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甲胎蛋白的檢測

無歌的冬季天蝎 2018-11-29 08:22:00 380  瀏覽
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如何讀懂胎牛血清的質量檢測報告?

       胎牛血清是許多做細胞培養相關的實驗的科研機構與院校必不可缺的一項試劑。作為天然來源的血液制品,其成分是復雜的,質量是可變的。

       所以,胎牛血清在生產時,應當進行嚴格的檢測并出具檢測報告書以確保驗證其質量的相對穩定性。

       作為使用者,你真的讀懂胎牛血清的檢測報告了嗎?

外觀觀測

       采血過程中的粗暴操作往往會導致血清中的血紅蛋白含量過高,產生溶血現象,血清的顏色便會偏棕紅。

       因此,人眼目測品質優良的血清通常會偏棕黃色或是琥珀黃,澄清透明,輕搖無沉淀(沉淀通常是污染或者是血清中的變性蛋白)。

微生物檢測

       細胞培養過程中,對環境的要求十分嚴格。對于培養所使用的試劑的要求也很高。一般要求無細菌、病毒、支原體等微生物的污染。因為微生物不僅會消耗細胞培養液中的營養成分,大量繁殖時其代謝產物也會改變細胞培養環境的酸堿度、成分和滲透壓等,嚴重時甚至會引起細胞染色體畸變,改變細胞形態等。

       血清在生產的過程中會要求多次精過濾以除去其中可能存在的微生物污染,也需進行嚴格的檢測以確認血清成品中無細菌、真菌、支原體、病毒等的污染。

       據行業標準,細菌和真菌采用的是薄膜過濾法進行驗證其存在與否。支原體可用PCR法或是培養法進行檢測。依據9CFR的通則要求,病毒檢測(牛病毒性腹瀉病毒、牛腺病毒、牛細小病毒等)采用的是熒光抗體法進行檢測。 

物種鑒定測試(蛋白電泳測試)

       為了確保血清中沒有非牛物質的存在,保證產品的完整性,應對牛血清進行種間和種內鑒定實驗。

       通常情況下,可使用蛋白凝膠電泳來進行驗證。通過電泳,血清蛋白通常分成多達六個部分,即白蛋白、α1、α2、β1、β2 和γ 球蛋白,每一種都有特定的電泳圖譜可以進行對照比對。

       其它方法包括輻射狀免疫擴散法(Radial Immunodiffusion, RID)與歐氏(Ouchterlony)雙擴散法等,可以定性或者定量檢測血清中免疫球蛋白G的含量。

血紅蛋白(Hemoglobin)含量測試

       血紅蛋白是紅細胞內運輸氧的特殊蛋白質,是使血液呈紅色的蛋白,由珠蛋白和血紅素組成,其珠蛋白部分是由兩對不同的珠蛋白鏈(α鏈和β鏈)組成的四聚體。

       紅血球脆弱并容易破裂,會將血紅蛋白釋放到血清中。粗暴處理所獲得的血液,不良的溫度控制或延遲處理將提高血清中的血紅蛋白含量。快速、小心處理得到的血液,通常血紅蛋白的含量較低,其產出的血清品質也更佳。

       一般情況下,先進的心臟穿刺取血技術可降低破碎紅細胞的風險,降低血清中血紅蛋白的含量。通常,血紅蛋白含量使用分光光度法進行測量。

免疫球蛋白檢測

       對于胎牛血清而言,由于采血時牛尚未接觸外界,其血液中通常不含IgM,IgG的含量也較低。對細胞培養的干擾和損害小。

       免疫球蛋白通常采用單向免疫擴散(Single Radial Immunodiffusion, SRID)法進行檢測。

內毒素含量檢測

       血清中的內毒素會影響超過三十種以上之生物活性,如:巨噬細胞的活化、促進有絲分裂、誘導干擾素和群落刺激因子等。同時,內毒素也可能會因為啟動補體活性而產生細胞毒性。

       因而,內毒素的含量較低的血清通常品質更佳。

       檢測內毒素Z常使用的方法為鱟的變形血球萃取物凝集的半定量凝膠法和定量動力顯色法。

滲透壓檢測

       滲透壓測試是用來評估血清中所含電解質的濃度。一些化學物質如鈉、氯、碳酸氫根、鉀、蛋白質和葡萄糖等均會影響血清滲透壓。

       血清的滲透壓一般使用冰點法測試,每個樣品的滲透壓以血清中水含量為基準計算,單位以mOsmol/kg水表示。

蛋白質總含量檢測

       測量血清中蛋白質總含量可確認動物的年齡及符合產品的規格。不同的細胞培養對蛋白質含量的要求也不同,可接受的含量應該根據Z終使用者的用途來評估。

       一般使用雙縮脲法(Biuret)及考馬氏亮藍法(Bradford)對蛋白質的含量進行測定。

細胞生長測試

       血液的成分含量復雜,不同批次之間的差異性也很大,為了檢測不同批次血清對特定體外細胞株生長的效力,所以要對每一批次的血清進行細胞培養測試。

       進行細胞培養測試可通過數次的傳代培養去監測血清對細胞生長的促進作用,同時也可監測血清對細胞的毒性作用或是對細胞的形態影響。


2020-03-11 16:52:14 680 0

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