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- 晧瀚 2017-01-15 00:00:00
- 在核算分子雜交中為什么都使用堿變性而不使用酸變性 DNA可以用堿變性而RNA不能采用堿變性的原因： 因為DNA耐堿，而RNA中核糖的2‘羥基還在，可以在堿性條件下攻擊磷酸二酯鍵，使其斷裂。 堿變性法提取質粒DNA原理： 普遍采用的堿變性法具有操作簡便、快速、得率高的優點。其主要原理是，利用染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在堿變性條件下（pH 12.6），染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性，質粒DNA氫鍵也大部分斷裂，雙螺旋也有部分解開，但共價閉合環狀結構的兩條互補鏈不會完全分離，當以pH 4.8的乙酸鈉將其pH調到中性時，變性的質粒DNA又恢復到原來的構型，而染色體DNA不能復性，形成纏繞的致密網狀結構，離心后，由于浮力密度不同，染色體DNA與大分子RNA、蛋白質SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。分離質粒DNA的方法一般包括3個基本步驟：培養細菌使質粒擴增；收集和裂解細菌；分離和純化質粒DNA。
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