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人髓過氧化物酶(MPO)ELISA試劑盒說明書

本文由 上海科學儀器有限公司 整理匯編

2018-09-13 10:01 247閱讀次數

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電話:021-6533363955229872網址:http://www.westang.com人髓過氧化物酶(MPO)ELISA試劑盒(用于血清、血漿、細胞培養上清液和唾液、尿液、生物體液內)原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人MPO單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的MPO與單抗結合,加入生物素化的抗人MPO,形成免疫復合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結合,加入底物工作液顯藍色,Z后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,MPO濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中MPO濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標板(CoatedWells)96孔酶標抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標準品(Standards):250ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準備試劑與收集血樣1.收集標本:血清、血漿(EDTA、肝素抗凝)、細胞培養上清液、組織勻漿、唾液、尿液等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復凍融。血清、血漿至少作1:100稀釋(取10ul,加標本稀釋液990ul,稀釋100倍)。乳奶至少做10倍稀釋。尿液不做稀釋。唾液做至少做400倍稀釋。2.標準品液配制:使用前加入0.5ml蒸餾水混勻,配成500ng/ml的溶液。設標準管8管,**管加標本稀釋液900ul,第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在**管中加入500ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。結果計算與判斷1.所有OD值都應減除空白值后再行計算。2.以標準品50、25、12.5、6.25、3.12、1.56、0.78、0ng/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。3.根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應MPO含量,再乘上稀釋倍數即可。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的MPO檢測濃度小于0.4ng/ml。2.特異性:可同時檢測重組或天然的人MPO。不與人其它細胞因子有交叉反應。3.重復性:板內、板見變異系數均小于9.6%。注意事項1.以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,每次測定應同時做標準曲線。2.洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!

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