DNA的堿基鏈是如何通過化學方法合成的？
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大家應該知道吧，文特爾2007年合成了diyi個人造細胞，那么請問，在文特爾人工合成DNA時，他是怎么做的？
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- sijie199396 2013-11-01 00:00:00
- 我們采用固相亞磷酰胺三酯法合成 DNA 片段，它 具有GX、快速的偶聯以及起始反應物穩定的特點。亞磷酰胺三酯法是將 DNA 固定在固相載體上完成 DNA 鏈的合成的，合成的方向是由待合成引物的 3' 端向 5' 端合成的，相鄰的核苷酸通過 3' → 5' 磷酸二酯鍵連接，具體反應步驟如下： diyi步：將預先連接在固相載體 CPG 上的活性基團被保護的核苷酸與三反應，脫去其 5'- 羥基的保護基團 DMT ，獲得游離的 5'- 羥基。 第二步：亞磷酰胺保護的核苷酸單體，與活化劑四氮唑混合，得到核苷亞磷酸活化中間體，它的 3' 端被活化，與 CPG 載體上連接堿基的 5'- 羥基發生縮合反應。 第三步：帶帽 (capping) 反應，縮合反應中會有少量 5'- 羥基沒有參加反應，用乙酸酐和 1- 甲基咪唑封閉 5'- 羥基，使其不能再繼續發生反應，這種短片段在純化時可以分離去除。 第四步：在氧化劑碘的作用下，亞磷酰形式轉變為更穩定的磷酸三酯。 經過以上四個步驟，一個脫氧核苷酸被連接到固相載體的核苷酸上。再以三脫去它的 5'- 羥基上的保護基團 DMT ，重復以上步驟，直到所有要求合成的堿基被接上去。
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