熒光顯微鏡標本要如何制作

廣州市明美光電技術有限公司 2019-06-18 14:21:10 871  瀏覽

•  熒光顯微鏡是以紫外線為光源， 用以照射被檢物體， 使之發出熒光， 然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細胞內物質的吸收、運輸、化學物質的分布及定位等。

  熒光顯微鏡標本要如何制作？

  熒光顯微鏡標本制作方法一共分為5個步驟：
  (一) 玻片及蓋玻片(Slide and Coverslips)
  (二)組織切片 (Tissue Sections)
  (三)細胞培養法 (Cell Culture Preparation)
  (四) 涂抹法或捺壓法(Smear and Impression Preparation)
  (五) 固定 (Fixation)

  熒光顯微鏡標本制作步驟

  (一) 玻片及蓋玻片(Slide and Coverslips)
  玻片及蓋玻片品質必須很好而沒有熒光，玻片厚度≦1.0mm 者便可用，玻片需要清洗，必須以中性清潔劑洗凈，再浸于含有3％HCl 之乙醇12～ 24 小時，然后再儲存于純酒精。要用時，以清潔紗布擦凈或火焰烘干。用完后可浸于水中，移去封埋物，再經清潔劑及重酪酸－硫酸混合物＊處理。
  ＊重酪酸一硫酸混合物之配法：
  1.粗制重酪酸鉀300 gm
  2.20％ 硫酸水溶液3000 ml
  3.使用琺瑯質或陶質容器，先放入20％ 硫酸水溶液，然后緩緩加入粗制重酪酸鉀，以玻璃棒攪拌，此時會發熱，待冷卻后使用。目前已有處理好的玻片出售，使用上非常方便。

  (二) 組織切片 (Tissue Sections)
  組織切片愈薄愈好(4μ)，如果切片太厚，則可能自體及非特異熒光增加，目前都用冷凍切片機(Cryostat) 來切，冷凍切片機包括冰凍柜(Refrigerated Cabinet)，溫度在0℃～-30℃ 之間，切片機(Microtome) 放在里面，將組織在-20℃ 冰凍10 分鐘，就可以切，切下之薄片，以玻片捺下后在室溫急速干燥。制備好之切片必須盡可能馬上固定及染色。如果切片必須儲放短時間( 約1 周)，則固定后密封儲放于-70℃，要染色時，切片必需回溫到室溫方啟開。

  (三) 細胞培養法 (Cell Culture Preparation)
  細胞培養法一般用蓋玻片在組織培養盤( 例如24 孔)或培養在玻璃片(Chamber Slide) 上，再和普通接種病毒一樣，接種可疑病材乳劑，培養數天，取出，干燥、固定、水洗，再用標示抗體染色以檢查特異熒光。

  (四) 涂抹法或捺壓法(Smear and Impression Preparation)
  所用玻片需很薄，一般用蓋玻片代用，將所要檢查之病材，如血液、組織液或其他病材，在玻片上涂抹或捺壓，涂抹或捺壓片在室溫用吹風機或電風扇( 以冷風吹干)，以甲醇或丙酮固定，放于密封標本箱于-20℃ 備染或馬上染色。

  (五) 固定 (Fixation)
  除了使組織固定于玻片外，另一方面亦可助抗原－抗體復合物之形成，例如把脂質溶解，使抗體抗原較易反應。一般用100％ Methanol 在室溫作用2 分鐘，或丙酮于-20℃ 下10 分鐘來固定微生物抗原及病毒。

  注意事項
  一般染色標本，應立即觀察，因當時熒光Z顯著；若不能馬上觀察，須儲存于干燥盒(Polyethylene Bag) 內，有時在0～5℃ 儲存，可保存一個月左右，仍可呈現特異熒光。

  
  

  （來源：廣州市明美光電技術有限公司）