不可烘干,只能自然晾干

瓶頸處有液體,導(dǎo)致瓶塞易滑

向瓶中裝液體時(shí)不要過滿,也不要沾濕瓶頸

若瓶塞無問題,可先采用真空方式,若真空方式可以使用,但壓力仍不可用

壓力系統(tǒng)問題

請(qǐng)聯(lián)系工程師

9 遷移時(shí)間可重復(fù)但峰面積重復(fù)性不好

重新切割毛細(xì)管兩端

若問題解決

毛細(xì)管入口處不平

重新切割毛細(xì)管入口,注意毛細(xì)管切割方法,不可以用力過猛或反復(fù)刮擦

問題依然存在,嘗試電動(dòng)進(jìn)樣

若電動(dòng)進(jìn)樣可保持重現(xiàn),則壓力控制或氣路存在問題

請(qǐng)聯(lián)系工程師

10毛細(xì)管或電極易折斷

檢查瓶蓋是否老化

 

瓶蓋老化

購買新的瓶蓋

電極是否不垂直

 

電極不垂直

將電極拉直

11 冷卻液泄漏

檢查卡盒內(nèi)墊圈和卡子

 

漏裝或裝錯(cuò)順序

嚴(yán)格按照操作手冊(cè)上的安裝順序安裝

儀器內(nèi)部管路密封不嚴(yán)

請(qǐng)聯(lián)系工程師

12 PDA光強(qiáng)低

檢測(cè)窗口Aperture型號(hào)

 

使用了窄細(xì)縫的Aperture

請(qǐng)?jiān)谑褂肈AD檢測(cè)器時(shí)務(wù)必使用標(biāo)有8的Aperture

13 譜圖基線不穩(wěn)定

先用0.1N NaOH沖洗毛細(xì)管,然后不進(jìn)樣運(yùn)行原方法

基線改善

則為樣品中物質(zhì)有吸附

重新預(yù)處理樣品或更改電泳條件

基線未改善

毛細(xì)管內(nèi)有強(qiáng)烈吸附,或緩沖體系不穩(wěn)定

更換新的毛細(xì)管,不進(jìn)樣,只運(yùn)行緩沖,觀察基線情況

更換新毛細(xì)管后基線仍然不穩(wěn),可采用Run Buffer A測(cè)試

基線改善

緩沖溶液與毛細(xì)管內(nèi)壁平衡較慢

更換緩沖溶液種類,若基線變化對(duì)檢測(cè)無干擾,可保持原來電泳條件

基線無改善

檢測(cè)光源或其他光學(xué)器件不正常

請(qǐng)聯(lián)系工程師

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