黃曲霉毒素B1的介紹

黃曲霉毒素B1是黃曲霉毒素一類結(jié)構(gòu)相似的化合物中的一種，對(duì)人體及動(dòng)物的肝臟組織有破壞作用。黃曲霉毒素B1具有強(qiáng)烈的致癌性，已被世界衛(wèi)生組織（WHO）劃定為I類致癌物，其毒性是的68倍，的10倍。黃曲霉毒素B1污染的食物主要有花生、玉米、稻谷、小麥、花生油等糧油食品，且以南方高溫、高濕地區(qū)受污染情況Z為嚴(yán)重，其耐熱性強(qiáng)，280℃才可裂解，故在一般烹調(diào)溫度下難以破壞。由于其危害性強(qiáng)，在食物中較為常見，因此是國(guó)家質(zhì)檢總局規(guī)定的大部分食品必檢項(xiàng)目之一。

有關(guān)黃曲霉毒素B1的食品安全限量規(guī)定

食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《GB2761—2017》規(guī)定黃曲霉毒素B1在花生、玉米及其制品中Zda限量為20 μg/kg，在稻谷、植物油脂中Zda限量為10 μg/kg，在小麥、豆類及醬油、醋等調(diào)味品中Zda限量為5 μg/kg。

逗點(diǎn)生物開發(fā)出使用免疫親和柱法檢測(cè)大米中黃曲霉毒素B1的含量，平均回收率在82.7%，為客戶提供關(guān)于黃曲霉毒素B1檢測(cè)有效的解決方案。

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 

本研究利用免疫親和柱法作為樣品的前處理方法，HPLC作為分析方法，檢測(cè)大米中黃曲霉毒素B1的含量。該方法可簡(jiǎn)化樣品的前處理過程，節(jié)省有機(jī)溶劑的使用，操作簡(jiǎn)便。

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物    

黃曲霉毒素B1(CAS:1162-65-8)

三、應(yīng)用范圍

本方法適用于大米中黃曲霉毒素B1檢測(cè)HPLC檢測(cè)及確證。

四、實(shí)驗(yàn)材料   

biocomma? Copure?黃曲霉毒素B1免疫親和柱3 mL (Cat. No. COAFMB103)

五、實(shí)驗(yàn)方法

1、樣品提取

稱取5.0 g（極ng確到0.01 g）粉碎大米到50 mL離心管，加入20 mL70%甲醇水溶液，渦旋混勻，振蕩10 min，4000 r/min下離心5 min，取上清液4 mL于另一50 mL離心管，加水21 mL，混勻待凈化。

2、免疫親和柱凈化

(1)將10 mL注射器連接于免疫親和柱上端；

(2)將待凈化液樣品液以1-2滴/秒的速度通過免疫親和柱，棄掉流出的液體；

(3)20 mL水淋洗柱子，分兩次淋洗，棄掉流出的液體；

(4)真空吹干柱子中殘留水分；

(5)加入2*2 mL甲醇緩慢洗脫親和柱，流速約為2-3秒/滴；

(6)50℃下氮吹至近干，待衍生。

3、衍生化反應(yīng)

(1)加100 uL三氟乙酸，200 uL正己烷于待衍生樣品液中，40℃水浴振蕩15 min；

(2)50℃下氮吹至近干，加1 mL10%乙腈水溶液溶解，0.22 um濾膜過濾，供HPLC分析。

4、HPLC條件  

設(shè)   備：Waters Alliance 2695

色譜柱：Inertsustain C18  5um  4.6*250 mm

檢測(cè)器：2475 熒光檢測(cè)器

檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng): 360 nm /發(fā)射波長(zhǎng): 440 nm

流動(dòng)相：乙腈：水=25:75

流速：0.6 mL/min   

進(jìn)樣體積 : 20 μL

六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1、0.5 ug/kg大米中黃曲霉毒素B1的添加回收結(jié)果

表1  0.5 ug/kg大米中黃曲霉毒素的添加回收結(jié)果

2、添加水平為0.5 ug/kg大米中黃曲霉毒素B1的液相色譜圖

圖1  添加水平為0.5 ug/kg大米中黃曲霉毒素B1的液相色譜圖 

結(jié)論：大米中黃曲霉毒素B1殘留檢測(cè)的平均回收率是82.7%，RSD是2.96%，滿足標(biāo)準(zhǔn)要求。