產品簡介

YEASEN ECl系列發光試劑盒用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶（HRP）的抗體及其關聯的抗原。其原理是，蛋白質或核酸在電泳后轉移到印跡膜上，以一抗及HRP標記的二抗結合膜上的目的蛋白，或以HRP標記的探針直接或間接結合膜上的核酸。洗膜后用本產品配制的ECL工作液，室溫孵育膜數分鐘，將印跡膜用保鮮膜包被粘貼固定于X光片曝光暗盒。然后轉入暗室將X光膠片壓在膜上曝光數秒到數小時，顯影定影后蛋白質或核酸條帶可清晰顯示在X光膠片上。

本試劑盒(SuperSignal SuperDura Extended Duration Substrate)采用了獨特的發光/增強底物系統，可實現中等飛克級的免疫印跡檢測。除用于X光片，還可通過CCD成像儀檢測

產品特點

1. 具有極高靈敏度和高信噪比，可檢測中等飛克級抗原；
2. 信號可持續24小時，發光時間比常規ECL底物長10倍以上；可通過多次曝光獲得用于發表論文的高品質印跡圖像；
3. 可使用較高的抗體稀釋倍數，大大節省抗體：

  一抗（儲液濃度1mg/ml）稀釋倍數：1:1000-1:50000；

  二抗（儲液濃度1mg/ml）稀釋倍數：1:50,000-1:250,000。

產品組分

儲存條件

2~8℃保存。有效期1年。【注】：A液（36223-A）需避光保存！

使用說明

【較理想的Western blot 結果需要優化所涉及的各個實驗環節，如樣品上樣量、凝膠類型、轉膜方法、膜類型、封閉試劑、一抗濃度、二抗濃度及相應孵育時間等。另外，每個環節盡量提供足量的孵育試劑，以避免膜干燥。】

1. 執行常規電泳、轉膜、HRP標記抗體或者HRP標記核酸探針孵育、洗膜。

【注】：ECL發光液是HRP的顯色底物，因此檢測系統最終必須基于HRP酶標記抗體或者核酸探針。

2. 最后一次洗膜的同時，新鮮配制發光工作液：分別取等體積的A液和B液，混勻后，室溫放置備用。

【注】：取A液和B液一定要用不同的槍頭。

3. 用平頭鑷取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液，勿使膜完全干燥。將膜完全浸入發光工作液（100~200μl發光工作液/cm2膜）中，與發光工作液充分接觸。室溫孵育3-5分鐘，準備立即壓片曝光。。

【注】：孵育時間過長不會增加靈敏度，有時還會導致曝光條帶異常。發光過程的本質是酶促反應，使用過少的發光工作液不利反應進行，也會導致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達節約目的可將膜剪小，但勿降低發光液使用比例。

4. 用平頭鑷子夾起膜，膜的下緣輕輕接觸吸水紙，去除膜上多余的液體，留下少量工作液，不可讓膜完全干燥。不可洗去

發光液。

5. 在X光膠片暗盒內表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將印跡膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來完全包裹印跡膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發光工作液。用膠帶將覆蓋印跡膜的保鮮膜固定在暗盒內，蛋白帶面向上。

6. 暗房內取一張X光膠片至于包裹的膜上，壓片，分別曝光不同的時間，如數秒到數分鐘，定影顯影沖洗。

【注】：曝光時間需根據曝光強度做相應的調整。若是背景過高，可使用兩張X光膠片同時壓片。

注意事項

1. 步驟1~5可在日光燈下操作；但發光液曝露于強光下時間過久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的干凈。
2. 長時間曝光或蛋白過量，將加深背景并使條帶強弱變化失去線性關系。曝光不足則條帶模糊。
3. 發光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發光。強條帶發光在暗房中肉眼可見，低豐度蛋白條帶發光較弱甚至肉眼不可見但可使X光膠片曝光。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發光時間。肉眼不可見的熒光實際上可持續數小時并使X光膠片感光，因此弱帶可曝光1~10小時。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL發光和曝光。
4. 推薦大多數進口抗體起始濃度為一抗1:1000-1:50000，二抗1:50,000-1:250,000。抗體濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導致失敗。
5. 某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會淬滅熒光，應選擇高質量保鮮膜。
6. 避免將多張膜置于同一個洗膜盒內洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。
7. 使用肉眼可見的預染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。
8. 使用生物素-親和素系統，避免使用牛奶封閉，可能會導致背景過高。
9. 疊氮化鈉（NaN₃）能抑制HRP活性，若回收HRP標記探針或者抗體應避免使用NaN₃，如必需使用勿超過0.01%。
10. 金屬氧化物顆粒可能會造成膜上出現顆粒狀斑點，避免使用帶有銹跡的剪刀以及鑷子，建議使用塑料的平頭鑷子。
11. 本品無特殊毒性，按普通化學品處理。
12. 本產品僅作科研用途！
13. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20240724