Folin—酚試劑

原理：Folin-酚法：（Lowry法）這種蛋白質測定法是比較靈敏的方法之一。Folin—酚試劑中的磷鉬酸鹽—磷鎢酸鹽被蛋白質中的酪氨酸和色氨酸殘基還原，產生深藍色（鉬蘭和鎢蘭的混合物）。在一定的條件下，藍色深度與蛋白的量成正比。

技術指標：本試劑盒可測定蛋白濃度0.05--1mg/ml。當蛋白濃度范圍在0.05-0.5mg/ml范圍時，線性關系好。標準曲線相關系數：R2大于0.99.

1.Folin—酚試劑甲

溶液I： 2g無水碳酸鈉和20mg酒石酸鈉溶于100ml 0.2mol/l氫氧化鈉中（已配制成5X，用時稀釋5倍，使用完需另配)。

溶液Ⅱ： 0.5g五水硫酸銅溶于100ml水溶液。

將稀釋后的溶液I與溶液Ⅱ，以50：1的比例混合，混合后即為Folin—酚試劑甲，此試劑只能用一天，過期失效。

2.Folin—酚試劑乙

原液濃度為2moL/L使用前需稀釋一倍，用多少稀釋多少。使其后濃度為1moL/L。此為Folin—酚試劑乙應用液。Folin—酚試劑乙原液平時應密封貯存于4℃冰箱中避光保存。

3.操作方法

標準曲線的制作

取14支試管分成兩組，按下表順序加入試劑，混勻，于室溫放置10分鐘。再加入0.5毫升試劑乙，立即搖勻，在室溫放置30分鐘，然后于500nm處比色。測定光密度值。取兩組測定的平均值，以蛋白質濃度為橫座標，光密度值為縱座標，繪制標準曲線為定量的依據。

樣品測定：

（1）取1毫升樣品溶液（約含20-250微克多肽或蛋白質）加入5毫升試劑甲混勻，于室溫放置10分鐘。

（2）加入0.5毫升試劑乙（folin—酚），立即搖勻，于室溫保溫30分鐘；然后500nm（根據使用情況）處比色，以1毫升水代替樣品作空白對照。測定后，可以從標準曲線中查出未知樣品濃度。

若用0.5厘米光程的比色杯進行比色，可按下面方法進行操作：取0.2毫升樣品溶液（約含5-100微克多肽或蛋白質），加入1毫升試劑甲（可選用0.3-0.5厘米直徑的小試管）混勻，10分鐘以后，再加入0.1毫升試劑乙，立即混勻，30分鐘后比色，一般來說，若多肽或蛋白質濃度在2-25微克，則采用波長755nm,而25微克以上則采用500nm比色為宜（波長選擇依使用情況）。

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