產品簡介

Plant Tissue Direct PCR Kit (With Dye)植物組織直接PCR試劑盒是一款可直接對不同類型植物葉片進行PCR擴增的試劑盒，適應性廣、穩定性強。試劑盒采用獨特的裂解緩沖液體系，可以快速的裂解多種植物樣品并釋放出基因組DNA，不需要除去蛋白、RNA或次生代謝產物等，即可將釋放出的基因組DNA作為模板直接用于PCR反應。此外，樣品使用量少，低至1 mm植物葉片即可進行實驗。

本試劑盒中提供的2× Plant Master Mix具有很強的擴增兼容性，能直接以待測樣品裂解液為模板，進行高效特異性擴增。該試劑為2倍濃縮PCR反應混合液，包含了用于PCR擴增除模板和引物外的所有組分，大大簡化操作過程，降低污染幾率。

該試劑盒可用于轉基因植株鑒定、植物基因分型等。

組分信息

*2× Plant Master Mix：包含熱啟動Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl₂、反應緩沖液、PCR反應增強劑、優化劑以及穩定劑等，同時包含電泳Loading Buffer，PCR完成之后可直接電泳。

儲存條件

1. 試劑10187-A【Buffer P1】，置于2-8℃保存。有效期1年。

2. 試劑10187-B【Buffer P2】，中和裂解產物，利于更長時間保存樣本，置于2-8℃保存。有效期1年。

3. 試劑10187-C【2 × Plant Master Mix】，-25~-15℃保存，避免反復凍融。有效期1年。

使用說明

1. 植物葉片

1. 1、研磨裂解法：

a. 研磨儀破碎：將直徑5 mm左右的葉片置于50 μL Buffer P1中，用研磨儀加鋼珠（鋼珠直徑3mm左右，共2個）破碎葉片（45 Hz，1 min），葉片破碎后溶液呈現綠色，瞬時離心，上清液請放在4℃備用，取1 μL用于PCR擴增。

b. 槍頭搗碎：推薦使用幼嫩葉片。將直徑5 mm左右的葉片置于50 μL Buffer P1中，用槍頭將葉片搗碎，搗碎后溶液呈現綠色，瞬時離心，上清液請放在4℃備用，取1 μL用于PCR擴增。

2. 1、加熱裂解法：推薦使用幼嫩葉片。將直徑5 mm左右的葉片置于50 μL Buffer P1中，95℃加熱5-10 min（確保裂解液完全浸沒葉片），較難裂解的葉片（老葉片）可適當延長時間（10-20 min），加熱裂解后溶液呈現綠色，震蕩混勻，瞬時離心，上清液請放在4℃備用，取1 μL用于PCR擴增。
3. 1、直接法：推薦使用幼嫩葉片。使用打孔器或者刀，將直徑1 mm左右的葉片直接加入到PCR反應體系中；復雜樣本或者是長片段的擴增，推薦使用直徑<1 mm的葉片。

2. PCR反應體系

表1 反應體系

【注】：各組分使用前應充分混勻。

1. 模板加入量：小于PCR反應體系的5%，過多會嚴重抑制PCR反應，強烈推薦加入1 μL模板。葉片直擴優先推薦研磨儀裂解法。
2. 引物終濃度：0.2-0.25 μM可以得到較好結果。反應性能較差時，可在0.1-0.5 μM范圍內調整引物濃度。
3. 反應體系：推薦使用20 μL或50 μL，以保證目的基因擴增的有效性和重復性。
4. 體系配制：配制好PCR反應體系，置于渦旋儀上渦旋混勻，瞬時離心將反應液集于管底。
5. 對照反應：建議進行PCR時，設置陽性和陰性PCR對照反應以便于排除假陽性或假陰性的干擾。
6. 為了更穩定的保存裂解后的模板，將轉移出來的上清液，按照裂解產物（DNA模板）：Buffer P2 = 5:1的比例混合，混勻后-20℃保存，穩定保存隨時間和樣本狀態不同而有所不同。如果處理后的植物葉片上清液一周內用于PCR擴增，不用加Buffer P2，上清液請保存在-20℃。

3. 反應條件

【注】：

1. 退火溫度：請參考引物的理論 Tm 值，退火溫度可設置低于引物理論值 2-5℃。
2. 延伸時間：需要根據片段的長度來確定，對于1 kb以內的DNA片段，建議延長時間為1 min。

注意事項

1. 做葉片實驗時，建議使用新鮮采取的葉片組織，若為長期冷凍組織，需-80℃保存，應盡量避免反復凍融，以免造成模板降解，影響PCR效率。葉片組織以幼嫩為宜，若為成熟的葉片，避免使用葉片主脈部位組織。
2. 建議擴增片段長度1 kb以內，以便擴增效率最佳。
3. 取樣時使用打孔器或者刀取適宜大小的樣本，樣本不同時，打孔器或者刀每次處理樣本前需清洗干凈。
4. 對于葉片組織，建議取1-10 mm的葉片，過小會使PCR擴增產量低，過多會抑制PCR反應，采用加熱裂解法、槍頭搗碎、研磨儀破碎的方式處理植物葉片，處理后需震蕩離心，務必取上清液試驗，沉淀會嚴重抑制PCR反應。
5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
6. 本產品僅作科研用途！

常見問題與解決方法

Ver. CN20231102