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為什么兩臺熒光顯微鏡看到的熒光蛋白不一樣

lishixuan1998 2017-04-13 09:36:20 796  瀏覽
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  • 志丹好女人 2017-04-14 00:00:00
    為什么兩臺熒光顯微鏡看到的熒光蛋白不一樣 (1) 利用有色熒光蛋白標記技術進行蛋白定位研究 此法也可稱為活細胞定位.把兩種具有相互作用的蛋白分別克隆到帶有兩種不同顏色熒光 蛋白(綠色熒光蛋白或紅色熒光蛋白)的載體中,共轉染到功能細胞中(一般選用 COS7 細胞)表達帶有熒光的融合蛋白.這樣,相互作用的兩種蛋白就被標上不同的熒光,可以在細胞內用熒光顯微鏡直接觀測.在進行精確細胞定位或共定位時,必須用共聚焦熒光顯微鏡觀測.因為共聚焦熒光顯微鏡(相當于醫院給病人診斷的 CT)觀測的是細胞內一個切面上的顏色.如果在一個切面上在同一區域看到兩種顏色,就提示這兩種蛋白在該區域內有相互作用.普通熒光顯微鏡看到的是一個立體圖象,無法確定蛋白質共定位現象.在進行定位或共定位同時,也可以對細胞核進行染色.這樣,在細胞中就有三種顏色.細胞核的顯色幫助你確定共定位發生的位置.上面介紹的活細胞定位,其優點是表達的熒光蛋白熒光強,沒有背景,觀測方便.但缺點 是相互作用的蛋白由于標上熒光蛋白,實際上是兩個融合蛋白.融合蛋白的定位結果或共定位結果是否與天然蛋白分布一致,有待于進一步確定.而利用免疫熒光標記技術可以避免這一缺點. (2) 利用雙色或多色染色的免疫熒光技術進行蛋白定位研究 免疫熒光的原理是,首先把細胞進行固定,然后用待檢測靶蛋白的抗體(一抗)與細胞內 靶蛋白進行免疫反應,再用熒光素(如 FITC 和 TRITC 等)標記的二抗與一抗進行反應.這樣就在細胞內形成免疫復合物(靶蛋白----一抗---二抗),結果靶蛋白被標上顏色,然后可用共聚焦熒光顯微鏡觀測定位與共定位結果. 免疫熒光技術Z大優點就是可用來檢測細胞內源性蛋白的定位及相互作用.當然也可以對 靶細胞進行轉染表達目的蛋白,然后標記目的蛋白進行觀測.免疫熒光技術的缺點是熒光相對較弱并且背景較高,結果受到干擾,所以這項技術不好掌握.為了結果的可靠性,要求嚴格設計陽性對照與陰性對照. (3) 細胞內蛋白動態定位 有時細胞在正常狀態下,有相互作用的蛋白在胞內可能暫時分開,沒有共定位現象發生. 但是在某一個特定情況下,如細胞受到外界刺激時,細胞本身會產生應急反應,這時暫時分離的蛋白有可能發生相互作用,并產生共定位現象.所以在進行共定位研究時,可根據具體情況具體分析,必要時觀測細胞內蛋白動態定位結果.

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熒光顯微鏡看到什么物質

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熒光顯微鏡是生物學、醫學及材料科學等領域常用的高精度觀察工具,利用熒光標記物的特性,將樣本中的特定分子或細胞結構放大至可視化水平。這種顯微鏡不僅能夠提供樣本的結構信息,還能夠揭示樣本在特定波長下的光學特性,進而幫助研究人員深入分析細胞內外的分子活動、蛋白質定位及其相互作用等。本文將介紹熒光顯微鏡所能觀察到的各種物質,并探討其在不同研究領域中的應用。

熒光顯微鏡的工作原理

熒光顯微鏡通過激發樣本中特定分子發出熒光,從而獲得圖像。在此過程中,熒光染料或熒光蛋白被用來標記感興趣的分子。當這些染料吸收特定波長的光時,它們會發射出不同波長的熒光,借此光學特性,研究人員可以區分和觀察樣本中的不同物質。熒光顯微鏡的關鍵優勢在于其能提供非常高的靈敏度,適用于觀察低濃度的目標分子和復雜的生物過程。

熒光顯微鏡能看到的物質

  1. 細胞和組織結構 熒光顯微鏡常用于觀察細胞內外的細胞器、膜結構及其他細胞成分。例如,熒光標記物可以用于突出顯示細胞核、線粒體、內質網等結構,使得研究人員可以清晰地了解這些結構的形態和分布情況。細胞內的蛋白質和核酸分子也可以通過熒光標記被特異性地染色,從而實現對其位置和數量的精確觀察。

  2. 蛋白質和分子 在分子生物學研究中,熒光顯微鏡能夠顯示被標記的蛋白質、RNA及其他生物分子。例如,使用綠色熒光蛋白(GFP)標記特定蛋白質,研究人員可以直接觀察該蛋白質在活細胞中的動態變化,探索其在細胞內的功能與相互作用。

  3. 病理學物質 熒光顯微鏡廣泛應用于病理學領域,特別是在癌癥診斷中,能夠檢測細胞內異常的分子表達。通過特定的熒光染料,研究人員可以標記癌細胞表面的特定抗原或相關分子,以便對其進行精確的定量分析和形態學檢查。

  4. 納米材料和化學物質 在材料科學中,熒光顯微鏡可用于觀察納米顆粒、量子點等微小物質。這些納米級物質常常被熒光染料或熒光標記物所修飾,進而可以在顯微鏡下實現高分辨率成像,幫助科學家研究這些物質的分布、聚集和相互作用等特性。

  5. 微生物與病毒 熒光顯微鏡也是微生物學研究中的重要工具。通過標記微生物或病毒的特定成分,研究人員可以觀察這些微生物的形態、行為以及與宿主細胞的交互情況。熒光標記還可用于追蹤病毒的侵入過程和感染機制。

熒光顯微鏡的應用領域

熒光顯微鏡被廣泛應用于生命科學、醫學、化學及環境科學等多個領域。在細胞生物學研究中,它幫助研究人員揭示了細胞周期、細胞分裂等重要生命現象;在醫學領域,熒光顯微鏡對病理分析、腫瘤檢測、基因等提供了極大的支持;在材料科學中,它則是納米技術研究的重要工具。熒光顯微鏡的精確度和靈敏度使其成為觀察生物分子行為、診斷疾病和開發新材料的不可或缺的工具。

結語

熒光顯微鏡通過獨特的成像技術,能夠揭示多種物質的分布和動態變化,為科學研究提供了極其豐富的信息。從細胞結構、蛋白質分布到納米材料的研究,熒光顯微鏡無疑是現代科研領域中不可或缺的重要工具。隨著技術的進步,未來熒光顯微鏡將在各個研究領域發揮更大的作用。

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