在日常膜片鉗實(shí)驗(yàn)時(shí)，你是否也被這些問(wèn)題困擾？

操作十分復(fù)雜，一不小心就出錯(cuò)

注意事項(xiàng)多，包括如何排除噪音、提高封接成功率等等

想要借鑒該領(lǐng)域?qū)＜医?jīng)驗(yàn)，一直苦尋不到……

8月23日（周二）19：00，「大成學(xué)堂」特邀南京大學(xué)張洋潯博士做客直播間，為大家?guī)?lái)“膜片鉗技術(shù)解析與經(jīng)驗(yàn)分享”。通過(guò)本次直播課程，你可以收獲膜片鉗技術(shù)的詳細(xì)解析、多年實(shí)驗(yàn)操作經(jīng)驗(yàn)、日常操作注意事項(xiàng)等方面的專(zhuān)業(yè)知識(shí)，還可在線提問(wèn)獲得詳細(xì)解答。 

張洋潯 博士

南京大學(xué)博士，致力于研究?jī)?nèi)源性神經(jīng)遞質(zhì)/調(diào)質(zhì)系統(tǒng)及外源性藥物對(duì)前庭代償?shù)挠绊懠吧窠?jīng)機(jī)制，擅長(zhǎng)應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗記錄、環(huán)路示蹤、光/化學(xué)遺傳學(xué)操控方法、光纖記錄等實(shí)驗(yàn)技術(shù)。相關(guān)研究成果發(fā)表在Journal of Neuroscience, Biomedicine & Pharmacotherapy, Neuroscience Bulletin等學(xué)術(shù)期刊。

8月23日（周二）19：00

相約直播間，輕松掌握膜片鉗技術(shù)

↑↑碼上預(yù)約，快來(lái)免費(fèi)報(bào)名

單細(xì)胞樣本制備老失敗？

流式實(shí)驗(yàn)得到數(shù)據(jù)不可靠？

流式圖不知道怎么分析？

「全線賦能“沃”的實(shí)驗(yàn)」之實(shí)驗(yàn)方法實(shí)戰(zhàn)教程

直播第四期將帶來(lái)

《流式細(xì)胞術(shù)》

從單細(xì)胞制備到流式細(xì)胞術(shù)，理論+實(shí)例

帶你快速get到其中的難點(diǎn)要點(diǎn)

直播時(shí)間

5月31日（周二）19：00

報(bào)名方式

識(shí)別上方二維碼，立即免費(fèi)報(bào)名

主題：?jiǎn)渭?xì)胞懸液樣本的分類(lèi)及制備

• 單細(xì)胞懸液樣本類(lèi)型

• 制備注意事項(xiàng)

• 制備方法實(shí)例

講師：馮啟崢

瑞沃德高級(jí)產(chǎn)品方案經(jīng)理，專(zhuān)注動(dòng)物傳染病學(xué)和細(xì)胞與分子免疫學(xué)研究多年，在動(dòng)物疫苗研發(fā)、CRISPR的原核細(xì)胞應(yīng)用方面有著較為豐富的經(jīng)驗(yàn)，致力于為客戶(hù)提供專(zhuān)業(yè)的細(xì)胞與分子生物研究方案。

主題：流式細(xì)胞術(shù)的原理及應(yīng)用

• 儀器基本結(jié)構(gòu)解析

• 實(shí)驗(yàn)方法實(shí)操講解

• 技術(shù)應(yīng)用介紹

講師：方晟

昆明理工大學(xué)碩士研究生，已發(fā)表SCI論文4篇，在載體構(gòu)建、藥物活性篩選、腫瘤模型構(gòu)建、單細(xì)胞數(shù)據(jù)分析等方面有著豐富的經(jīng)驗(yàn)，研究方向主要是抗腫瘤藥物的抗 癌機(jī)理和單細(xì)胞測(cè)序分析。

上期直播間互動(dòng)問(wèn)題

這次我們?nèi)繛樾』锇榻獯?/p>

1、做外周神經(jīng)損傷的小鼠能活多久？如何飼養(yǎng)？

外周神經(jīng)損傷一般不會(huì)造成動(dòng)物的死亡，但一些特殊情況會(huì)影響動(dòng)物的存活率，比如為了避免在手術(shù)部位引起不良組織炎癥，我們應(yīng)該盡量縮短手術(shù)時(shí)間，如果手術(shù)部位意外出血，要用棉簽適當(dāng)按壓。如果出血沒(méi)有停止，就不要對(duì)這只動(dòng)物進(jìn)行進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。術(shù)后動(dòng)物應(yīng)該放進(jìn)干凈的鼠籠并分籠飼養(yǎng)，注意保溫。

2、脊髓損傷造模后，動(dòng)物出現(xiàn)功能障礙不能自主排尿該如何護(hù)理？

每日按壓排尿3次，以防泌尿系統(tǒng)感染；連續(xù)3天，每天兩次向腹腔注射相同劑量青霉素預(yù)防感染。

3、使用纖維蛋白膠修復(fù)的是外周神經(jīng)損傷的哪個(gè)類(lèi)型或者說(shuō)等級(jí)呢?

纖維蛋白膠可以應(yīng)用于橫斷的神經(jīng)，幫助受傷神經(jīng)的近端和遠(yuǎn)端殘端緊密對(duì)齊，是神經(jīng)縫合技術(shù)的一種替代方式。

4、坐骨神經(jīng)擠壓的結(jié)扎力度如何把控？

有一些文獻(xiàn)上會(huì)使用帶有力值的工具進(jìn)行擠壓神經(jīng)，如果我們沒(méi)有這類(lèi)的工具，可以使用血管夾對(duì)神經(jīng)進(jìn)行夾持，保證力度的一致性。

5、有專(zhuān)門(mén)評(píng)估大小鼠前肢抓取能力的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)嗎?

針對(duì)于前肢的抓取能力，爪抓力測(cè)試儀可以測(cè)動(dòng)物前肢，后肢的抓力，另外如果是判斷動(dòng)物前肢抓取食物的精細(xì)運(yùn)動(dòng)，可以用樓梯式抓取測(cè)試儀來(lái)進(jìn)行。

6、目前好像2D步態(tài)分析居多，慢慢也看到了3D步態(tài)分析，兩者相比各自有什么優(yōu)缺點(diǎn)呢?

步態(tài)沒(méi)有2D、3D的區(qū)別，國(guó)內(nèi)使用較多的步態(tài)有2種：第一種是依靠壓力感應(yīng)可以生成動(dòng)物腳掌受力的情況，判斷動(dòng)物的損傷情況；第二種是通過(guò)視頻記錄動(dòng)物足部在運(yùn)動(dòng)時(shí)的軌跡，通過(guò)足部的運(yùn)動(dòng)過(guò)程計(jì)算生成動(dòng)物活動(dòng)過(guò)程中四肢運(yùn)動(dòng)的各項(xiàng)指標(biāo)來(lái)判斷動(dòng)物的損傷情況。這兩種方法從2個(gè)不同的方面完善了步態(tài)的分析數(shù)據(jù)，但實(shí)際上無(wú)法互相替代。一般來(lái)說(shuō)大鼠步態(tài)用第一種壓力感應(yīng)測(cè)試的會(huì)多一些，小鼠步態(tài)則用視頻記錄的多一些。所謂的3D步態(tài)是通過(guò)從側(cè)面拍攝動(dòng)物運(yùn)動(dòng)時(shí)的腿部活動(dòng)，對(duì)動(dòng)物的步態(tài)運(yùn)動(dòng)進(jìn)行更為細(xì)致的評(píng)估，與傳統(tǒng)步態(tài)記錄的是2個(gè)維度的信息，無(wú)法進(jìn)行替代。由于需要識(shí)別動(dòng)物腿部的關(guān)節(jié)，目前無(wú)法與足底步態(tài)很好的融合結(jié)果。

7、這種轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)是可以大小鼠通用的嗎？如何檢測(cè)到掉落？

轉(zhuǎn)棒大小鼠主機(jī)通用，但是跑道是需要替換的。設(shè)備通過(guò)紅外感應(yīng)，電子感應(yīng)等自動(dòng)檢測(cè)動(dòng)物掉落情況，停止計(jì)時(shí)。

8、外周神經(jīng)損傷會(huì)導(dǎo)致疼痛致敏，在模型檢測(cè)中可以用什么疼痛檢測(cè)方法呢？

主要看測(cè)痛的部位，機(jī)械痛一般可以用vonfery針或電子測(cè)痛儀來(lái)進(jìn)行測(cè)試，針對(duì)不同部位也有面部疼痛測(cè)試儀（三叉神經(jīng)），壓感測(cè)痛儀（背部，較大的關(guān)節(jié)），鉗式測(cè)痛儀（整個(gè)腳，細(xì)小的關(guān)節(jié)），熱痛一般測(cè)試動(dòng)物足底或尾部，使用紅外測(cè)痛儀或者甩尾測(cè)痛儀。

9、怎么手動(dòng)排尿？

按摩膀胱。

10、每天需要按摩多久？

術(shù)后需輕輕按摩擠壓膀胱進(jìn)行排尿，每次按摩到排空，每天至少三次。

11、不規(guī)則梯和錯(cuò)步分析儀是不是指一個(gè)東西啊？

是一種類(lèi)型的儀器，不同廠家的名稱(chēng)，測(cè)試方法，輸出的指標(biāo)會(huì)略有不同。

12、轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)一直做不出差異怎么辦？

可能有2種原因：

①測(cè)試時(shí)動(dòng)物已經(jīng)恢復(fù)到與正常鼠一致的水平，所以做不出差異。

解決方法：將轉(zhuǎn)棒測(cè)試時(shí)間提前。

②測(cè)試難度過(guò)于簡(jiǎn)單或者過(guò)于困難，導(dǎo)致差異很小，從而統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果無(wú)差異。

解決方法：調(diào)整實(shí)驗(yàn)難度，直到可以做出差異的結(jié)果。新型轉(zhuǎn)棒儀除了原先的勻速和勻加速以外還增加了階段加速等測(cè)試方法，實(shí)驗(yàn)難度有了更大的調(diào)整空間。

13、兩爪及四爪攀爬實(shí)驗(yàn)有合適的實(shí)驗(yàn)設(shè)備嗎？

不規(guī)則梯結(jié)合自制實(shí)驗(yàn)設(shè)備。

14、脊髓損傷后有哪些評(píng)估手段？

脊髓損傷后可通過(guò)行為學(xué)對(duì)運(yùn)動(dòng)及感覺(jué)進(jìn)行評(píng)估。BBB法：一般用于觀察大鼠后肢行走及肢體活動(dòng)，評(píng)分分為三個(gè)部分，0-7分評(píng)判動(dòng)物后肢關(guān)節(jié)活動(dòng)情況，8-13分評(píng)判后肢步態(tài)及協(xié)調(diào)功能，14-21分評(píng)判運(yùn)動(dòng)中爪的精細(xì)活動(dòng)；BMS評(píng)分是在BBB評(píng)分基礎(chǔ)上針對(duì)小鼠的運(yùn)動(dòng)特點(diǎn)做出了完善和修改，是專(zhuān)門(mén)用于小鼠后肢功能的評(píng)分方法。其他運(yùn)動(dòng)相關(guān)行為學(xué)：步態(tài)分析系統(tǒng)用于評(píng)估步態(tài)動(dòng)力學(xué)、協(xié)調(diào)性分析、平衡性分析等；轉(zhuǎn)棒儀可評(píng)估動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性；行走障礙分析儀可分析簡(jiǎn)單步態(tài)及運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性等。感覺(jué)功能相關(guān)行為學(xué)：Vonfrey測(cè)痛針用于評(píng)估對(duì)觸碰的敏感性；冷熱盤(pán)用來(lái)測(cè)試動(dòng)物對(duì)冷熱刺激的敏感度。

15、平衡木也可以做小鼠嗎 ？

有小鼠平衡木可以進(jìn)行小鼠實(shí)驗(yàn)。

16、請(qǐng)問(wèn)外周神經(jīng)損傷后有哪些手段可以評(píng)價(jià)感覺(jué)功能的損失？

感覺(jué)功能相關(guān)行為學(xué)：機(jī)械痛一般可以用vonfery針或電子測(cè)痛儀來(lái)進(jìn)行測(cè)試，評(píng)估對(duì)觸碰的敏感性，針對(duì)不同部位也有面部疼痛測(cè)試儀（三叉神經(jīng)），壓感測(cè)痛儀（背部，較大的關(guān)節(jié)），鉗式測(cè)痛儀（整個(gè)腳，細(xì)小的關(guān)節(jié)），熱痛一般測(cè)試動(dòng)物足底或尾部，使用紅外測(cè)痛儀（用于量化對(duì)小鼠和大鼠后爪輻射或紅外熱刺激的熱閾值的方法）或者甩尾測(cè)痛儀（一種基于對(duì)嚙齒動(dòng)物中熱刺激回避反應(yīng)的潛伏期測(cè)量的疼痛實(shí)驗(yàn)）。

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9月27日（周二）20：00，最/新一期「大成學(xué)堂」直播活動(dòng)成功舉辦。本次直播，美國(guó)貝勒醫(yī)學(xué)院劉海蘭博士在線詳解神經(jīng)性厭食癥新調(diào)控機(jī)制的前沿研究。該研究成果已發(fā)表在Nature Neuroscience上，題為“A D2 to D1 shift in dopaminergic inputs to midbrain 5-HT neurons causes anorexia in mice”。作為第 一作者，劉海蘭博士在此次直播中細(xì)致講解了其研究的思路，并在線解答了大家的提問(wèn)，獲得滿屏好評(píng)。

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首先，劉海蘭博士介紹了研究背景。神經(jīng)性厭食癥作為一種高致死的精神疾病，近年來(lái)發(fā)病率顯著上升，但是其發(fā)病機(jī)制并不明確、治 療手段也有限。目前基礎(chǔ)研究和臨床研究表明，神經(jīng)性厭食癥的病人伴隨著多巴胺受體的多位點(diǎn)突變，這提示多巴胺神經(jīng)系統(tǒng)的異常也與厭食癥的發(fā)生 發(fā)展有關(guān)。同時(shí)研究表明位于中腦腹側(cè)被蓋區(qū)（VTA）的多巴胺（dopamine）神經(jīng)元和位于中腦中縫背核（DRN）的五羥色胺（5-HT）神經(jīng)元能夠參與調(diào)控包括進(jìn)食在內(nèi)的動(dòng)機(jī)性行為，它們也被發(fā)現(xiàn)與神經(jīng)性厭食癥的發(fā)病機(jī)制相關(guān)。

基于這些研究背景，隨后劉海蘭博士分享了研究的詳細(xì)情況。其團(tuán)隊(duì)利用TPH2-CreER小鼠模型開(kāi)展了系列實(shí)驗(yàn)，采用神經(jīng)環(huán)路示蹤技術(shù)和電生理技術(shù)，首次發(fā)現(xiàn)了中腦腹側(cè)被蓋區(qū)-中縫背核（VTA→DRN）的DAVTA神經(jīng)元→5-HTDRN神經(jīng)元環(huán)路調(diào)控食欲和神經(jīng)性厭食癥。主要研究過(guò)程，主要為以下四方面內(nèi)容：

• 低頻刺激抑 制DAVTA→5-HTDRN神經(jīng)環(huán)路并通過(guò) DRD2 促進(jìn)攝食行為

• 高頻刺激激活DAVTA→5-HTDRN神經(jīng)環(huán)路并通過(guò) DRD1 抑 制攝食行為

• DAVTA→5-HTDRN神經(jīng)環(huán)路的活動(dòng)調(diào)控神經(jīng)厭食癥

• 5-HTDRN神經(jīng)元中的 DA受體可調(diào)節(jié)神經(jīng)厭食癥狀

直播時(shí)觀眾們提問(wèn)踴躍，但是由于時(shí)間限制無(wú)法一一解答。在這里，我們特意整理出部分提問(wèn)文字版的解答~

聊天區(qū)部分問(wèn)題詳解（文字版）

1.研究神經(jīng)性厭食癥除了常見(jiàn)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)、電生理技術(shù)之外，是否有新的實(shí)驗(yàn)方法能?chē)L試?
答：在我們的課題中除了用了電生理，以及這些轉(zhuǎn)基因小鼠模型之外，我們也使用了化學(xué)遺傳學(xué)、光遺傳學(xué)方法去慢性或急性的操控神經(jīng)元的活性，同時(shí)我們也使用了光纖記錄，實(shí)時(shí)記錄神經(jīng)元的活性改變。

2.aba小鼠的成功率和存活率有多少?
答：在這個(gè)過(guò)程中我們的那個(gè)存活率，因?yàn)槲覀冞@邊動(dòng)物protocal上限制的是如果小鼠的體重低于原始體重的80%，就必須要處死，所以我們算存活率是當(dāng)小鼠體重降到它原來(lái)體重的80%的時(shí)候，我們就認(rèn)為這只動(dòng)物已經(jīng)死了。所以在我們的aba模型中，通常到第三天左右就會(huì)有動(dòng)物的體重低于原來(lái)體重的80%，然后隨著到第四天第五天可能會(huì)有50%左右的小鼠體重低于80%。

3.激活DRN中5HT神經(jīng)元如何能減少進(jìn)食？

答：5-HT神經(jīng)元它在攝食中的作用已經(jīng)有很多報(bào)道了。有一些報(bào)道說(shuō)5-HT神經(jīng)元可以投射至下丘腦的POMC和AgRP神經(jīng)元。POMC和AgRP神經(jīng)元在攝食中的作用也是被許許多多研究證實(shí)的。POMC神經(jīng)元它可以抑 制AgRP神經(jīng)元，激活食欲。而5-HT神經(jīng)元可以通過(guò)它的受體抑 制AgRP神經(jīng)元，同時(shí)激活POMC神經(jīng)元活性來(lái)抑 制食欲。

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「大成學(xué)堂」以建立“全 球精英分享先進(jìn)技術(shù)，解析領(lǐng)域內(nèi)研究熱點(diǎn)”為宗旨的知識(shí)分享平臺(tái)。欄目開(kāi)播以來(lái)已開(kāi)展了超10場(chǎng)直播活動(dòng)，數(shù)十名海內(nèi)外知名學(xué)者在此講授生命科學(xué)學(xué)術(shù)理論、實(shí)驗(yàn)技術(shù)等課程。歡迎大家進(jìn)入「大成學(xué)堂」專(zhuān)題頁(yè)，學(xué)習(xí)相關(guān)課程。

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近年來(lái)，隨著法規(guī)的推動(dòng)，制藥人士對(duì)于分析方法生命周期的關(guān)注度越來(lái)越高。USP通則<1220>分析方法生命周期已于2022年5月1日生效，ICH Q14<分析方法開(kāi)發(fā)>也已結(jié)束第三階段公開(kāi)征求意見(jiàn)階段。ICH Q14指出，在分析方法開(kāi)發(fā)時(shí)，可以使用基礎(chǔ)（即傳統(tǒng)型）方式或加強(qiáng)型方式。本文案例即使用加強(qiáng)型方式 — Fusion QbD軟件輔助生物藥分析方法開(kāi)發(fā)。

摘要 

生物藥分析部門(mén)花費(fèi)了大量時(shí)間開(kāi)發(fā)耐用性好的分析方法，以保證原料藥和成品是純的，穩(wěn)定的。為了快速將產(chǎn)品應(yīng)用到患者身上，研發(fā)組織不斷地加快方法開(kāi)發(fā)流程。提高分析方法開(kāi)發(fā)效率的一個(gè)方法就是使用自動(dòng)篩選和自動(dòng)方法優(yōu)化工具。

Fusion QbD軟件可支持色譜不同分離模式的自動(dòng)篩選流程。Fusion允許客戶(hù)輸入與分離模式相關(guān)的幾個(gè)因素進(jìn)行研究。然后基于統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)以評(píng)估這些因素的影響。設(shè)計(jì)好的DoE實(shí)驗(yàn)可導(dǎo)入Empower，并自動(dòng)在Empower中創(chuàng)建儀器方法和樣品組，減少方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中大量的人工工作量。Empower運(yùn)行樣品后，結(jié)果再一鍵導(dǎo)入Fusion中做建模分析，評(píng)估各色譜參數(shù)。

Fusion-Empower工作流程 

在Fusion QbD中生成用戶(hù)自定義考察因素的DoE實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。Fusion將儀器方法寫(xiě)入到Empower中，處理后的樣品結(jié)果再導(dǎo)入Fusion中分析，得到更優(yōu)的色譜條件。

圖1.  Fusion Empower工作流程

案例1- WCX模式方法開(kāi)發(fā)

• Fusion QbD自動(dòng)篩選和自動(dòng)優(yōu)化；

• 通過(guò)Fusion產(chǎn)生69個(gè)儀器方法和樣品組，并導(dǎo)入到Empower3； 

• 5個(gè)小時(shí)人工，120小時(shí)儀器運(yùn)行時(shí)間；

• DoE實(shí)驗(yàn)考察因素：pH、梯度時(shí)間、流動(dòng)相組成、有機(jī)添加物、鹽濃度和柱溫；

• QbD開(kāi)發(fā)的分析方法結(jié)果顯示：主峰峰形改善，酸性系列峰和堿性系列峰的分離度都提高了；

• 圖2為QbD開(kāi)發(fā)好的分析方法和之前傳統(tǒng)方式開(kāi)發(fā)了5個(gè)月的方法色譜對(duì)比圖：

圖2. WCX 液相分離模式（A. 傳統(tǒng)方式開(kāi)發(fā)的分析方法色譜圖 ；B. Fusion QbD開(kāi)發(fā)的色譜圖，顯示酸性系列峰和堿性系列峰的分離度都得到提高）。

案例1 - 疊加圖

將Empower結(jié)果導(dǎo)入到Fusion中，產(chǎn)生WCX HPLC疊加圖。基于客戶(hù)定義的方法性能指標(biāo)，白色區(qū)域是可接受性能區(qū)域，有顏色的區(qū)域是不滿足性能要求的區(qū)域。

圖3. 疊加圖顯示白色區(qū)域?yàn)闈M足性能要求的可接受性能區(qū)域（左圖：鹽濃度vs梯度時(shí)間。右圖：鹽濃度vs. pH）。

案例2 - HILIC方法開(kāi)發(fā) — Fusion QbD篩選

• Fusion QbD產(chǎn)生的38個(gè)儀器方法導(dǎo)入到Empower；

• 2個(gè)小時(shí)人工，15個(gè)小時(shí)儀器運(yùn)行時(shí)間；

• DoE實(shí)驗(yàn)考察的因素：pH、柱溫、梯度時(shí)間；

• 得到的分析方法顯示蛋白1和蛋白2的分離度提高，兩個(gè)蛋白的拖尾因子降低。

圖4. HILIC液相分離模式（A. 傳統(tǒng)方法開(kāi)發(fā)的分析方法色譜圖；B. Fusion QbD開(kāi)發(fā)的分析方法色譜圖，顯示蛋白1和蛋白2的分離度提高，拖尾因子降低）。

 結(jié)論 

Fusion QbD成功用于生物藥的方法開(kāi)發(fā)，首先生成HILIC和陽(yáng)離子交換模式的DoE實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。然后使用Fusion中的導(dǎo)出功能，在Empower中自動(dòng)創(chuàng)建DoE設(shè)計(jì)好的儀器方法和樣品組。通過(guò)自動(dòng)篩選功能，HILIC方法實(shí)現(xiàn)了提高兩個(gè)蛋白峰的分離度目標(biāo)，陽(yáng)離子交換方法實(shí)現(xiàn)了分離峰的數(shù)量和分離度的提高目標(biāo)。在Empower3中處理好的結(jié)果導(dǎo)入到Fusion，經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)和建模分析，得到了各個(gè)參數(shù)的操作空間(MODR)。使用Fusion QbD做方法開(kāi)發(fā)節(jié)約的人工，大約為2.5個(gè)人工(FTE)一個(gè)月的工作時(shí)間。

11月3日，“大成學(xué)堂 | 卒中研究系列講座”第四期直播課圓滿舉辦。本次直播課，特邀四川大學(xué)華西醫(yī)院靈長(zhǎng)類(lèi)疾病動(dòng)物模型研究室主任鐘治暉教授，圍繞“非人靈長(zhǎng)類(lèi)腦血管疾病動(dòng)物模型中的創(chuàng)新和應(yīng)用”主題，分享自身團(tuán)隊(duì)建立的腦卒中動(dòng)物模型，并和網(wǎng)友們帶來(lái)精彩的互動(dòng)答疑，實(shí)踐與理論相結(jié)合，干貨滿滿！

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在建模過(guò)程中，腦血流的監(jiān)測(cè)非常重要。通過(guò)腦血流監(jiān)測(cè)，可以排除線栓造成的腦損傷造成的行為學(xué)的異常，從而判斷造模是否成功。在分享中鐘教授介紹瑞沃德的激光散斑成像系統(tǒng)是進(jìn)行腦血流監(jiān)測(cè)的有力工具。實(shí)際上，腦血流的監(jiān)測(cè)在卒中類(lèi)研究中不僅對(duì)于模型的質(zhì)控十分重要，同時(shí)在其他的神經(jīng)系統(tǒng)疾病中也應(yīng)作為參考指標(biāo)，如AD、PD、癲癇等都會(huì)伴隨著腦血流的生理變化。

雖然嚙齒類(lèi)動(dòng)物模型在神經(jīng)研究領(lǐng)域特別是腦卒中領(lǐng)域有很多研究和成果，但是這些研究成果的新藥研發(fā)臨床轉(zhuǎn)化率非常低。究其原因，研究所用模型有很大影響。在通過(guò)一系列的對(duì)比，我們可以了解到靈長(zhǎng)類(lèi)作為造模的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物具有許多優(yōu)勢(shì)：靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物有腦回灰質(zhì)/白質(zhì)比更高(更接近人)；靈長(zhǎng)類(lèi)血管更大更粗，可以使用介入手段造模，臨床特征更接近于人；靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物模型能提供神經(jīng)系統(tǒng)疾病研究最/好的標(biāo)本——腦脊液……完整內(nèi)容敬請(qǐng)觀看課程視頻。

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在直播尾聲的互動(dòng)答疑環(huán)節(jié)，鐘治暉教授結(jié)合自身已有的研究經(jīng)驗(yàn)，細(xì)致詳實(shí)地一一解答大家的困惑。

聊天區(qū)部分問(wèn)題詳解（文字版）

1.建立stroke模型一年后，猴子的長(zhǎng)期神經(jīng)功能缺損是否還明顯？

答：猴子的腦缺血模型建立后，在1年后不會(huì)有明顯的神經(jīng)癥狀，通常在1個(gè)月后神經(jīng)癥狀基本就消失恢復(fù)正常的生活。從動(dòng)物福利的角度出發(fā)，也要求動(dòng)物在1個(gè)月后能夠恢復(fù)正常的生活，然后形成隊(duì)列進(jìn)行持續(xù)的觀察。

2.大動(dòng)物模型建立后多長(zhǎng)時(shí)間取腦脊液，需要多少量的樣品？

大動(dòng)物取腦脊液需要先通過(guò)手術(shù)埋置取液管，可隨時(shí)取樣品并無(wú)時(shí)間限制，一般需要的樣品量為200-300μl。

3.做非人靈長(zhǎng)類(lèi)行為學(xué)實(shí)驗(yàn)一般樣本量多少是比較合適的？

大動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)有別于小動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，并不是近交系或封閉群，大動(dòng)物遺傳背景比較一致，方差較小，因此并不需要完整的高、中、低劑量的大量動(dòng)物。靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)最重要的是數(shù)據(jù)可以前后對(duì)比。一般先查閱對(duì)應(yīng)的背景數(shù)據(jù)庫(kù)，再?zèng)Q定是否進(jìn)一步深入研究。

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「大成學(xué)堂」以建立“全 球精英分享先進(jìn)技術(shù)，解析領(lǐng)域內(nèi)研究熱點(diǎn)”為宗旨的知識(shí)分享平臺(tái)。欄目開(kāi)播以來(lái)已開(kāi)展了近10場(chǎng)直播活動(dòng)，超10名海內(nèi)外知名學(xué)者在此講授生命科學(xué)學(xué)術(shù)理論、實(shí)驗(yàn)技術(shù)等課程。歡迎大家進(jìn)入「大成學(xué)堂」專(zhuān)題頁(yè)，學(xué)習(xí)相關(guān)課程。

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光纖記錄（Fiber photometry）通過(guò)時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)(TCSPC)的光纖光學(xué)來(lái)測(cè)量熒光分子在大腦中發(fā)出的光信號(hào)。基于基本原理，使用直徑較小的光纖探頭就能實(shí)現(xiàn)傳輸并收集熒光信號(hào)，將采集到的發(fā)射信號(hào)通過(guò)二色鏡進(jìn)行光譜分離，并通過(guò)濾波器聚焦到探測(cè)器上，即可檢測(cè)出熒光的實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)變化。

所以光纖記錄方法的優(yōu)勢(shì)主要在于：

1. 植入的光纖探頭體積小且柔韌性好，使得周?chē)M織損傷較小；

2. 因?yàn)橹踩牍饫w體積小，方便同時(shí)記錄多個(gè)大腦區(qū)域的信號(hào)；

3. 基于TCSPC的光纖是檢測(cè)發(fā)射光的超靈敏工具，滿足在低強(qiáng)度激發(fā)光下即可檢測(cè)熒光，從而減少了光漂白的機(jī)會(huì)，并延長(zhǎng)了記錄時(shí)間。

目前光纖記錄常用于檢測(cè)鈣信號(hào)及神經(jīng)遞質(zhì)信號(hào)變化，背后原理是通過(guò)給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物注射基因編碼型的熒光探針/生物傳感器，隨后通過(guò)光纖記錄即可檢測(cè)到對(duì)應(yīng)神經(jīng)信號(hào)的變化。基因編碼生物傳感器是一類(lèi)生物分子信號(hào)介質(zhì)，它被整合到細(xì)胞的基因組中，然后由細(xì)胞的分子機(jī)制產(chǎn)生。這些蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)可以被設(shè)計(jì)成在化學(xué)物質(zhì)存在或細(xì)胞環(huán)境變化時(shí)改變構(gòu)象，從而產(chǎn)生熒光信號(hào)。

常見(jiàn)的基因編碼型的生物傳感器根據(jù)應(yīng)用場(chǎng)景主要分為：

1、膜去極化。一旦動(dòng)作電位(AP)被激活，AP將沿軸突向下傳播，并使突觸前鈕扣對(duì)應(yīng)的膜去極化(從?65 mV到+40 mV或更大)。這種膜去極化作為神經(jīng)元激活的分子特征，可以通過(guò)遺傳編碼的電壓指示探針(GEVIs)檢測(cè)；

2、電壓門(mén)控Ca2+通道激活和輸入。當(dāng)膜去極化發(fā)生在突觸前活躍區(qū)，電壓門(mén)控Ca2+通道打開(kāi)，導(dǎo)致Ca2+快速內(nèi)流。這種升高的細(xì)胞質(zhì)Ca2+濃度(從~100-~400nM)的變化可以持續(xù)約50-150毫秒，通過(guò)基因編碼Ca2+指示劑(GECIs)即可檢測(cè)；

3、膜泡融合/胞外分泌。胞質(zhì)Ca2+水平升高觸發(fā)易于釋放的突觸囊泡的胞外排泄，這些突觸囊泡充滿了神經(jīng)遞質(zhì)。在胞外分泌過(guò)程中，當(dāng)突觸囊泡與質(zhì)膜融合時(shí)，細(xì)胞外介質(zhì)(pH ~ 7.4)中和囊泡腔(pH ~ 5.5)的酸性pH值，這種中和作用可以通過(guò)pH值指標(biāo)探針檢測(cè)，如pHluorin；

4、神經(jīng)遞質(zhì)傳遞。一旦神經(jīng)遞質(zhì)被釋放到突觸，它們的功能根據(jù)遞質(zhì)類(lèi)型而異，可以通過(guò)神經(jīng)遞質(zhì)(NT)指標(biāo)檢測(cè)，如iAChSnFR和 dLight。基因編碼型乙酰膽堿(ACh)探針iAChSnFR用于檢測(cè)不同生物樣品中的ACh瞬變。它被設(shè)計(jì)成在膽堿結(jié)合時(shí)發(fā)出熒光，并被證實(shí)可用于測(cè)量小鼠體內(nèi)獎(jiǎng)勵(lì)活動(dòng)中海馬ACh傳遞的反應(yīng)。dLight是一種基于受體的遺傳編碼多巴胺(DA)熒光探針。它是通過(guò)用環(huán)狀排列的綠色熒光蛋白(cpGFP)取代DA受體(DAR)的第三個(gè)胞內(nèi)環(huán)（Intracellular Loop 3，ICL3）的位置而構(gòu)建的。dLight產(chǎn)生不同的熒光強(qiáng)度對(duì)應(yīng)于DA與DAR的結(jié)合量。

圖1所示：光纖記錄系統(tǒng)原理和基因編碼熒光探針。

A.光纖記錄裝置和信號(hào)處理的原理圖。在該模型中，將基因編碼的熒光探針病毒注射到腹側(cè)被蓋區(qū)(VTA)，投射的信號(hào)從伏隔核(NAc)和前額皮質(zhì)(PFC)記錄下來(lái)。

B.四種不同的基因編碼型探針及其對(duì)應(yīng)的神經(jīng)傳遞分子信號(hào)的示意圖表示。隨著動(dòng)作電位(AP)的傳播，電壓門(mén)控鈣(Ca2+)通道被觸發(fā)打開(kāi)，導(dǎo)致快速的Ca2+內(nèi)流；隨即誘導(dǎo)突觸囊泡的胞吐，突觸囊泡將神經(jīng)遞質(zhì)(NTs)釋放到突觸間隙，在突觸間隙中神經(jīng)遞質(zhì)可以與相應(yīng)的受體結(jié)合并激活突觸后神經(jīng)元，這些分子特征可以通過(guò)電壓指標(biāo)(GEVIs) ，Ca2+探針(GECIs)， pH值指標(biāo)探針(如pHluorin)，NT指標(biāo)探針(G protein-coupled受體,GCPR)進(jìn)行檢測(cè)。示意圖非真實(shí)比例。

光纖記錄實(shí)驗(yàn)操作較為簡(jiǎn)便，目前在神經(jīng)環(huán)路分子機(jī)制探究上應(yīng)用越發(fā)廣泛，同時(shí)越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)室將光纖記錄與其他實(shí)驗(yàn)技術(shù)進(jìn)行聯(lián)合應(yīng)用。

1、光纖記錄與光遺傳

光遺傳學(xué)是一種以光作為工具特異性激活或抑制神經(jīng)傳遞的方法。研究人員經(jīng)常使用光遺傳學(xué)以極大的時(shí)間精確度來(lái)研究確定的神經(jīng)元亞群對(duì)特定行為的影響。但是光照的作用僅僅通過(guò)動(dòng)物行為的檢測(cè)評(píng)估是不完善的，很有可能存在“假陽(yáng)性”和“假陰性”，且不能排除自然行為的干擾。而光纖記錄即可提供足夠的證據(jù)支撐。光遺傳學(xué)結(jié)合光纖記錄的方法使研究人員能夠研究特定細(xì)胞、它們的投射關(guān)系的功能意義。

2、光纖記錄與核磁

一般認(rèn)為，血氧水平檢測(cè)(BOLD) fMRI(功能性磁共振成像)通過(guò)血管耦合機(jī)制與神經(jīng)傳遞在時(shí)空上相關(guān)。為了更深入地了解神經(jīng)元對(duì)BOLD信號(hào)的貢獻(xiàn)，電生理學(xué)技術(shù)已被納入功能磁共振成像研究。雖然這些研究提供了關(guān)于神經(jīng)元環(huán)路更具體的信息，但功能磁共振成像(fMRI)所需要的磁場(chǎng)會(huì)在電生理信號(hào)中產(chǎn)生偽影。

而近幾年的研究中將光纖記錄和fMRI相結(jié)合，證明了Ca2+峰值和不同大腦區(qū)域的BOLD信號(hào)之間的聯(lián)系，同時(shí)有文獻(xiàn)證明星形膠質(zhì)細(xì)胞Ca2+水平的變化與BOLD信號(hào)也有關(guān)聯(lián)。fMRI技術(shù)與光纖記錄相結(jié)合，使fMRI掃描具有細(xì)胞分辨率。這種綜合技術(shù)有潛力闡明單個(gè)神經(jīng)元亞群對(duì)大腦回路的貢獻(xiàn)。

圖2所示：將BOLD fMRI技術(shù)與細(xì)胞-特異性病毒傳遞的GCaMP6（一種遺傳編碼的鈣指示劑，GECI）的光學(xué)檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合（Schlegel et al .,Nature protocols(2018)）

3、光纖記錄與電生理

目前，電生理學(xué)是研究行為與自由行為動(dòng)物體內(nèi)神經(jīng)元?jiǎng)恿W(xué)關(guān)系的金標(biāo)準(zhǔn)分析技術(shù)。電生理學(xué)允許同時(shí)記錄數(shù)百或數(shù)千個(gè)細(xì)胞、離子通道和神經(jīng)元活動(dòng)，電極可以落在單個(gè)細(xì)胞上，記錄細(xì)胞內(nèi)信號(hào)變化，或者落在細(xì)胞外空間，監(jiān)測(cè)整個(gè)大腦區(qū)域的電生理信號(hào)。它測(cè)量的電信號(hào)（電流或電位）以高時(shí)間分辨率的毫秒級(jí)離子通量導(dǎo)出。

電極陣列記錄來(lái)自電極尖端附近所有細(xì)胞的信號(hào)，不能直接區(qū)分細(xì)胞種類(lèi)。由于光纖記錄方法缺乏較高的時(shí)間分辨率，在體電生理學(xué)缺乏細(xì)胞類(lèi)型特異性，二者結(jié)合有助于高時(shí)空分辨率下研究不同的大腦區(qū)域特定環(huán)路和行為狀態(tài)。

R820三色光纖記錄系統(tǒng)，可記錄GCaMP、dLight等綠色熒光指示劑或遞質(zhì)探針，及RCaMP、jrGECO1a等紅色指示劑或遞質(zhì)探針信號(hào)，同時(shí)特有的410nm光源用于獲取對(duì)照信號(hào)，有效排除噪聲。靈活的TTL信號(hào)輸入輸出設(shè)置，更方便拓展實(shí)驗(yàn)應(yīng)用。

R820三色多通道光纖記錄系統(tǒng)

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一、引言

在電力系統(tǒng)的日常運(yùn)維中，電纜故障排查是一項(xiàng)至關(guān)重要的技術(shù)工作。電纜故障不僅影響電力系統(tǒng)的穩(wěn)定運(yùn)行，還可能對(duì)設(shè)備安全及人員安全構(gòu)成威脅。本文基于武漢凱迪正大電氣有限公司工程師團(tuán)隊(duì)在孝感市漢川市湖北交投建設(shè)集團(tuán)武漢都市圈環(huán)線高速孝感南段項(xiàng)目部的一次電纜故障排查案例，詳細(xì)介紹電纜故障排查的技術(shù)流程、方法和經(jīng)驗(yàn)。

二、案例背景

2024年5月13日，武漢凱迪正大電氣有限公司接到孝感市漢川市湖北交投建設(shè)集團(tuán)的邀請(qǐng)，其武漢都市圈環(huán)線高速孝感南段項(xiàng)目部一條380V電纜發(fā)生故障，需進(jìn)行故障排查。

三、初步檢測(cè)與故障類(lèi)型分析

初步檢測(cè)：工程師團(tuán)隊(duì)抵達(dá)現(xiàn)場(chǎng)后，首先對(duì)電纜進(jìn)行初步檢測(cè)。使用萬(wàn)用表檢測(cè)電纜的ABC三相，結(jié)果顯示三相相通，排除斷線故障。接著，使用絕緣電阻測(cè)試儀測(cè)試電纜的絕緣性能，發(fā)現(xiàn)A相、B相、C相對(duì)地的阻值均為1.7MΩ，零線對(duì)地阻值為1.8MΩ，測(cè)試數(shù)據(jù)明顯偏低，初步判斷為三相短路故障。

故障類(lèi)型分析：三相短路故障是電纜故障中較為常見(jiàn)的一種。此類(lèi)故障會(huì)導(dǎo)致電纜溫度升高，嚴(yán)重時(shí)可能引發(fā)火災(zāi)，需盡快定位故障電纜以便盡快開(kāi)展修復(fù)工作。

四、故障點(diǎn)定位技術(shù)與方法

為迅速定位故障點(diǎn)，工程師團(tuán)隊(duì)采用KD-212高低壓電纜故障測(cè)試儀的脈沖法進(jìn)行測(cè)試。在測(cè)試過(guò)程中，通過(guò)不斷調(diào)整測(cè)試參數(shù)和位置，最終將故障范圍縮小至距離測(cè)試點(diǎn)約15米的區(qū)域內(nèi)。

為進(jìn)一步確認(rèn)故障點(diǎn)，工程師團(tuán)隊(duì)利用工頻耐壓試驗(yàn)裝置和閃絡(luò)法進(jìn)行了進(jìn)一步的測(cè)試和查找。在距離測(cè)試點(diǎn)約15米距離的綠化帶旁的水泥電井下，工程師們撬開(kāi)石井蓋板，露出了電纜，并發(fā)現(xiàn)電纜的絕緣層有破損痕跡。經(jīng)過(guò)仔細(xì)檢查和驗(yàn)證，最終確定了這就是導(dǎo)致電纜故障的具體位置。

五、技術(shù)總結(jié)與建議

技術(shù)總結(jié)：本案例展示了電纜故障排查的全過(guò)程，包括初步檢測(cè)、故障類(lèi)型分析和故障點(diǎn)定位等關(guān)鍵環(huán)節(jié)。通過(guò)采用專(zhuān)業(yè)的測(cè)試儀器和科學(xué)的測(cè)試方法，工程師團(tuán)隊(duì)能夠迅速準(zhǔn)確地找到故障點(diǎn)，為后續(xù)的修復(fù)工作提供了明確的方向。

建議：在電纜故障排查過(guò)程中，保持高度的責(zé)任心和專(zhuān)業(yè)的態(tài)度至關(guān)重要。同時(shí)，不斷學(xué)習(xí)和掌握新的電纜故障排查技術(shù)和方法也是提高排查效率和質(zhì)量的關(guān)鍵。

六、結(jié)論

電纜故障排查是電力系統(tǒng)運(yùn)維中的一項(xiàng)重要工作。通過(guò)本案例分享，我們可以看到專(zhuān)業(yè)的測(cè)試儀器和科學(xué)的測(cè)試方法在電纜故障排查中的重要性。同時(shí)，保持高度的責(zé)任心和專(zhuān)業(yè)的態(tài)度也是確保排查工作順利進(jìn)行的關(guān)鍵。

產(chǎn)品參數(shù)

微納米顆粒 （針對(duì)200μm以下樣品）

應(yīng)用范圍：微納米材料內(nèi)部結(jié)構(gòu)分析

例    如：鋰電池陽(yáng)極材料、微納米顆粒

顆粒類(lèi)的樣品多數(shù)利用掃描電鏡檢測(cè)形貌、粒度統(tǒng)計(jì)、能譜并做一些長(zhǎng)度測(cè)量，但是一旦涉及內(nèi)部結(jié)構(gòu)觀察普通制樣方式很難達(dá)到要求。

舉例來(lái)講，圖1是客戶(hù)要求觀察顆粒表面和斷面形貌，研缽研磨后，結(jié)果并不理想，視野內(nèi)可見(jiàn)大量碎裂顆粒，且斷面情況各異更無(wú)法進(jìn)行測(cè)量等工作。

圖  1

圖2是用Gatan Ilion II設(shè)備拋光后結(jié)果，可見(jiàn)視野內(nèi)顆粒全部切開(kāi)，截面平整，易于觀察測(cè)量；圖3為局部放大，顆粒內(nèi)部結(jié)構(gòu)一覽無(wú)余。

圖  2

圖  3

圖  4

圖  5

電子元器件

應(yīng)用范圍：各類(lèi)微元器件

電子元器件由于其越來(lái)越微小、越來(lái)越復(fù)雜，其失效時(shí)很難定位，也很難用普通手段看清其內(nèi)部結(jié)構(gòu)（圖6）。圖中結(jié)果用Ilion II 進(jìn)行處理，局部放大圖片能夠看到幾十個(gè)nm結(jié)構(gòu)，后續(xù)進(jìn)行分析帶來(lái)極大便利。

圖  6

我們?cè)賮?lái)看一例（圖7）

圖  7

紅框1局部放大，可見(jiàn)有10層結(jié)構(gòu)

圖  8

紅框2局部放大，一目了然

圖  9

      溫恒濕試驗(yàn)箱是普遍的環(huán)境試驗(yàn)設(shè)備，盡管它的覆蓋率僅次烘箱，并且隨之客戶(hù)對(duì)機(jī)器設(shè)備質(zhì)量的追求完·美，現(xiàn)如今的恒溫恒濕試驗(yàn)箱實(shí)際操作起來(lái)也相對(duì)性方便快捷。可是無(wú)論是便宜的、還是昂貴的機(jī)器設(shè)備維修保養(yǎng)起來(lái)全是非常的繁雜，這就造成了客戶(hù)不可以立即去維修保養(yǎng)機(jī)器設(shè)備非常容易常見(jiàn)故障積累，檢修安全事故高發(fā)。

      恒溫恒濕試驗(yàn)箱非常容易出現(xiàn)的常見(jiàn)故障就是環(huán)境濕度常見(jiàn)故障，像那樣檢修環(huán)境濕度常見(jiàn)故障緣故的稿子網(wǎng)上有許多，并且都很含糊。下邊跟大家共享一下恒溫恒濕試驗(yàn)箱這種非常的環(huán)境濕度常見(jiàn)故障。

      如在恒溫恒濕試驗(yàn)箱的實(shí)際操作儀表盤(pán)上設(shè)置好溫度60度和環(huán)境濕度85%后，在儲(chǔ)水箱水資源充裕的狀況下運(yùn)行機(jī)器設(shè)備，曾當(dāng)過(guò)過(guò)段時(shí)間之后機(jī)器設(shè)備能一切正常升溫到60度，可是環(huán)境濕度只顯示信息有3%或是5%上下，并組加熱爐也很發(fā)燙、濕區(qū)球的控制器一切正常、儀表盤(pán)和固體能一切正常輸出、相匹配的杯子不少水能一切正常給加熱爐供電、過(guò)熱保

     護(hù)裝置沒(méi)有警報(bào)、增濕器有用數(shù)字萬(wàn)用表精確測(cè)量時(shí)通道、熱敏電阻器一切正常、增濕器管兩邊有AC 220V工作電壓，可是加熱爐的出蒸氣口就是說(shuō)沒(méi)有蒸氣出去。這由于水在必須純凈度的獨(dú)特狀況下能產(chǎn)生電導(dǎo)體把原本燒壞的增濕器管相互連接產(chǎn)生控制回路，因此這就造成了增濕器管盡管燒斷掉可是也可以發(fā)燙而且把加熱爐的水燒開(kāi)，可是卻又不可以燒開(kāi)造成蒸氣。實(shí)際上出現(xiàn)這一常見(jiàn)故障簡(jiǎn)易的方法就是用鉗形萬(wàn)用表精確測(cè)量增濕器管在工作中時(shí)的電流量尺寸，在己知增濕器管的輸出功率和工作電壓狀況下，根據(jù)精確測(cè)量到的電流量和算出去的電流量開(kāi)展核對(duì)，例如增濕器管是AC220V，2KW的規(guī)格型號(hào)，能夠計(jì)算它在滿輸出功率工作中時(shí)電流量是10A上下。當(dāng)精確測(cè)量到電流量比較嚴(yán)重偏鐘頭就可分辨是增濕器管燒斷掉，無(wú)需感覺(jué)加熱爐的水是熱的就認(rèn)為增濕器管是一切正常的，而去找其他常見(jiàn)故障點(diǎn)。

       盡管這一常見(jiàn)故障的叫法非常簡(jiǎn)單可是該類(lèi)常見(jiàn)故障卻十分罕見(jiàn)，由于當(dāng)增濕器管或是加熱管在燒斷后是短路情況，它早已喪失電導(dǎo)體的工作能力是不容易造成發(fā)熱量的，因此在純屬偶然的狀況外有別的化學(xué)物質(zhì)改版電導(dǎo)體把它聯(lián)接通斷后，增濕器管就修復(fù)了一部分加溫的作用。