隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，人們生活水平的不斷提高，人們對(duì)食品安全越發(fā)重視和關(guān)注，在日常生活當(dāng)中加強(qiáng)食品檢測(cè)已經(jīng)成為當(dāng)前質(zhì)檢管理部分的一個(gè)重要課題。黃曲霉毒素B1，是一種強(qiáng)烈的致癌物質(zhì)，自20世紀(jì)代初在英國發(fā)現(xiàn)以來，全世界有不少食用霉變食品引起人類中毒的報(bào)道。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)肝癌發(fā)病率在地區(qū)上的分布與當(dāng)?shù)丶Z油食品受黃曲霉毒素污染程度有密切關(guān)系，在污染嚴(yán)重的地區(qū)，肝癌發(fā)病率較高。所以加強(qiáng)食品中黃曲霉毒素B1的檢測(cè)，有利構(gòu)建食品安全體系，造福萬千群眾。

1.黃曲霉毒素B t測(cè)定原理與步驟方法

在食品中黃曲霉毒素B1檢測(cè)方法很多，有些樣品如薯類及部分醬料、油類樣品受樣品雜質(zhì)干擾的影響，因而使方法的靈敏度降低。目前通常采用雙向展開法，可以提高了檢測(cè)方法的靈敏度，如測(cè)定了一份薯類樣品，按靈敏度由原法的25ppb提高到5 ppb，同時(shí)測(cè)定了含雜質(zhì)較多的花生油、醬油及曲種等樣品，情況亦是如此。而原法靈敏度為5 ppb的樣品（如花生及部分花生油樣品等）用雙向展開法展開，其靈敏度亦可以進(jìn)一步提高，有的可提高到1.25ppb。今將雙向展開法的原理及操作步驟介紹如下：

2.原理

因無水乙 醚不能推動(dòng)黃曲霉毒素B-（以下簡(jiǎn)稱B），在用乙 醚將薄層板橫展時(shí)，可以把干擾的雜質(zhì)推到樣品點(diǎn)的旁邊，而不像用乙 醚縱展時(shí)，有時(shí)在樣品的過道中留有部分雜質(zhì)的底色。在乙 醚橫展后再用丙酮：氯仿縱展，可以使樣品在B1標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)相應(yīng)處的雜質(zhì)底色大量的減少。從而提高了原有方法的靈敏度。

試劑（補(bǔ)充的）： 無水乙 醚，分析純，在無水乙 醚中加入少許無水硫酸鈉貯存。

操作步驟： 主要補(bǔ)充雙向展開法的操作步驟，其它參照B1測(cè)定法。

3.滴加方法

　　由于在具體測(cè)定條件下，用無水乙 醚展開后Bt仍有很少的移動(dòng)（因無水乙 醚中含微量的水或醇以及空氣中的濕度太大等均可以使B，移動(dòng)），因此在滴加時(shí)必需同時(shí)滴加兩塊層析板。在一塊5×20厘米的薄層板上距下端3厘米的基線上滴加以下兩個(gè)點(diǎn)：第1個(gè)點(diǎn)離左邊邊距0.8～1厘米處滴加B。標(biāo)準(zhǔn)液Ⅲ（o.04微克／毫升）10微升；第2個(gè)點(diǎn)離第一個(gè)點(diǎn)的間隔距離約1.8--2.O厘米處滴加樣液20微升。在另一塊上的滴加樣式完全與第一塊相同，祗在第二個(gè)樣品點(diǎn)上再滴加B1標(biāo)準(zhǔn)液Ⅲ 0.04（微克／毫升）10毫升。

4.展開方法

①橫展

在展開槽內(nèi)的長邊放置玻璃支架一個(gè)，再加無水乙 醚10毫升。將薄層板靠B t標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的長一邊放在展開槽內(nèi)展開（因B t標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)在下端，則展開時(shí)沒有雜質(zhì)拖到第2個(gè)點(diǎn)），盡量使薄層板的斜度要小些，浸泡薄層板的深度為0.1厘米左右，以避免Bt標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)泡入展開劑中，一直展開到展開劑前沿剛到板端為止，立即取 出揮干（在展開前一定先要將無水乙 醚及試驗(yàn)條件選好，盡量使B-無移動(dòng)或少移動(dòng)，最多不能移動(dòng)到第2個(gè)點(diǎn)處）。

②縱展

將橫展后揮干的薄層板靠近滴加點(diǎn)的短一邊用丙酮：氯仿（8：92）展開至前沿距原點(diǎn)12厘米處。 1.4.觀察結(jié)果：在紫外光燈下，將兩塊薄層板相互比較觀察。若第2塊板的第2個(gè)點(diǎn)在B t標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的相應(yīng)處出現(xiàn)最低檢出量，而第1塊板則在與第2塊板的相同位置上出現(xiàn)螢光，則樣品中B，含量在5 Ppb以下。

5.雙向展開法的回收率

　　在花生、花生油及玉米中加入B-水平為2.5及1.25ppb時(shí)，回收率約為80％或以上（附花生的展開樣式圖兩張）。若為了提高原法的靈敏度（原法靈敏度為5 ppb）時(shí)，除改用雙向展開外，還須注意所有的樣品最 好均改用已烷、甲醇、水提取，最后加入苯：乙腈的體積為0.5毫升（即每毫升樣液中含有8克樣品）。若滴加20微升或40微升樣液時(shí)，仍不出現(xiàn)蘭紫色螢光，則其含量為2.5或1.25ppb以下。

6.黃曲霉毒素B1的確定方法

為了證實(shí)所得熒光確系黃曲毒毒素B1產(chǎn)生的，還須進(jìn)行確證，即于薄層板的黃曲霉毒素B1點(diǎn)上滴加三氟醋酸后，使之產(chǎn)生黃曲霉毒素B1衍生物。確定方法如下：在薄層板上滴加以下三個(gè)點(diǎn)：第1個(gè)點(diǎn)為樣液點(diǎn)，即加樣液20微升（樣液點(diǎn)中含有B，量至少為0.002微克以上，若樣品中B1含量為25ppb，則取前述提取樣液20微升即可達(dá)到0.002微克）；第2個(gè)點(diǎn)為樣液加B-標(biāo)準(zhǔn)液點(diǎn)，即加與第一個(gè)相同的樣液20微升后，在此點(diǎn)上再滴加B。標(biāo)準(zhǔn)液0.2微克／毫升或0.5微克／毫升10微升；第3個(gè)點(diǎn)為B-標(biāo)準(zhǔn)液點(diǎn)，即加0.2微克／毫升或0.5微克／毫升10微升。然后在各個(gè)點(diǎn)上均加上三氟醋酸一滴，滴點(diǎn)的大小只要能蓋住第一次的滴加點(diǎn)，反應(yīng)5分鐘，用吹風(fēng)機(jī)熱風(fēng)吹5分鐘，使熱風(fēng)到板上的溫度不要超過40℃再用丙酮：氯仿（10；90，V／V）展開劑展開至前沿距原點(diǎn)10厘米處，在紫外光燈下觀察的方法如下：

       在B 1標(biāo)準(zhǔn)液點(diǎn)的量為0.002微克時(shí)，與三氟醋酸反應(yīng)后，則主要產(chǎn)生一個(gè)藍(lán)紫色熒光點(diǎn)，其Rf值為0.1左右；為0.005微克時(shí)，則產(chǎn)生兩個(gè)藍(lán)紫色熒光點(diǎn)，其Rf值一個(gè)為0.1左右，另一個(gè)則與同樣條件下未加三氟醋酸展開的相同（即Rf值較高處有一個(gè)點(diǎn)），同時(shí)前者的熒光強(qiáng)度強(qiáng)于后者很多。

       若樣液中所產(chǎn)生的衍生物反應(yīng)完全與黃曲霉毒素B1相同，而且兩者的熒光點(diǎn)完全重選。則確證所得的熒光是黃曲霉毒素B-產(chǎn)生的。

       為了確證上述結(jié)果，肯定樣液中所產(chǎn)生的Rf值為0.1左右的熒光點(diǎn)確系反應(yīng)后產(chǎn)生的，可以在作以上確證試驗(yàn)同時(shí)另作一塊不加三氟醋酸的薄層板，加以肯定。

7.討論

　　用以上原理測(cè)定黃曲霉毒素B的方法不是專一性的，因有的樣品中其他物質(zhì)亦可產(chǎn)生類似黃曲霉毒素B，的藍(lán)紫色熒光點(diǎn)，而且兩者的Rf值亦可相同。為了進(jìn)一步確定，一般可以多用幾種展開劑展開，除以上所用的丙酮：氯仿（6：94，V／V）展開劑以外，還可以用甲醇：氯仿（4：96，V／V）；乙 醚：甲醇：水（96：3：1，V／V／V），或苯：乙醇：水（46：35：19，V／V／V）@展開劑展開，以觀察試驗(yàn)樣液點(diǎn)與B，標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)在各種展開劑展開的情況下，兩者的藍(lán)紫色熒光點(diǎn)是否重選（假定樣液為陽性的條件下）。若用某種展開劑展開時(shí)不一樣，則可認(rèn)為此樣液中含有的藍(lán)紫色熒光點(diǎn)不是黃曲霉毒素B0，若都一樣則可以進(jìn)一步用上述產(chǎn)生黃曲霉毒素B1衍生物的方法確定亦可以將陽性樣品直接用此法確定。除以上外，還有用鴨雛或雞胚等生物方法確定，或用紫外分光測(cè)定吸收曲線等方法確定。