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  superhuman響 2013-11-25 00:00:00

  不表達的因素多了： 細胞毒性，N端信號肽，稀有密碼子，等等。 你換GST或者Trx融合試過了么？hongkaichen(站內聯系TA)這是老師的一個作業，思考題，跟實驗無關，因為mRNA不穩定也可能造成蛋白不表達，所以如果是這種原因，就是讓我們用什么方法驗證是不是這種原因。開始我覺得可以用觀察多聚核糖體現象來驗證，但這種方法不能排CJ自身的蛋白表達也能產生這種現象。如果用RT-PCR P出來了不知道能不能說有mRNA存在，然后排除掉這種原因？lifefamily(站內聯系TA)真的，我還diyi次聽說跟mRNA不穩定有關，孤陋寡聞了…… 三、mRNA穩定性與翻譯控制 mRNA穩定性主要取決于3’—UTR結構 1．poly(A)尾增加mRNA穩定性， 2．3’-UTR中UA序列導致mRNA不穩定． 高手幫我掃盲一下！？hongkaichen(站內聯系TA)在大腸桿菌中表達可能就沒有polyA修飾，mRNA不穩定我覺得可能就是半衰期短，不能及時翻譯。lifefamily(站內聯系TA)關鍵是，大腸桿菌是如此成熟的一個表達系統，為何就你這個蛋白的mRNA沒有polyA修飾呢？hongkaichen(站內聯系TA)Originally posted by lifefamily at 2009-5-13 15:38: 關鍵是，大腸桿菌是如此成熟的一個表達系統，為何就你這個蛋白的mRNA沒有polyA修飾呢？ 這個我不知道怎么回答你，在大腸桿菌里確實有一小段polyA，如果PolyA酶突變了，或其他與ployA形成有關的蛋白突變了導致PolyA不能形成，這樣導致mRNA不穩定也可能。其實我想問的ZD是假如是mRNA不穩定的話，有什么方法可以檢測？如果你要說不可能是mRNA不穩定照成的，那么你就設計一個實驗來排除這種可能，理論還是需要實驗來驗證的。:)lifefamily(站內聯系TA)RT-PCR加Northern blot 其他想不到了。

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