
- 2025-01-10 10:49:53骨微觀力學失效行為研究前處理
- “骨微觀力學失效行為研究前處理”是指在進行骨的微觀力學失效行為研究之前,對骨樣本進行的一系列預處理工作。這包括樣本的選取、清洗、干燥、切割、打磨及必要的化學或物理處理,以確保樣本符合測試要求,減少實驗誤差。前處理過程對后續力學測試和數據分析至關重要,能直接影響研究結果的準確性和可靠性。通過精確的前處理,可以更有效地探究骨組織在微觀層面的力學性能和失效機制。
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- 為了更好地進行AFM原子力顯微鏡測試,需要對試樣進行前處理。
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骨微觀力學失效行為研究前處理問答
- 2023-05-30 10:15:02課堂 | 研究天然聚合物精細細節的微觀結構
- 結合掃描電子顯微鏡的冷凍寬幅離子束銑削(Cryo-BIB-SEM)本報告評估了結合使用冷凍寬幅離子束銑削和掃描電子顯微鏡(cryo-BIB-SEM)對低溫穩定柔性聚合物的微觀結構進行成像和分析的潛能。報告介紹了使用cryo-BIB-SEM對易損天然聚合物進行檢查的結果,例如番茄果皮和木材,還分析了聚合物表面形態和多種微觀結構特性。聚合物的微觀結構控制它們的化學反應性以及機械和傳輸特性。然而,由于亞微米等級的分析方法比較少,通常無法對柔性聚合物的微觀結構進行定量表征,或不具備相關的可行性條件。冷凍斷裂是少數可用的方法之一,但通過這種工藝制備的樣本表面通常過于粗糙,導致制備好的樣本上只有極小一部分區域適合定量SEM研究。本報告中的結果顯示,使用cryo-BIB-SEM可以對完好的樣本橫截面上的較大平面區域進行高清晰成像,更好地對柔性聚合物進行微觀結構表征。在觀察過程中,在通過cryo-BIB-SEM樣本制備工藝加工的樣本中,僅發現極少量的偽影,而且均非冷凍導致。介 紹聚合物微觀機構會影響聚合物的機械和傳輸特性,進而決定了材料的耐久性以及對風化、冷熱和光照的耐受性,因此聚合物微觀結構的精確表征非常重要。各類聚合物,無論是柔性、硬質、天然還是合成,都是如此。Cryo-BIB-SEM可對表面完好的大尺寸低溫穩定樣本的微孔進行高清晰成像和化學分析。在上一篇報告中,使用Cryo-BIB-SEM研究了鋰離子電池電極在干燥過程中的微觀結構[1]。本報告中使用cryo-BIB-SEM表征了天然聚合物,包括木頭和水果蔬菜的表皮。如前文所述,需要以亞微米級清晰度精 準確定柔性聚合物的微觀機構。然而,很少有方法能夠在如此高分辨率下對這種柔性樣本進行表征。另外,由于冷凍斷裂工藝制備的柔性聚合物樣本的表面過于粗糙,使用SEM或能量色散譜(EDS)進行定量分析時,僅能夠準確研究很小一部分的表面區域。而且有機材料往往會發生膨脹收縮,使用SEM進行樣本制備和測量時,尤其是對于高水分含量的材料,通常很難在材料的原生狀態下進行分析。微型計算機斷層成像(μCT)和SEM低溫聚焦離子束銑削(cryo-FIB-SEM)等方法的分辨率則通常過低或獲得的結果不具代表性。本應用注意事項介紹了使用cryo-BIB-SEM在高分辨率(亞微米級)下對柔性、易損天然聚合物(木材和番茄表皮)的微觀結構進行表征的過程。Cryo-BIB-SEM材料和方法Cryo-BIB可制備具有大平面區域的冷凍穩定橫截面(可達4 mm2)。樣本制備中包含快速冷卻(淬火)步驟,可形成整齊的聚合物切口并大大降低造成斷裂、變形等損壞的風險。使用液氮-雪泥對樣本進行淬火,然后將樣本快速轉移至一個溫度保持LN2水平的低溫冷卻階段(圖1a)[2]。使用金剛石鋸在鈦(Ti)掩模上方幾十納米處切割低溫冷卻樣本,鈦掩膜在后續的濺射鍍膜過程中遮蔽樣本。使用cryo-BIB氬(Ar)離子束銑削,制備平整的大橫截面。接下來,根據所需的信息類型,可以使用兩種制備和成像方案,可以是EDS成分數據或使用SEM獲得的精細結構的高清晰圖像。在第 一個方案中(圖1b),樣本經濺射鍍膜處理以方便EDS/SEM分析并提供各階段紋理和成分的信息。在第二個方案中,樣本未經過鍍膜處理,以便于滲入多孔表面中的水升華。這樣一來,之前被水隱藏的樣本微觀結構便可以完全顯現出來。使用徠卡顯微系統的EM TIC 3X離子束銑削系統對木材和番茄皮(天然聚合物)樣本進行冷凍寬幅離子束(cryo-BIB)銑削。將經BIB銑削的樣本放進SEM(Supra 55,蔡司)之前,首先使用徠卡顯微系統的EM ACE600鍍膜機的濺射、碳蒸發和電子束蒸發配置對樣本濺射鍍膜一層薄薄的鎢(W)。鎢層可防止不導電樣本被電子束輻射時充電。圖1a:cryo BIB-SEM樣本制備工作流程使用EM TIC 3X系統執行cryo-BIB,使用EM ACE600系統進行濺射鍍膜。圖1b:cryo-BIB-SEM研究中使用的2個方案的原理圖,用于研究樣本的:1)紋理和成本,和2)滲水后的精細亞微米結構。結 果分析柔性天然聚合物的主要目的是驗證cryo-BIB-SEM方法在樣本制備和分析過程中保存樣本的精細和易損結構的能力。一個特別目標是確定使用cryo-BIB-SEM樣本制備工藝制備的橫截面的質量,即樣本橫截面是否存在偽影或損傷。番茄皮從一個新鮮番茄(圖2a)上切一小塊皮,然后按照圖1中的工作流程進行制備,并按照方案2進行分析。番茄皮含有大量水分,微觀結構非常復雜,因此是評估樣本制備過程中因形成冰晶而發生斷裂的可能性的理想材料。圖2b中顯示了一個番茄皮的橫截面,在橫截面的上部可以看到一小片鈦掩膜,掩膜上積聚了一些“濺射灰塵”。番茄細胞的精細結構清晰可見,細胞形狀非常類似于之前光學顯微鏡觀察文獻中報告的形狀[3]。cryo-BIB-SEM方法的清晰度更高,可以分析易損微觀結構的精細細節(圖2c)。低溫冷卻和切割過程中未發現造成任何損傷,這說明cryo-BIB-SEM方法可以為柔性易損天然聚合物分析制備無損傷、缺陷的樣本。圖2a:切割番茄的示例,表皮上標注了橫截面(藍色長方形)。使用cryo-BIB-SEM研究了這種樣本。2b:Cryo-BIB-SEM圖像顯示了大片的番茄表皮橫截面樣本。圖2c:2b中使用cryo-BIB-SEM獲得的清晰度更高的番茄表皮橫截面圖像顯示了微觀結構的精細細節。Cryo-BIB-SEM成像可揭示松木(樟子松)的細胞和微觀形態。寬幅離子束銑削方法制備的細胞壁表面,上面沒有切片機切割等制備方法造成的偽影。EDS提供了不同木材相位的成分,例如細胞膜質中的碳(C)和因細胞中含有大量的水而存在的氧氣(O)[4]。圖3a:Cryo-BIB-SEM方法獲得的松木圖像(SE2),上面顯示了管胞(樹的木質部運輸組織的伸長細胞)的微觀形態和紋孔(細胞間流體交換的細胞壁部分)。3b:使用cryo-BIB方法制備的松木的EDS圖像(3a中的相同區域)細胞膜質中的碳(C,紅色)信號和木材細胞所含水的氧氣(O,藍色)。概述與結論我們已經介紹了cryo-BIB-SEM是一種可以研究易損柔性天然聚合物的橫截面的有效表征方法(番茄表皮和木材)。可對無損傷番茄表皮和木材細胞的微觀結構的精細細節進行高清晰成像。另外,cryo-BIB-SEM樣本制備過程中,未發現因制備而導致的斷裂或樣本損傷。參考文獻:1.S. Jaiser, J. Kumberg, J. Klaver, J.L. Urai, W. Schabel, J. Schmatz, P. Scharfer, Microstructure formation of lithium-ion battery electrodes during drying - An ex-situ study using cryogenic broad ion beam slope-cutting and scanning electron microscopy (Cryo-BIB-SEM), J. Power Sources (2017) vol. 345, pp. 97-107, DOI: 10.1016/j. jpowsour.2017.01.1172.J. Schmatz, J. Klaver, M. Jiang, J.L. Urai, Nanoscale Morphology of Brine/Oil/Mineral Contacts in Connected Pores of Carbonate Reservoirs: Insights on Wettability From Cryo-BIB-SEM, SPE Journal (2017) vol. 22, iss. 05, DOI: 10.2118/180049-PA.3.R. Metzner, H.U. Schneider, U. Breuer, W.H. Schroeder, Imaging Nutrient Distributions in Plant Tissue Using, Time-of-Flight Secondary Ion Mass Spectrometry and Scanning Electron Microscopy, Plant Physiology (2008) vol. 147, pp. 1774–1787, DOI: 10.1104/ pp.107.109215.4.M. Nopens, J. Schmatz, Saturated pine wood sample, Pinus sylvestris, 2017, MaP Microstructures and Pores.
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- 2022-04-14 14:32:30微觀驅油機理研究重要設備之微觀可視化驅油工作站
- VMF100 微觀可視化驅油工作站是北京東方德菲儀器有限公司與中石油勘探開發研究院提高采收率國家重點實驗室共同研發生產的系統集成型可視化驅油系統。 VMF100 微觀可視化驅油工作站,通過可視化的微流控技術,記錄和分析驅替液在微納尺度通道芯片中的驅油過程。VMF100 是定量描述不同化學驅油體系微觀驅油機理的實驗工作站,高效識別剩余油,并表征高含水期微觀剩余油的滲流特征,VMF100工作站具有高集成化、高操控精度、芯片多樣化、 分析可視化等特點,是微觀驅油機理研究必不可少的設備之一。微觀可視化驅油工作站由原油注入系統、驅替液壓力注入系統、壓力監測系統、芯片密封系統、微納孔道芯片,微觀視頻系統、操作分析軟件組成。該工作站可以記錄和控制飽和油及驅替的動態過程,評價剩余油再啟動能力,并分析剩余油的滲流特征。微觀可視化驅油工作站的功能:1、基礎功能---剩余油分析:---視頻記錄飽和油的動態過程---視頻記錄驅油的動態過程---實時記錄驅油壓力的動態變化---分析不同類型剩余油的數量分布---分析不同類型剩余油的面積分布2、拓展功能---孔道參數:---孔道配位數分布---孔道孔喉比分布---孔道等效半徑分布---孔道最窄半徑分布3、拓展功能---微觀接觸角:---自動識別微觀孔道接觸角---孔道微觀接觸角概率密度曲線
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- 2023-05-15 13:11:25乳品電子舌味覺檢測前處理方法
- 乳制品涉及到的產品種類較多,如牛奶、酸奶、黃油、奶酪、芝士、奶油、乳飲料等,乳品的電子舌味覺檢測不同的樣品前處理的方式也是不同的,合適的前處理方式與測試結果的準確性有很大關系。1、牛奶可直接用于測定;<注意> 常規使用的“兩步清洗"模式,可能會有殘留而影響到回味的CPA值測定,推薦使用“三步清洗"模式。2、乳酸菌飲料可直接用于測定;如果是冰箱冷藏儲藏的樣品需要提前拿出待溫度恢復至室溫后上機測試。3、牛奶咖啡等含牛奶的飲品可直接用于測定;如果是冰箱冷藏儲藏的樣品需要提前拿出待溫度恢復至室溫后上機測試。<注意> 常規使用的“兩步清洗"模式,如果殘留較多影響到回味的CPA值測定,推薦使用“三步清洗"模式。4、酸奶液體酸奶(1)將樣品恢復至室溫; (2)充分攪拌;(3)攪拌均勻后的溶液作為待測樣品溶液;<注意>推薦使用“三步清洗"模式凝固型酸奶(1)將樣品恢復至室溫;(2)用玻璃棒充分攪拌至均勻;(3)準確稱取120g凝固型酸奶置于燒杯中;(4)加入120g純水(稀釋成原重量的2倍); (5)使用電動打蛋器攪拌30秒;(6)再用玻璃棒充分混合均勻后的溶液作為待測樣品溶液;5、黃油含鹽黃油(1)取樣若干(>50g),以奶酪樣品為例,保證樣品一致; (2)混勻,將樣品放于食品料理機中,打碎攪拌1min;(3) 稱量,確定樣品完全混勻后,準確稱取50g樣品于料理機中;(4)加水,按照1:5的比例添加40°的蒸餾水; (5) 混勻,在料理機中混勻1min;(6) 離心,確定樣品混合均勻后,放于離心機中離心,3000rpm,離心10min;(7) 分層取樣,離心后靜置分層移液管取上清液測試。無鹽黃油(1)準確稱取15g無鹽黃油置于燒杯中(2) 加入85g溫度為60℃的純水(3)使用電動打蛋器攪拌1分鐘(4)冷卻至室溫后,進行離心分離10分鐘(轉速為3000rpm)(5) 取離心分離后的水層部分,并加入相當于水層部分重量一半的基準液(使最終稀釋后得到的樣品溶液中,基準液占比1/3)(6)充分攪拌均勻后,得到待測樣品溶液。6、芝士(1)準確稱取30g芝士置于食物料理器中;(2)加入120g溫度為40℃的純水(稀釋成原重量的5倍);(3)使用食物料理器攪拌1分鐘;(4)冷卻至室溫后(用水冷卻后或冷卻后),離心分離10分鐘(轉速為3000rpm);(5)取離心分離后的水層部分為待測樣品溶液。7、奶油(生奶油、鮮奶油)(1)準確稱取40g奶油置于燒杯中;(2)加入160g純水(稀釋成原重量的5倍);(3)使用電動打蛋器攪拌1分鐘;(4)進行離心分離10分鐘(轉速為3000rpm);(5) 采取離心分離后的水層部分作為待測樣品溶液;<注意> 含有動物性脂肪的情況下,請使用溫度為40℃的純水進行稀釋,并冷卻到室溫后(用水冷卻后)再進行離心分離處理。8、冰淇淋(1)待冷凍樣品恢復至室溫后,準確稱取50g置于燒杯中(2) 加入100g純水(稀釋成原重量的3倍)(3) 使用磁力攪拌器攪拌10分鐘(轉速為500~600 rpm),或者使用食物料理器或電動打蛋器攪拌1分鐘(4) 進行離心分離10分鐘(轉速為3000rpm)(5)取離心分離后的水層部分作為待測樣品溶液。9、含牛奶產品牛奶布丁(1)準確稱取60g牛奶布丁置于食物料理器中;(2)加入180g純水(稀釋成原重量的4倍);(3)使用食物料理器攪拌1分鐘;(4)所得的溶液作為待測樣品溶液;
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- 2023-04-28 15:37:51【參會邀請】甘肅省樣品前處理技術創新大會
- 會議介紹 本次大會以“樣品前處理創新理念”為主題,邀請高效及科研院所老師、食品、生態環境監測、疾控、生物醫藥等檢驗檢測機構的管理及技術人員,共同交流探討實驗室樣品前處理前沿技術及遇到的相關問題,為實驗室分析測試效率的提高、成本的控制等,提供有效的解決辦法。會議時間2023年5月12日會議地點甘肅萬壽宮大酒店甘肅蘭州七里河區河灣堡西街52號主辦單位甘肅省分析測試中心甘肅省分析測試技術與儀器學會大會議題展品介紹Pribolab?標準品產品優勢:1.Pribolab目前有800多種固/液標準品,涵蓋食品、飲料、糧油、魚貝等基質;2.13C、15N穩定同位素內標實現國產化,全碳標記穩定性強,檢測效率更高,3.標準品的品質和純度高達99%以上;4.可提供不同規格,不同濃度定制化產品。Pribolab?MDS3000 Plus多功能柱后衍生系統適用于分析食品、飼料、臨床、藥物、環境等領域中的黃曲霉毒素、游離甲醛、伏馬毒素、河豚毒素、六價鉻、多種抗生素、12種氨基甲酸酯(克百威、涕滅威等)、麻痹性貝類毒素、草甘膦等多種物質。
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- 2023-03-07 22:09:15高通量單細胞力譜測定!多功能單細胞顯微操作技術助力單細胞力學研究
- 單程細胞具有復雜生物學性質,它們通過細胞外基質ECM形成緊密的細胞與基質細胞與細胞連接,諸如上皮細胞通過這種特殊的鏈接方式構成了屏障層保護人體免受外界損傷。因此細胞之間以及細胞基底的粘附力測定對于研究細胞粘附蛋白的機制有著重要意義。使用力學工具測量細胞間以及細胞與基質之間的粘附力始終不是一件容易的事情。首先,由于細胞與基質的作用力僅為nN級別,因此需要力學精度較高的設備才能夠測量,而且在這其中較為適合的工具為原子力顯微鏡(AFM)。原子力顯微鏡能夠提供納米級別的操作精度并可測量從pN~nN范圍的力譜。但是受制于AFM探針本身的限制,需要借助修飾手段才能夠讓細胞與探針固定到一起,這個過程十分繁瑣,并且由于需要大量手工操作很難實現高通量的測量。而不同的細胞由于細胞異質性使得要想確定粘附力需要較多樣本才能獲得相對準確的值,無法實現高通量測量直接限制了原子力探針在細胞粘附力上的應用。而多功能單細胞顯微操作FluidFM技術的出現改變了這一現狀,它使用特殊的中空探針能夠輕松地通過負壓抓取細胞,取得和AFM近似精度的數據,無需在探針上進行任何修飾,不會改變細胞表面的任何通路,從而能夠得到接近細胞原生的數據。在實驗結束后能夠通過正壓快速丟棄用過的細胞,具備很高的自動化,能夠快速測量細胞粘附力。使用FluidFM對細胞操作的基本流程 FluidFM在粘附力測量上具備顯著優勢。如圖所示,FluidFM能夠通過負壓將細胞吸附到原子力探針的末端,通過高精度位移臺的控制將細胞從基底上分離,并且同時記錄FD曲線。通過FD曲線能夠獲得最大粘附力Fmax和粘附能量Emax。通過高度自動化的控制系統能夠在短時間內測量大量細胞粘附力,評估細胞群體分布以及細胞間差異,并且可有效避免傳統粘附力測量因準備時間過長而錯過最佳測量時間導致的細胞粘附力改變,得到更為精準的結果。近期,Agoston等人使用多功能單細胞顯微操作系統FluidFM實現了高通量細胞粘附力測量,對同種細胞不同區以及不同細胞之間的粘附力進行測量和比較。作者首先對Vero和Hela細胞在不同狀態下的粘附力進行了測量和比較,總共測量了214個細胞。通過比較明膠涂層上處于單個細胞、孤島狀細胞、致密連接細胞以及單層細胞上游離細胞之間的粘附力,能夠明顯觀測到Vero細胞處于致密連接的細胞粘附力最大,大概在750 nN左右,隨著細胞單細胞層的稀疏,細胞粘附力有所下降,而處于細胞層頂部的細胞粘附力最低僅為50 nN左右。這一點充分說明上皮細胞能夠在細胞之間形成緊密的連接,而處于細胞層外的細胞則幾乎沒有粘附力。而對于HeLa這樣的腫瘤細胞測量的結果卻顯示出了截然不同的結果,處于不同狀態的細胞有著近似的粘附力,基本都在200 nN左右,這與處于單個游離上皮細胞的粘附力十分接近,表明HeLa細胞在不同環境下仍然具有較高遷徙能力。使用FluidFM對不同區域細胞的FD曲線測定結果和對比 通過對這兩種細胞的最大粘附力、最大粘附能量、最大拉伸距離和細胞接觸面積進行統計分析可以發現,HeLa腫瘤細胞在粘附力和粘附能量上均有所降低,但是當HeLa細胞形成了單層后,兩者區別不大。對比Hela和Vero在不同生長狀態下的最大粘附力、最大粘附能量、粘附拉伸距離和粘附面積。再進一步對Vero與HeLa細胞最大粘附力與距離和接觸面積進行對比,依然可以得到與單獨比較粘附力相同的結果,并且最大能量與細胞接觸面積的比值中也存在著類似的結果。由此可見腫瘤細胞通過降低自身粘附力從而獲得了更好的遷移能力。對不同狀態Vero和A549之間的粘附力/粘附距離、粘附力/粘附面積、粘附能量/粘附面積 總結 細胞粘附力測定在細胞生命科學研究中起著至關重要的作用,然而傳統手段中有著各種各樣的局限性,主要原因是缺乏一種有效抓取細胞并進行力學測定的手段。現如今FluidFM技術在細胞粘附力測定中的應用,使得研究者們有了一種能夠有效、低損的方式抓取細胞,配合原子力顯微鏡精確測量的特性,真正意義上做到精準、無損、快速的測量單細胞粘附力,幫助研究者尋找細胞粘附力與細胞生命發展、腫瘤細胞轉移之間的關系。 【參考文獻】[1] A. Sancho, M. B. Taskin, L. Wistlich, P. Stahlhut, K. Wittmann, A. Rossi & J. Groll. Cell Adhesion Assessment Reveals a Higher Force per Contact Area on Fibrous Structures Compared to Flat Surfaces. ACS Biomater. Sci. Eng. 2022, 8, 2, 649–658.[2] P.W. Doll, K. Doll, A. Winkel, R. Thelen, R. Ahrens, M. Stiesch & A.E. Guber. Influence of the Available Surface Area and Cell Elasticity on Bacterial Adhesion Forces on Highly Ordered Silicon Nanopillars. ACS Omega. 2022, 7, 21, 17620–17631.[3] Sankaran, S. Jaatinen, L. Brinkmann, J. Zambelli, T. V?r?s, J. Jonkheijm, P. Cell adhesion on dynamic supramolecular surfaces probed by fluid force microscopy-based single-cell force spectroscopy. ACS Nano 2017, 11, 3867–3874.[4] Sancho, A. Vandersmissen, I. Craps, S. Luttun, A. Groll, J. A new strategy to measure intercellular adhesion forces in mature cell-cell contacts. Sci. Rep. 2017, 7, 46152.[5] Ines, Lüchtefeld. Alice, Bartolozzi. Julián M. M. Oana, Dobre. Michele, Basso. Tomaso, Zambelli. Massimo, Vassalli. Elasticity spectra as a tool to investigate actin cortex mechanics. J Nanobiotechnol. 2020, 18, 147.[6] Dehullu, J. Valotteau, C. Herman-Bausier, P. Garcia-Sherman, M. Mittelviefhaus, M. Vorholt, J. A. Lipke, P. N. Dufrene, Y. F. Fluidic force microscopy demonstrates that homophilic adhesion by Candida albicans Als proteins is mediated by amyloid bonds between cells. Nano Lett. 2019, 19, 3846–3853.[7] Mittelviefhaus, M. Müller, D. B. Zambelli, T. Vorholt, J. A. A modular atomic force microscopy approach reveals a large range of hydrophobic adhesion forces among bacterial members of the leaf microbiota. ISME J. 2019, 13, 1878–1882.[8] F. Weigl, C. Blum, A. Sancho & J. Groll. Correlative Analysis of Intra- versus Extracellular Cell Detachment Events vis the Alignment of Optical Imaging and Detachment Force Quantification. Adv. Mater. Technol. 2022, 2200195.【相關產品】 多功能單細胞顯微操作系統- FluidFM OMNIUM:http://www.189-cn.com/zt2203/product_386418.html
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