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教你兩步完成肝素效價的測定
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教你兩步完成肝素效價的測定
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教你兩步完成肝素效價的測定
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2024-09-13 23:04
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- 1.深入了解ELISA法測定抗體效價的原理。 2.掌握ELISA法測定單克隆抗體效價的方法。 二、實驗原理 ELISA是以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的GX催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。免疫酶技術是將酶標記在抗體/抗原分子上,形成酶標抗體/酶標抗原,稱為酶結合物。該酶結合物的酶在免疫反應后,作用于底物使之呈色,根據顏色的有無和深淺,定位或定量抗原/抗體。ELISA試劑盒是免疫酶技術的一種,其特點是利用聚苯乙烯微量反應板(或球)吸附抗原/抗體,使之固相化,免疫反應和酶促反應都在其中進行。在每次反應后都要反復洗滌,這既保證了反應的定量關系,也避免了末反應的游離抗體/抗原的分離步驟。在ELISA法中.酶促反應只進行一次,而抗原、抗體的免疫反應可進行一次或數次,即可用二抗(抗抗體)、三抗再次進行免疫反應。 目前常用的幾種ELISA方法有:測定抗體的間接法,測定抗原的雙抗體夾心法和測定抗原的競爭法等。本實驗采用間接法測定單克隆抗體效價。其主要過程為:首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應板的凹孔內,加待測抗體,保溫后洗滌以除去未結合的雜蛋白質,加酶標抗抗體,保溫后洗滌,加底物保溫30分鐘后,加酸或堿終止酶促反應,用目測或光電比色測定抗體含量。 三、儀器、原料和試劑 儀器 聚苯乙烯96孔酶標板、微量移液管、酶聯免疫閱讀儀、水浴鍋。 原料 單克隆抗體 試劑 1.抗原及酶標記抗體 ①抗原:兔抗人IgG(RabbitAanti-humanIgG,CodeNo.A0423); ②酶標抗抗體:兔抗鼠IgG-HRP(RabbitAnti-mouseIgG-HRP,CodeNo.P0260);均為 DAKO公司產品,使用時按照說明書要求稀釋。 4.洗滌液(含0.05%Tween20的PBS):1LPBS中加入Tween-20500μL。 5.ELISA試劑盒封閉液(含1%牛血清白蛋白,0.1%Tween20的PBS):10mLPBS中加入100mgBSA,10μLTween-20。6.底物溶液 ①磷酸鈉鹽緩沖液(0.1mol/LpH6.0):稱Na2HPO412H2O2.2g,NaH2PO42H2O6.84g,用蒸餾水溶解,定容至500mL。 ②TMB貯液:稱60mgTMB溶于10mL二甲基亞砜中,4℃避光保存。 ③底物應用液:現用現配,磷酸鈉緩沖液10mL,TNB貯液10μL。30%H2O215μL,混勻。 7.終止液:2mol/LH2SO4 四、操作步驟 ①抗原包被:兔抗人IgG作為抗原,用包被液l:8000稀釋,100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應板 中。4℃放置。 ②洗滌:次日傾去凹孔內的液體,洗滌液洗3次。 ③封閉:加l00μL/孔封閉液,室溫放置0.5h。 ④洗滌:用洗滌液洗3次。 ⑤加待測樣品(一抗):將含單克降抗體的細胞培養上清在另塊板上用PBS連續稀釋(按照1:2或1:10),100μL/孔加到已包被的板上,每個樣品平行做兩份,PBS或空白培養基作為陰性對照,已知樣品作為陽性對照。加蓋37℃恒溫箱溫育1~2h。 ⑥洗滌:用洗滌液洗3次。 ⑦加酶標抗抗體:兔抗鼠IgG-HRP,用封閉液l:8000稀釋,100μL/孔,加蓋37℃恒溫箱溫育1h。 ⑧洗滌:用洗滌液洗5次,蒸餾水洗2次。 ⑨顯色:ELISA試劑盒加新鮮配制的底物溶液100μL/孔,室溫暗處放置5~30min,顯示藍色。 ⑩終止反應、比色:加50μL/孔終止液.顏色變黃;用酶標儀測定450nm處各孔的吸光值,陽性反應的Zda稀釋度為待測樣品的效價。[詳細]
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2018-09-14 10:01
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- 9045-22-1肝素鋰,肝素鋰鹽用途:常用的肝素抗凝劑,肝素的鈉、鉀、鋰、銨鹽,其中以肝素鋰**≥150units/mg分子量:6000-200009045-22-1肝素鋰,肝素鋰鹽密封保存cas20736-09-8,柴胡皂苷A/柴胡皂甙A/SaikosaponinA,分析標準品,98%,20毫克,2~8℃,避光F0250,200ul無菌盒裝吸頭,,96支/盒,RT大鼠補體蛋白4檢測復孔(C4)ELISA試劑盒*** 價人嗜環蛋白/親環素A檢測范圍(CyPA)ELISA試劑盒*** 價P0594,F12培養基/F-12營養混合物/HamsF12/F-12NutrientMixture,含L-谷氨酰胺,不含NaHCO3,10升,2~8℃cas53-84-9,氧化型輔酶Ⅰ/β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸/二磷酸吡啶核苷酸/煙酰胺腺嘌呤雙核苷酸/β-NAD/β-DPN,BR,98%,1克,2~8℃大鼠β羥丁酸檢測復孔(βOHB)ELISA試劑盒*** 價小鼠脫氫表雄酮檢測范圍(DHEA)ELISA試劑盒包被cas7761-88-8,硝酸銀/銀丹/硝酸銀(I)/Silvernitrate,AR,99.8%,25克,RT,避光大鼠細胞間粘附分子1檢測復孔(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒*** 價P0625,麥芽糖發酵管,BR,20支,RT9045-22-1肝素鋰,肝素鋰鹽廣銳生物匯集Elisa試劑盒(種屬標本:人、大鼠、小鼠、兔子、雞、豬、牛、豚鼠、犬、馬、猴、羊、各類植物等等)、標準品|對照品、抗體、培養基、試劑為一體的科研產品供應商,暢銷國內各省市地區,擁有雄厚的實力、合理的價格和優良的技術服務,能夠及時解決和滿足客戶的各方面的需求,是國家ZD實驗室及國內各大院校長期指定供應商電話:021-60723333136715972859045-22-1肝素鋰,肝素鋰鹽[詳細]
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2018-10-23 10:30
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- 在低分子肝素的常用測定指標中,相對分子質量占據有非常重要的地位。本文主要分析了低分子肝素相對分子質量的多種測定方法,如GX分子排阻色譜法、多角度激光光散射儀法、聚丙烯酰胺凝膠電泳法、核磁共振法等,以為實驗室研究提供依據。[詳細]
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2014-12-11 00:00
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- 關鍵詞:酸價,電位滴定,酸堿滴定法
介紹
酸價,或稱中和值、酸值、酸度,是對化合物(例如脂肪酸)或混合物中游離羧酸基團數量的一個計量標準。在脂肪生產的條件下,酸價可作為水解程度的指標,在其保藏的條件下,則可作為酸敗的指標。酸價越小,說明油脂質量越好,新鮮度和精煉程度越好。
[詳細]
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2020-07-10 17:41
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2024-09-28 00:31
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2024-09-20 13:53
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2024-09-11 18:04
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