2×Hieff® Robust PCR Master Mix (No Dye)選用改造的Taq DNA Polymerase,添加強力延伸因子、擴增增強因子以及優化的緩沖體系,擴增速度和擴增產量較普通PCR Mix有了質的飛躍。擴增速度可達15 sec/kb,適用于快速PCR反應,1 kb以內的極限擴增速度可達5 sec/kb,大幅節省PCR反應時間。預混液中含有dNTP、Mg2+,使用時只需加入引物和模板即可進行擴增,大大簡化實驗的操作步驟。體系中加入的保護劑使得 Master Mix 經過反復凍融后仍可保持穩定的活性。PCR產物的3’端帶A,可輕松克隆至T載體。本產品中不含染料,PCR產物需加入Loading buffer 后進行電泳。
PCR反應體系(推薦冰上配制)
組分 |
體積 |
終濃度 |
模板DNA |
適量 |
- |
Primer正向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
Primer反向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
2×Hieff® Robust PCR Master Mix(No Dye) |
25 μL |
1× |
ddH2O |
to 50 μL |
- |
【注】:使用前請務必將其徹底混勻。
a)模板使用量:人基因組DNA:30-100 ng;大腸桿菌基因組DNA:10-100 ng;λDNA:0.5-5 ng;質粒DNA:0.1-10 ng。
b)Mg2+濃度:本產品中含有3 mM的MgCl2,適合大部分PCR反應。
PCR擴增條件
循環步驟 |
溫度 (°C) |
時間 |
循環數 |
預變性 |
94 |
3-5 min |
1 |
變性 |
94 |
10 sec |
30-35 |
退火 |
55 |
20 sec |
|
延伸 |
72 |
15-30 sec/kb |
|
終延伸 |
72 |
5 min |
1 |
【注】: a)退火溫度:請參考引物的理論Tm值,退火溫度可設置低于引物理論值1-2°C。
b)延伸速度:長度1 kb以內的基因可選擇5-15 sec/kb。
運輸和保存方法
冰袋運輸。-20°C保存,有效期2年。
注意事項
1)PCR反應體系需在冰上配制,體系混勻后快速置于PCR儀進行反應。
2)本產品PCR產物不適用于聚丙烯酰胺凝膠電泳。
3)為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
4)本產品僅作科研用途!
相關產品
產品名稱 |
貨號 |
規格 |
10101ES80/90 |
1000/5×1000 U |
|
10102ES03/08 |
1/5×1 mL |
|
10103ES03/08 |
1/5×1 mL |
|
10106ES03/08 |
1/5×1 mL |
|
10108ES03/08 |
1/5×1 mL |
|
10149ES03/08 |
1/5×1 mL |
HB211220
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