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細胞核的分離技術說明
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2024-10-03 20:16 1158閱讀次數(shù)
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細胞核的分離技術說明(1)細胞懸浮于適量預冷的溶液A中,吹打均勻后加入勻漿管中,使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中,一手持之,一手將勻漿杵垂直插人管中,左右轉動同時上下移動勻漿杵,研磨若干次,用3層紗布過濾后(也可采用低速離心的方法)以去除未破裂細胞,后收集勻漿液于離心管中,然后制備一張滴片,做好標記,顯微鏡下觀察完整細胞數(shù)量。如果細胞數(shù)量過多,則繼續(xù)勻漿,如果非常少,則勻漿完畢。(2)將裝有勻漿液的離心管配平后,放人低溫離心機,4℃,以2500r/min離心15min;棄上清,將沉淀物用6ml含0.1%(V/V)TitonX-100的溶液A懸浮沉淀物,以2500r/min,離心15min;棄上清。(3)將沉淀懸浮于6ml溶液B中,取6支超速離心管,每管加6ml溶液C,然后把細胞核懸液鋪在溶液C上層,以25000r/min離心60min。(4)棄去上清,用溶液A輕輕蕩洗管壁及沉淀物表面兩次。將離心管倒置,用濾紙擦干管口。(5)向離心管底部滴加幾滴溶液A,用玻璃棒輕輕攪勻,然后補加10ml溶液A,以2500g離心20min,棄上清液,沉淀物為純化的細胞核。
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細胞核的分離技術說明
- 細胞核的分離技術說明(1)細胞懸浮于適量預冷的溶液A中,吹打均勻后加入勻漿管中,使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中,一手持之,一手將勻漿杵垂直插人管中,左右轉動同時上下移動勻漿杵,研磨若干次,用3層紗布過濾后(也可采用低速離心的方法)以去除未破裂細胞,后收集勻漿液于離心管中,然后制備一張滴片,做好標記,顯微鏡下觀察完整細胞數(shù)量。如果細胞數(shù)量過多,則繼續(xù)勻漿,如果非常少,則勻漿完畢。(2)將裝有勻漿液的離心管配平后,放人低溫離心機,4℃,以2500r/min離心15min;棄上清,將沉淀物用6ml含0.1%(V/V)TitonX-100的溶液A懸浮沉淀物,以2500r/min,離心15min;棄上清。(3)將沉淀懸浮于6ml溶液B中,取6支超速離心管,每管加6ml溶液C,然后把細胞核懸液鋪在溶液C上層,以25000r/min離心60min。(4)棄去上清,用溶液A輕輕蕩洗管壁及沉淀物表面兩次。將離心管倒置,用濾紙擦干管口。(5)向離心管底部滴加幾滴溶液A,用玻璃棒輕輕攪勻,然后補加10ml溶液A,以2500g離心20min,棄上清液,沉淀物為純化的細胞核。[詳細]
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2024-10-03 20:16
產(chǎn)品樣冊
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細胞核基質(zhì)的基本特征
- 細胞核基質(zhì)的基本特征1.核基質(zhì)的一般形態(tài)結構要在電鏡下觀察到核基質(zhì),一般的方法為生化抽提技術加上整裝樣品電鏡技術,方可清晰地顯示核骨架一核纖層一中間纖維網(wǎng)架結構體系。由蛋白纖維構成的網(wǎng)架結構充滿核內(nèi)的整個空間.殘存的核仁被包圍在該網(wǎng)架中。核纖層由中間纖維蛋白構成,位于內(nèi)層核膜下方,核基質(zhì)的纖維網(wǎng)架與核纖層有著廣泛的結構聯(lián)系。核基質(zhì)纖維粗細不均,直徑可為3~30nm,推測其纖維單體的直徑是3~4nm,較粗的纖維直徑呈3nm的倍數(shù),提示為單纖維的聚合體。2.核基質(zhì)的化學成分由于提取方法和所用鹽溶液的不同,在電泳上顯示的核基質(zhì)蛋白成分有相當?shù)牟町?。核基質(zhì)成分較為復雜,不像細胞質(zhì)骨架和核纖層那樣簡單,不同類型細胞,其細胞周期不同階段以及正常與癌變細胞的核基質(zhì)成分都可能有所差別。已檢測出的核基質(zhì)成分有10多種.相對分子質(zhì)量為40~60kD,多數(shù)是非組蛋白成分,其中相當一部分為含硫蛋白質(zhì)。二琉鍵對核基質(zhì)完整性起極為重要的作用,破壞二硫鍵可引起核基質(zhì)的瓦解。由于核基質(zhì)蛋白成分常與一部分DNA和RNA有緊密的結合,與RNA的結合對于維持核骨架三維網(wǎng)絡結構的完整性是必要的,與少量DNA的結合是一種功能性結合,所以有人認為核基質(zhì)成分應該說是一類核蛋白。常見的核基質(zhì)蛋白有下列幾種:(1)核基質(zhì)蛋白,相對分子質(zhì)量大于50k1),主要定位于核基質(zhì),且呈現(xiàn)纖維顆粒樣分布。很可能是核基質(zhì)上DNA襻環(huán)的結合蛋白。(2)Nuc2+蛋白,Nuc2+蛋白存在于核基質(zhì)以及染色體支架中。相對分子質(zhì)量為76kD,有一個結構域與富含AT的DNA序列有特異的親和性。Nuc2+蛋白能在體外自我組裝,是一種具有聚合能力的酸性結合蛋白質(zhì)。Nuc2+蛋白可能在有絲分裂期染色體分離過程中起重要作用。(3)核內(nèi)肌動蛋白,有報道在間期細胞核內(nèi)發(fā)現(xiàn)肌動蛋白,這些核基質(zhì)中的肌動蛋白可能與mRNA前體的加工過程有關,如果向細胞核內(nèi)注射抗肌動蛋白抗體及肌動蛋白結合蛋白,能YZ細胞核內(nèi)的mRNA的轉錄。(4)附著區(qū)結合蛋白,與骨架結合的DNA序列(簡稱MAR)往往是富含AT的DNA序列.長度:300~1000bp。是一種MAR結合蛋白,相對分子質(zhì)量為95kD,廣泛存在于各種組織中,不具有組織特異性。通常特異性地與DNA襻環(huán)兩端的序列結合,將其錨定在核基質(zhì)上,以形成DNA襻環(huán)。(5)DNA拓撲異構酶Ⅱ,是間期的核基質(zhì)和分裂期染色體骨架的重要成分之一。3.核基質(zhì)結合蛋白近年陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了一些核骨架結合蛋白,又稱核基質(zhì)結合蛋白,是一些與DNA和RNA代謝密切相關的酶類、細胞信號識別和細胞周期的調(diào)控因子以及病毒特異性的調(diào)控蛋白,緊密地結合在核基質(zhì)結構上,協(xié)助核基質(zhì)蛋白共同完成核基質(zhì)網(wǎng)架的構建和生物學功能。4.核基質(zhì)的功能一般認為,核基質(zhì)為細胞核內(nèi)組分布局提供了一個結構支架,細胞核內(nèi)許多重要的生命活動與核基質(zhì)有關。(1)核基質(zhì)與DNA復制原核細胞的DNA復制是結合在細胞膜上進行的。近年來研究表明真核細胞中DNA復制與核膜沒有直接的關系,更無專一的結合位點,復制中的DNA均結合在核基質(zhì)上,并且DNA復制所必需的DNA聚合酶和DNA拓撲異構酶Ⅱ都可能在核基質(zhì)上有特定的結合位點。DNA襻環(huán)的根部結合在基質(zhì)纖維上,DNA以襻環(huán)的形式通過核基質(zhì)結合序列與DNA拓撲異構酶Ⅱ的結合錨定到核基質(zhì)上,調(diào)控DNA的復制。與DNA復制有關的酶及調(diào)控因子與DNA襻環(huán)共同錨定于核基質(zhì)上形成DNA復制復合體,進行DNA復制合成。近年來證實,真核細胞中的DNA聚合酶結合于核基質(zhì)上,通過結合于核基質(zhì)上而被激活。所以可以認為,在真核細胞中核基質(zhì)是DNA復制的空間支架。(2)核基質(zhì)與基因表達在細胞核這樣的小小的空間內(nèi)容納基因要有序表達,必須在時空上進行有序的調(diào)節(jié),在一定時間內(nèi)只有極少數(shù)基因活躍表達,其他基因暫時處于關閉狀態(tài)。在鳥類和哺乳動物細胞中,具有轉錄活性的基因是結合在核基質(zhì)上的,基因只有結合在核基質(zhì)上才能進行轉錄。具有轉錄活性的基因兩端存在MAR序列,可以經(jīng)DNA拓撲異-構酶Ⅱ結合到核基質(zhì)上,并且MAR序列的存在可增加基因的轉錄活性。核基質(zhì)是DNA-的轉錄位點,RNA的合成是在核基質(zhì)上進行,RNA聚合酶在核基質(zhì)上具有結合位點。另外,RNA的剪切加工與運輸也是在核基質(zhì)上進行,mRNA前體(hnRNA)與核基質(zhì)的相結合,hnRNA上的特異性片段polyA可能是hnRNA在核基質(zhì)上的附著點。(3)核基質(zhì)和細胞癌變有些癌細胞如肝細胞的核基質(zhì)結構很不規(guī)則,而且其蛋白組成l與正常細胞核基質(zhì)有顯著不同。腫瘤細胞核常呈異常的形態(tài)結構,與核基質(zhì)結構及其蛋白組成的異常密切相關。有實驗證明,癌基因是結合在核基質(zhì)上才能轉錄。一些致癌物、促癌劑能緊密與核基質(zhì)結合,并通過核基質(zhì)發(fā)揮其致癌、促癌作用。某些YZ癌細胞增殖的藥物可能通過干擾基質(zhì)的DNA拓撲異構酶II起作用的。[詳細]
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2024-10-03 18:27
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2024-09-13 06:36
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2007-12-21 00:00
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體細胞核轉移技術成功培育滅絕動物活體胚胎
- 來自新南威爾士大學的科學家們報告稱,他們已經(jīng)成功培育出30年前滅絕的一種動物的活體胚胎。這項突破能夠Z終被用于復活其它已經(jīng)滅絕的物種。保護生物學家邁克爾-馬赫尼告訴《悉尼先驅晨報》道:“這項技術是**次用于獲取一個滅絕的物種?!笨茖W家稱,成功發(fā)育成蝌蚪也只是時間問題。這項試驗使用了保存完好的胃育蛙的非活體遺傳物質(zhì),這種青蛙在20世紀80年代中期已經(jīng)滅絕。研究人員將DNA注入到一種類似青蛙物種的卵子中,這一過程與克隆綿羊多利的過程是不同的。而且在幾天之后,胃育蛙的胚胎在30年后**次獲得了生命。新南威爾士大學的研究人員麥克-阿徹說道,Z初蛙卵似乎并不活躍,但是隨后突然有一個細胞分裂了,然后它不斷的分裂??茖W家稱,盡管胚胎Z終未能發(fā)育成一只蝌蚪,但是它只是時間問題。體細胞核轉移技術Z終會成功將這一物種或者其它的物種帶回到可生育的成熟期。阿徹說道:“我們確實期待這種動物再一次活過來?!敝钡絑近,復活滅絕動物的概念才擺脫科幻小說的范圍,但是隨著細胞移植技術的進步,它能夠為那些不斷走向滅亡的無數(shù)物種以及那些在歷史中滅絕的物種帶來一線希望。[詳細]
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2018-10-12 10:00
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- 海洋光學推出的flame系列光譜儀,繼承了USB系列小巧堅固的外殼,并大幅改進了內(nèi)部設計,集成了自動化的生產(chǎn)工藝。在USB系列的基礎上,flame提升了熱穩(wěn)定性和臺間一致性,并在多方面改善了用戶使用體驗,具體請查看flame技術說明。[詳細]
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2018-08-17 10:00
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細胞DNA、RNA的分離鑒定技術
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2015-10-28 00:00
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- HS32-TY-3手持式煙氣分析儀的技術說明HS32-TY-3型手持式煙氣分析儀能自動測量煙氣中HCL氣體濃度。選用美國GAST煙氣采樣泵,安全可靠??晒┉h(huán)保、衛(wèi)生、勞動、安監(jiān)、軍事、科研、教育等部門用于各種鍋爐、爐窯煙氣的排放檢測。手持式煙氣分析儀主要特點貼片工藝,質(zhì)量可靠自動存儲數(shù)據(jù),數(shù)據(jù)存儲量大進口傳感器,測量精度高,使用壽命長可選配備煙氣冷凝除濕系統(tǒng),減小測量誤差美國GAST公司生產(chǎn)煙氣采樣泵,質(zhì)量可靠,負載特性好手持式煙氣分析儀測試氣體品種全,可根據(jù)用戶要求選擇安裝多組氣體傳感器,選擇范圍寬數(shù)據(jù)存儲能力100組冷凝器工作電流3.工作電源交流或交直流兩用,直流保證連續(xù)工作時間不小于5小時手持式煙氣分析儀外型尺寸便攜式340×260×135mm主機重量便攜式3.0Kg手持式煙氣分析儀功 耗≤50W(不含冷凝)手持式煙氣分析儀技術參數(shù) 被測氣體參數(shù)范圍HCL 0-20ppmZda量程可擴展到:0-200mg/m30-150ppm以上是該儀器的詳細資料,如您還想進一步的了解該產(chǎn)品,歡迎撥打我公司的客服電話,我們會盡Zda的努力為您解憂。???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????[詳細]
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2018-10-07 10:03
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SZ71- GDYS-101SN3余氯測定儀的技術說明
- SZ71-GDYS-101SN3余氯測定儀的技術說明*余氯測定儀采用傳統(tǒng)的DPD檢測方法,符合國家標準方法GB/T5750.11-2006。*采用專有的試劑盒合成技術將緩沖顯色一體化,簡化測試過程,實現(xiàn)一步式反應,提高檢測速度。*內(nèi)置工作曲線,無需配置標準溶液,僅需零點校正,加入專用試劑包顯色即可現(xiàn)場快速讀取余氯的濃度。*采用固體發(fā)光器件既作光源又作單色器,與傳統(tǒng)分光系統(tǒng)相比,光學系統(tǒng)結構簡單,儀器具有抗震、抗潮性能。*光源/單色器、比色槽、傳感器一體化,無可動部件,同時采用脈沖供電方式,光源使用壽命可達10萬小時,大大提高了儀器的精度、靈敏度和可靠性。*余氯測定儀體積小,重量輕,適于野外現(xiàn)場及實驗室使用。*儀器具有省電模塊,采用9V電池供電,30分鐘后自動關機。*余氯測定儀具有電量自診斷功能,自動提示電量不足。*光源:520nm*穩(wěn)定性:±0.00bs/20min*測定下限:0.01mg/L*余氯測定儀測量范圍:0.00~2.50mg/L*測量時間:<2分鐘*測量精度:±5%*環(huán)境溫度:15℃~40℃*電源要求:DC9V*余氯測定儀尺寸:170×90×35mm*重量:300g*主機1臺*比色器具1套*試劑1套(50次)[詳細]
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2024-09-30 08:03
產(chǎn)品樣冊
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- 離心機分離細胞技術.pdf[詳細]
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2009-03-19 00:00
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磷酸化細胞核因子 p-p65NFKB多抗
- 應用磷酸化細胞核因子p-p65NFKB多抗實驗:試驗驗證過適用于Westernblotting實驗、免疫組化實驗(Immunohistochemistry)、ELISA實驗。p-p65NFKB多抗說明書,請打電話詢要。乳腺癌相關抗原包裝規(guī)格:0.1ml、0.2mlAnti-phospho-NFKBp65:鼠源單抗、兔源多抗重要提示:磷酸化細胞核因子p-p65NFKB多抗避免重復凍融,專為科研實驗使用。歡迎打電話咨詢詳情!人幽門螺旋菌IgG人HSVⅡ-Ab試劑盒elisa法人抗弓形體IgM抗體犬ISR-βelisa試劑盒大鼠甘丙肽/甘丙素人β乳球蛋白人NP-Y試劑盒elisa法兔S-100elisa試劑盒犬白細胞分化抗原6人histon-H2belisa試劑盒小鼠胰蛋白酶人可溶性白細胞分化抗原21大鼠主要組織相容性復合體Ⅲ類[詳細]
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2018-11-05 10:00
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2024-09-11 18:03
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ASCO電磁閥技術說明
- ASCO電磁閥里有密閉的腔,在不同位置開有通孔,每個孔連接不同的油管,腔中間是活塞,兩面是兩塊電磁鐵,哪面的磁鐵線圈通電閥體就會被吸引到哪邊,通過控制閥體的移動來開啟或關閉不同的排油孔,而進油孔是常開的,液壓油就會進入不同的排油管,然后通過油的壓力來推動油缸的活塞,活塞又帶動活塞桿,活塞桿帶動機械裝置。這樣通過控制電磁鐵的電流通斷就控制了機械運動。美國ASCO成立于1948年,MAC閥門公司是北美Zda的電磁閥生產(chǎn)廠,擁有70多項ZL技術,專業(yè)設計制造高性能的空壓電磁閥。ASCO電磁閥以速度快、重復度高、環(huán)境耐受性強而著稱。ASCO的電磁閥結合了閥門高速運動所需的所有設計理念及60年的閥門制造經(jīng)驗,公司將閥門的性能發(fā)揮到您無法相信的極限,可以滿足您任何速度及極ng確度上的嚴格要求,是您在高速、極ng確的應用中**的選擇,Z重要的是原廠18個月不限次數(shù)品質(zhì)保證,壽命特長,價格合理。同時ASCO電磁閥擁有與其他廠家截然不同的安裝方式:串接,這種結構可以方便連接多達128只閥門而且不用安裝底板并可任意拆裝,極大方便了實際應用的靈活性并節(jié)約成本。ASCO電磁閥的特點1、ASCO新線圈的ZL、橢圓的磁鐵通過芯有更多的磁力2、平衡式的設計、不受進氣壓力的變化影響3、平衡式提動閥、閥桿上無其它軸封無磨擦4、很強的彈簧回力、在低壓時有足夠的回位5、氣孔面積為0.0024IN2-不易堵塞6、高出力、短行程-反應速度快7、短行程、錐形排氣底座設計、減少撞擊-壽命長8、零部件少、設計簡單-故障少ASCO電磁閥,在世界上的應用非常多廣泛,我公司經(jīng)銷ASCO電磁閥都是直接從廠家直接進口的,ASCO電磁閥詳情前聯(lián)系我。歡迎新來客戶前來選購詢價。ASCO電磁閥其獨特的結構設計及zhuo越的性能品質(zhì),在北美有26%的市場占有率。其使用客戶45%為包裝機械,其余分別為選別機械、輪胎機械、開礦業(yè)、汽車工業(yè)、電子工業(yè)、鋁制品工業(yè)、木材工業(yè)、造紙工業(yè)、印刷工業(yè)、食品工業(yè)及飲料業(yè)等。選別機械:大米色選機、豆類色選機、藥丸色選機、咖啡色選機、煙葉分撿機等。上面給大家簡單的介紹了ASCO的電磁閥,大家對這些也有了簡單的了解,如有疑問請電話咨詢我,歡迎新老客戶前來選購詢價。[詳細]
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2018-09-04 10:00
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力士樂電磁閥,技術說明
- 力士樂電磁閥,技術說明博世自動化技術部與原力士樂公司于2001年合并成為博世力士樂公司,屬博世集團全資擁有,但獨立進行業(yè)務運作,提供工業(yè)液壓,電子傳動與控制,線性傳動與組裝技術,氣動,液壓傳動服務以及行走機械液壓方面的傳動與控制解決方案博世力士樂公司注冊總部位于德國斯圖加特,而營運總部及董事局總辦事處則設于德國洛爾.原公司早于1795年成,及后不斷致力在各制造技術領域展.Z近50年來,博世力士樂在國際液壓市埸一直處于世界領xian的位置.力士樂電磁閥,技術說明[詳細]
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2008-03-01 00:00
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2018-10-02 10:03
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小鼠抗增殖細胞核抗原(PCNA)說明書
- 小鼠抗增殖細胞核抗原(PCNA)說明書實驗原理:本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中小鼠抗增殖細胞核抗原(PCNA)水平。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被單抗的微孔中依次加入PCNA,再與HRP標記的抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的PCNA呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠PCNA濃度。小鼠抗增殖細胞核抗原(PCNA)說明書密封袋1個1個酶標包被板1×481×96標準品:270ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶酶標試劑3ml×1瓶6ml×1瓶樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶目的:本試劑盒用于測定小鼠血清,血漿及相關液體樣本中抗增殖細胞核抗原(PCNA)含量。小鼠抗增殖細胞核抗原(PCNA)說明書樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。2.血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在**、第二孔中分別加標準品100μl,然后在**、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180ng/L,120ng/L,60ng/L,30ng/L,15ng/L)。加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。溫育:操作同3。洗滌:操作同5。顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。小鼠抗增殖細胞核抗原(PCNA)說明書[詳細]
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2018-10-23 10:30
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