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轉(zhuǎn)染 后用熒光顯微鏡觀察細胞是否有熒光出現(xiàn) 在

妒寫?zhàn)坱dd913 2018-01-11 21:50:05 970  瀏覽
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  • 鵲下乒北佳F 2018-01-12 00:00:00
    我Z近常做這個實驗,GFP也在N端,與目的蛋白融合表達,我對COS-1轉(zhuǎn)染該融合片段的感想總結(jié)如下: 1)轉(zhuǎn)染細胞狀態(tài)一定要好,這是成敗的關(guān)鍵。我選擇的是早晨消化COS,分瓶密度高,下午即在60%滿時,就轉(zhuǎn)染1-2ugDNA,6hr換液用低血清(1%FBS)DMEM維持 2)GFP-目的蛋白由于CMV啟動子問題,表達效率太高,對細胞的正常狀態(tài)不利,尤其是細胞狀態(tài)不好的細胞。所以常有細胞漂浮起來、凋亡的現(xiàn)象,看熒光時,可以將細胞上清洗滌后觀察。 3)根據(jù)不同蛋白的性質(zhì)決定的,有的蛋白具有NES、NLS或跨膜區(qū)、信號肽等功能性序列,可能將GFP帶到胞外 4)細胞的性質(zhì)決定GFP位置:如COS細胞,常形成液泡,占據(jù)大量胞漿,GFP有時會沿著這種胞液分布,要選擇高倍鏡觀察 5)觀察要仔細,選擇可見光和高倍數(shù)熒光看 祝您成功!

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熱門問答

轉(zhuǎn)染 后用熒光顯微鏡觀察細胞是否有熒光出現(xiàn) 在
 
2018-01-11 21:50:05 970 1
明美倒置熒光顯微鏡應(yīng)用于GFP轉(zhuǎn)染細胞觀察

近日,有一家生物制藥公司找明美,需要一套熒光顯微鏡+顯微鏡相機,主要是用來觀察GFP轉(zhuǎn)染細胞,通過觀察轉(zhuǎn)染情況并計算轉(zhuǎn)染效率。

綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein,簡稱GFP),GFP的熒光性質(zhì)比較特殊,GFP熒光反應(yīng)不需要外加底物和輔助因子,只需紫外光或藍光激發(fā),即可發(fā)出綠色熒光,用熒光顯微鏡甚至肉眼就可以觀察到。

根據(jù)客戶樣品的特殊性,明美工程師推薦了一款倒置熒光顯微鏡MF52-N,MF52-N是明美19年下半年推出的產(chǎn)品,是應(yīng)用于細胞組織,透明液態(tài)組織的顯微觀察,也可用于生物制藥,醫(yī)學(xué)檢測、疾病預(yù)防等領(lǐng)域內(nèi)的熒光顯微觀察。

如果您對明美倒置熒光顯微鏡MF52-N感興趣,歡迎咨詢!



(來源:http://www.mshot.com/kehuanli/20200107.html廣州市明美光電技術(shù)有限公司)

2020-01-09 10:37:37 470 0
倒置熒光顯微鏡應(yīng)用于活細胞生長狀況以及蛋白質(zhì)熒光轉(zhuǎn)染效率觀察

活細胞通常用倒置熒光顯微鏡看起來方便,細胞在下面,離物鏡近,還可以用油鏡,成像質(zhì)量要比正置好,分辨率高。老師需要對活細胞的生長狀況以及熒光需要觀察清楚,同時使用上希望比較方便。

解決方案:

明美工程師給客戶推薦高性價比的倒置熒光顯微鏡MF52-N,可更方便的通過多種方法觀察樣品,同時操作簡單、方便,減少工作中的疲勞,也無需擔(dān)心調(diào)焦過度而損壞物鏡,另外根據(jù)客戶要求搭配進口帶通濾色片,熒光效果好。同時推薦了高像素相機MSX2,這款顯微鏡相機像素達到了1250萬,能夠使顯微成像效果更加清晰,細節(jié)展示更加豐富,滿足客戶的要求。




(來源:http://www.mshot.com/kehuanli/20200410.html)


2020-04-25 17:07:03 709 0
為什么康寧24孔細胞培養(yǎng)板觀察黃色熒光蛋白在熒光顯微鏡下會發(fā)熒光
 
2017-06-04 09:27:47 507 1
關(guān)于HeLa細胞在熒光顯微鏡下的觀察
沒開熒光的時候這些圓圓的東西是什么?... 沒開熒光的時候這些圓圓的東西是什么? 展開
2015-04-27 06:19:51 382 5
倒置熒光顯微鏡應(yīng)用于山東農(nóng)大食品學(xué)院熒光活細胞觀察

明美倒置熒光顯微鏡助力山東農(nóng)大食品學(xué)院熒光活細胞觀察

細胞培養(yǎng)已經(jīng)在越來越多領(lǐng)域的研究中成為基礎(chǔ)技術(shù),而為了進行進一步的研究,往往需要使用熒光標(biāo)記技術(shù),如近期,山東農(nóng)大食品學(xué)院需要一套倒置熒光顯微鏡供研究生研究使用,用于熒光活細胞觀察。

活細胞成像有較多注意事項,如將活細胞暴露于光線下會導(dǎo)致光毒性和樣本生理機能變化,因此獲得的結(jié)果可能與健康生物體的實際情況不符。 如果需要觀察熒光轉(zhuǎn)染細胞,寬場熒光顯微鏡通常是活細胞成像的好選擇。明美倒置熒光顯微鏡MF53-N選用觸屏控制LED冷光源,UV紫外波段單獨控制,光毒性更低。

倒置熒光顯微鏡MF53-N可擴展性強,標(biāo)配轉(zhuǎn)盤式六孔熒光模塊,可自主選擇需要的熒光波段,還能擴展三軸高精度電動平臺和TIRF全內(nèi)反射觀察,實現(xiàn)更高的Z軸分辨率和更清晰銳利的熒光成像。

您若對倒置熒光顯微鏡MF53-N感興趣或存在疑問,歡迎與我們聯(lián)系

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來源:https://www.mshot.com/article/1777.html

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2016-12-26 23:43:37 506 1
明美倒置熒光顯微鏡應(yīng)用于活細胞觀察

       近期,有客戶找到明美,需要倒置熒光顯微鏡+顯微鏡相機來看活細胞,應(yīng)用于生殖領(lǐng)域。

       活細胞是能進行新陳代謝、繁殖、復(fù)制的細胞。例如:篩管細胞,酵母菌,花粉,精子,血小板等。活細胞也稱作活化細胞。

       由于客戶要求較特殊,明美工程師提供個性化解決方案,推薦明美倒置熒光顯微鏡MF53(選配20X/40X相差物鏡),另外搭配明美科研級顯微鏡相機MS23,Z終呈現(xiàn)的效果客戶很滿意。

       如果您對明美顯微鏡相機感興趣,歡迎來電咨詢!

(來源:http://www.mshot.com/kehuanli/20200117.html廣州市明美光電技術(shù)有限公司)


2020-01-20 15:22:51 376 0
熒光顯微鏡下正常細胞怎么會有微弱熒光
 
2016-12-10 09:24:11 467 1
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2015-01-22 10:35:04 537 2
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2018-07-03 09:35:45 534 1
熒光顯微鏡的如何進行燈泡的調(diào)中和熒光觀察

     熒光顯微鏡是由生物顯微鏡和落射熒光裝置組成,有消雜散光系統(tǒng),可以將強烈的雜光導(dǎo)入至物鏡光路之外,并加以吸收,提高了顯微鏡的圖像信噪比。

     下面是熒光顯微鏡的燈泡的調(diào)中和熒光觀察的方法:

     一、燈泡調(diào)中的方法:

    (1)任選一塊標(biāo)本放在載物臺上;

    (2)轉(zhuǎn)動鏡臂上的聚光鏡旋鈕使聚光鏡移出光路,轉(zhuǎn)動濾色片組轉(zhuǎn)換手輪,將紫光(V)或藍光(B)或綠光(G)激發(fā)濾色片組轉(zhuǎn)入光路,并將10X熒光物鏡轉(zhuǎn)入光路;

    (3)調(diào)節(jié)粗微調(diào)手輪,將標(biāo)本像調(diào)焦清晰;

    (4)前后推動垂直照明器右邊的聚光鏡調(diào)焦推桿,使視場光欄成像清晰,轉(zhuǎn)動視場光欄撥桿將視場光欄收小,調(diào)節(jié)視場光欄調(diào)中螺釘使視場光欄居中,然后再將視場光欄開至較大;

    (5)轉(zhuǎn)動鏡臂上的聚光鏡旋鈕使聚光鏡移入光路,前后調(diào)節(jié)燈箱上的聚光鏡撥桿,使汞燈的弧光在視場內(nèi)成像清晰;

    (6)調(diào)整燈箱上的燈泡水平調(diào)節(jié)螺釘和垂直調(diào)節(jié)螺釘,使汞燈的弧光居中;

    (7)調(diào)整反光鏡水平調(diào)節(jié)螺釘和垂直調(diào)節(jié)螺釘,使光源的反射像與汞燈的弧光分開;

    (8)轉(zhuǎn)動聚光鏡旋鈕把聚光鏡移出光路,此時視場照明均勻。

    二、如何進行熒光觀察:

    (1)將熒光染色標(biāo)本放到載物臺上。

    (2)將10X平場物鏡或40X熒光物鏡轉(zhuǎn)入光路,調(diào)節(jié)載物臺縱橫移動手輪,將標(biāo)本移入光路。

    (3)轉(zhuǎn)動濾光片轉(zhuǎn)換撥輪,將熒光染色標(biāo)本所需要的激發(fā)濾光片組轉(zhuǎn)入光路。激發(fā)濾光片組編號刻在濾片組轉(zhuǎn)換撥輪上。濾光片選擇正確與否,是熒光顯微鏡能否得到正確應(yīng)用的關(guān)鍵。選用濾光片時,必須遵守斯托克斯定律:激發(fā)濾光片的透射波長<雙色束分離器的透射波長<阻斷濾光片的透射波長。由于激發(fā)濾光片、雙色束分離器和阻斷濾光片,出廠時已按其用途和本身的光學(xué)特性進行了嚴(yán)格的組合匹配,在觀察和攝影時,只需選擇濾光片組即可。

    (4)調(diào)節(jié)粗調(diào)手輪,當(dāng)看清熒光圖像輪廓后,再用微調(diào)手輪調(diào)焦,直至看到清晰的熒光圖像。

    (5)當(dāng)需要得到較強的熒光圖像時,可轉(zhuǎn)動聚光鏡旋鈕把聚光鏡移入光路,可獲得較明亮的熒光圖像。

    (6)當(dāng)需要使用40X或100X熒光物鏡觀察時,應(yīng)在標(biāo)本和物鏡間加上甘油,油中不能有影響觀察的小泡或雜質(zhì)。使用時可使甘油慢慢浸潤一會兒,然后輕輕左右來回轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器以排除氣泡。

    熒光顯微鏡對于物質(zhì)的檢出能力是非常高的,具有放大的作用;而且對于被檢測物質(zhì)的細胞的刺激也是非常小的,可以檢測活體的染色體;還有就是可以進行多個步驟的染色。對于熒光素的構(gòu)造觀察是非常好的,一般的顯微鏡是看不出來的。而且對于一些物質(zhì)是否有熒光,熒光是什么色調(diào)的進行判斷,還能看出是不是抗體的熒光。此款顯微鏡對于物體的定性、定量分析都是可以測定的。


2021-09-03 17:25:48 448 0
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