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2025-01-21 09:34:37蛋白質高級結構解析: 蛋白質高級結構解析是通過X射線晶體學、核磁共振等技術，解析蛋白質復雜三維結構的過程。它有助于揭示蛋白質的功能、相互作用機制及在生物體內的角色。該方法為生物學研究、藥物研發提供重要依據，促進了對生命現象的理解和新藥的發現。

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遇見“質”愛 — 沃特世蛋白質高級結構解析之氫氘交換質譜技術高端論壇

2022年5月18日，沃特世將舉辦【遇見“質”愛 — 沃特世蛋白質高級結構解析之氫氘交換質譜技術高端論壇】主題研討會，本次研討會將重點討論氫氘交換質譜技術及其在蛋白質構象/相互作用研究中的應用進展

 沃特世科技（上海）有限公司(Waters) 572
2022-05-18
蛋白質高級結構解析氫氘交換質譜技術 HDX MS相關LC-MS 氫氘交換質譜(HDX MS)

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2024-03-05 17:21:07近紅外光譜解析實用指南: 求《近紅外光譜解析實用指南》

2024-01-17 16:04:12雜交瘤技術應用、優缺點、常見問題解析: 雜交瘤技術又稱細胞融合技術，是將兩個或多個細胞融合成一個。融合后形成的雜交瘤細胞承襲了兩親本細胞的特征。自發的細胞融合很少發生，當加入一種融合劑，如：聚乙二醇（常用）、仙臺病毒或溶血卵磷脂后，兩種細胞就可發生融合。首先是質膜互相融合，形成具有兩個或多個核的異核體，細胞進一步分裂時，核互相融合，形成了雜交細胞。雜交瘤技術優缺點：優點：與傳統的免疫動物方法制備抗體相比，利用雜交瘤技術可以制備出高純度的單抗，并且可以進行單克隆抗體的大量生產。缺點：a.操作步驟繁瑣。b.利用雜交瘤技術生產出的單克隆抗體多為鼠源性，而鼠源性抗體在應用中有諸多問題，例如被人類免疫系統所識別，產生人抗鼠抗體( HAMA）反應、在人體循環系統中很快被清除等。雜交瘤技術應用：①診斷應用：單克隆抗體在疾病診斷中發揮了重要作用，其優點在于診斷準確且無交叉反應，例如在乙型肝炎及潛伏的乙型肝炎病毒的診斷中，單克隆抗體能顯著減少假陰性的漏診。②治-療載體：單克隆抗體也可作為治-療疾病的載體。通過與抗腫瘤藥物結合，單克隆抗體能在體內選擇性集中攻擊腫瘤細胞，具有靶向性，從而減少對正常組織的損傷并減輕抗-癌藥物的副作用。因此，載藥單克隆抗體被譽為“生物導-彈”。③異種蛋白質問題：目前大多數單克隆抗體為鼠-鼠型，對于人體來說屬于異種蛋白質，容易引起排異反應，限制了其在治-療中的應用。④人-人型單克隆抗體的研究：為了解決排異問題，研究者正在努力研發人-人型單克隆抗體，以利于其在治-療中的廣泛應用。雜交瘤技術常見問題解析： ①電融合和PEG融合的區別？PEG化學融合是利用聚乙二醇分子能夠改變細胞膜結構的特性來實現細胞融合的過程。聚乙二醇可以使兩個細胞接觸點質膜的脂質分子發生疏散和重組，兩個細胞接觸部位的質膜由于相互親和以及彼此的表面張力作用，從而發生細胞融合。電融合則是先通過高頻交流電壓，使細胞成串珠狀排列，實現點接觸；然后施加方波脈沖，擊穿兩個細胞接觸部位的質膜，質膜脂質分子發生重組，同時由于細胞表面張力作用，完成細胞融合。電融合法比PEG融合法有明顯的優點：細胞融合率高，有利于雜交瘤的篩選；電脈沖擊穿對細胞的損傷小，有利于融合后細胞的生長增殖；可直接觀察融合過程；便于有目的地控制選擇融合條件。 ②為什么要推薦進行2~3輪有限稀釋獲得穩定的雜交瘤細胞株？陽性單克隆細胞的獲得通常進行至少2輪有限稀釋，原因主要考慮兩點。第一，有限稀釋過程中，大多數是通過實驗者在顯微鏡下觀察細胞團狀態來判定是否是單克隆，存在一定的主觀經驗值，至少進行兩輪有限稀釋可以增加判斷的準確性；第二，雜交瘤細胞由兩個細胞融合而成，存在基因的不穩定性，連續2輪有限稀釋，客觀上增加了篩選中細胞培養時間，有利于淘汰不穩定的雜交瘤細胞株。 ③為什么要使用核酸免疫？重組蛋白由于免疫靶向明確、劑量可控等優勢，通常作為動物免疫階段的首-選免疫原。但有些重組蛋白因為表達純化困難，很難大量獲得并用于動物免疫；另外，重組蛋白與天然樣本之間存在或多少的結構差異。而核酸免疫，跳過了蛋白表達純化的過程，成功避開了蛋白生產的難題，通過核酸體內表達的蛋白結構也更加接近天然蛋白，故而可以作為重組蛋白免疫的有效補充手段。但核酸免疫的免疫劑量很難判斷，整體免疫效價也會普遍低于蛋白和多肽免疫。 ④除弗氏佐劑之外，免疫佐劑還有哪些？免疫佐劑是指那些同抗原一起或預先注入機體內能增強機體對抗原的免疫應答能力或改變免疫應答類型的輔助物質。佐劑的免疫生物學作用是增強免疫原性、增強抗體的滴度、改變抗體產生的類型、引起或增強遲發超敏反應等。除經典的弗氏佐劑外，各類不同功能的佐劑也層出不窮，比較常見的有：1）無機佐劑，如磷酸鋁佐劑、氫氧化鋁佐劑；2）生物類佐劑，如以細菌胞壁或產物為主要組成的佐劑；3）具有佐劑活性的細胞因子類，如GSF、IL1、IL2、IFN -γ等；4）人工合成佐劑，如cpG等。 ⑤雜交瘤融合后主克隆接種96孔細胞培養板數量通常是多少？融合后的主克隆細胞接種96孔細胞培養板的數量與融合效率和脾細胞多少有密切關系。PEG化學融合后的主克隆，通常一只小鼠的脾細胞可以接種8-15塊96孔細胞培養板；電融合因為融合效率大大提高，通常一只小鼠的脾細胞可以接種30~50塊96孔細胞培養板。更多雜交瘤技術開發平臺詳情可以關注：https://cn.sinobiological.com/services/platform/hybridoma-development 義翹神州：蛋白與抗體的專業引領者，歡迎通過百度搜索“義翹神州”與我們取得聯系。

2022-10-20 11:24:40多重PCR技術要點解析: 多重PCR概述多重PCR(multiplex PCR)，又稱多重引物PCR或復合PCR，它是在同一PCR反應體系里加上二對以上引物，同時擴增出多個核酸片段的PCR反應，其基本原理與常規PCR相同，區別在于多重PCR反應體系加入一對以上引物，各對引物分別結合在模板相對應部位，最終擴增出一條以上目的DNA片段。多重PCR的特點?高效性：在同一PCR反應管內同時檢出多種基因，或對有多個型別的目的基因進行分型，特別是微量樣本的多基因檢測。?系統性：多重PCR適宜于成組病原體的檢測，如肝炎病毒，腸道致病性細菌，性病，無芽胞厭氧菌，戰傷感染細菌及細菌戰劑的同時偵檢。?經濟簡便性：多種病原體在同一反應管內同時檢出，將大大的節省時間，節省試劑，節約經費開支。多重PCR應用?基因診斷、腫瘤診斷、病原微生物的檢測。?基因分型、連鎖分析。?植物分子育種、基因表達檢測、病蟲害檢測。?病原菌污染檢測。?區域捕獲測序。多重PCR之難多重PCR并不是單純的將多對特異性引物混合成一個體系。多重PCR之所以難，在于多個靶點之間擴增條件不兼容，每個靶點都需要旁邊其他的引物配合。就像是三人兩足游戲一樣，每個靶點成功擴增都是需要綁在一起的兩個人（一對引物）默契配合。而多重PCR就需要所有的選手同時起跑又同時到達，并且所有的選手都達到發揮。多重PCR優化為了達到更好的擴增效果，一般可以通過以下幾個方面進行優化。◆引物的優化：◆反應體系：◆反應條件：◆常見問題解決辦法：多重PCR要求在同一反應體系內對多個位點進行特異性擴增。因而引物間的配對與競爭性擴增均會影響擴增效果。如果能選擇合適的反應體系、反應條件以及更合適的PCR儀，則有望提高多重PCR的擴增效果。所以在進行多重PCR的時候，不應墨守成規，要根據自身實驗情況對實驗條件進行不斷優化，達到擴增效果。

2024-12-19 15:54:42極譜儀結構復雜嗎？有沒有詳細的結構解析？: 極譜儀作為一種常用于分析化學和物理實驗中的儀器，廣泛應用于電化學分析、溶液中的溶質濃度測定及反應機理研究等領域。本文將詳細介紹極譜儀的基本結構，幫助讀者深入了解這一儀器的工作原理及其關鍵組成部分，以便更好地運用其在各類實驗中的優勢。通過對極譜儀各個部分的解析，可以為相關領域的科研人員提供理論支持，幫助提高實驗數據的準確性和可重復性。極譜儀的基本結構極譜儀的核心功能在于通過測量電流與電壓的關系，分析溶液中的物質成分。其結構通常由多個關鍵組件構成，主要包括工作電極、參比電極、輔助電極、電解池、掃描系統以及數據處理系統等。工作電極工作電極是極譜儀的核心部件之一，負責接收從溶液中釋放的電子，并通過電極反應進行電流的測量。工作電極的材質常見的有鉑、金、石墨等，它們具有較高的導電性和較好的化學穩定性，能夠有效避免因電化學反應引起的干擾。參比電極參比電極主要用于提供穩定的電位，確保整個測量過程中電位的準確性與可重復性。常用的參比電極有銀/氯化銀電極（Ag/AgCl）和飽和甘汞電極（SCE）。參比電極的穩定性直接影響到實驗結果的可靠性。輔助電極輔助電極通常用來完成電路的閉合，確保工作電極上的電流可以有效流動。與工作電極不同，輔助電極的主要作用是支持電流的傳遞，而不會參與電化學反應。常用的輔助電極材料為鉑或石墨。電解池電解池是容納溶液并進行電化學反應的容器。在電解池中，溶液的化學成分、離子濃度及pH值等因素將直接影響電流的變化和極譜圖的形狀。因此，電解池的設計和溶液的配制是實驗中非常重要的環節。掃描系統掃描系統通常包括電位掃描儀和電流測量裝置。電位掃描儀負責調節工作電極的電位，以實現對不同電位下的電流變化進行監測。通過電位的逐步掃描，能夠獲取一系列電流與電位的關系數據，從而繪制出極譜圖。電流測量裝置則負責精確記錄電流的變化，并實時將數據傳輸給數據處理系統。數據處理系統數據處理系統是極譜儀不可或缺的一部分，通常包括計算機與相關軟件。通過對實驗數據的分析與處理，能夠幫助科研人員從復雜的電化學反應中提取出有價值的信息，如物質的濃度、反應的速率等。極譜儀的工作原理極譜儀的工作原理基于電化學反應原理，尤其是在還原和氧化反應中的應用。在實驗中，工作電極的電位會逐漸改變，當電位達到某一特定值時，溶液中的某些離子會發生還原或氧化反應，產生相應的電流。

2024-01-19 16:09:13Trx標簽蛋白：深度解析與常見問題解答: 硫氧還蛋白（Thioredoxins）是一系列廣泛存在于生物體內的氧化還原酶，它能通過置換硫代二硫化物來減少二硫鍵的結合。常用作融合表達標簽的硫氧還蛋白A(TrxA), 分量為11.6kDa，來源于大腸桿菌。 TrxA標簽最獨特的優點是它的熱穩定性。TrxA本身不作為親和標簽來進行重組蛋白優化，而是通過在高溫條件下將雜蛋白變性去除而重組蛋白得以保存。TrxA也具有極好的促溶效率，用作促溶標簽時可將重組蛋白的可溶性表達從12%提高至95%。下面是針對trx標簽常見問答解析： ①trx標簽蛋白序列 MSDKIIHLTD DSFDTDVLKA DGAILVDFWA EWCGPCKMIA PILDEIADEY QGKLTVAKLN IDQNPGTAPK YGIRGIPTLL LFKNGEVAAT KVGALSKGQL KEFLDANLAG SGSGHMHHHH HHSSGLVPRG ②帶有trx標簽會不會影響蛋白的抗原性有可能的，trx標簽是比較大的融合標簽，有20多KDa，非常有可能改變蛋白的抗原決定簇。一般為了不影響蛋白的功能，會在trx標簽和目標蛋白之間加一個酶切位點，比如腸激酶的位點DDDDK，把trx標簽去除掉。 ③TRX標簽蛋白怎么純化一般這個載體中都會有His 標簽，直接用鎳柱純化即可 ④常見的蛋白標簽有哪些？有什么特點？常見的蛋白標簽有His-Tag、FLAG-Tag、HA-Tag、Myc-Tag、SUMO-Tag…… His-Tag主要應用：蛋白純化優選，也可用于檢測。特點：? 分子量小，不影響目的蛋白的可溶性、結構和功能。? 可在非離子型表面活性劑存在/變性條件下純化，前者在純化疏水性強的蛋白得到應用，后者在純化包涵體蛋白時表現突出。? 可應用于多種表達系統，純化的條件溫和。? 可以和其它的親和標簽一起構建雙親和標簽。? 免疫原性相對較低。 FLAG-Tag主要應用：廣泛的應用于蛋白表達、純化、鑒定、功能研究及其蛋白相互作用等相關領域，在真核表達系統中表達效率更高。特點：? 分子量小，不影響融合蛋白功能，比同類標簽更具親水性。? 目的蛋白可直接通過FLAG標簽進行親和層析，此層析為非變性純化，可以純化有活性的融合蛋白且純化效率高。? 可以被抗FLAG抗體所識別，便于通過WB、ELISA等方法對含有FLAG標簽的融合蛋白進行檢測、鑒定。? 融合在目的蛋白N端的FLAG標簽，其可以被腸激酶切除（DDDK），從而得到特異的目的蛋白。更多關于蛋白標簽詳情可以參看：https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag 義翹神州：蛋白與抗體的專業引領者，歡迎通過百度搜索“義翹神州”與我們取得聯系。