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  xinxin0106搜狐 2015-12-26 00:00:00

  乳腺癌是嚴重危害婦女健康的一種常見惡性腫瘤，如何有效FZ乳腺癌，特別是通過膳食途徑FZ乳腺癌，目前已成為國內外營養學界一熱門話題。大量流行病學調 查和實驗研究證實，膳食中的多不飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid，PUFA)與乳腺癌的關系極為密切，且不同種類的PUFA對乳腺癌的發生、發展具有不同甚至完全相反的作用。自然界中天然存在的PUFA可分為 兩大類，即n-3 PUFA和n-6 PUFA。研究發現，n-6 PUFA可以促進乳腺癌的發SF展，具有顯著促癌效應，而n-3 PUFA則能夠YZ乳腺癌的發生，具有顯著效應，關于兩者作用差異性的機制至今尚不清楚。近來有研究表明，膳食中的n-6/n-3 PUFA比例，而非這些脂肪酸的單一濃度，對乳腺癌的發SF展具有更為重要的意義，但目前也不清楚膳食中何種比例的n-6/n-3 PUFA攝入才能更好地預防和YZ乳腺癌的發生與發展。另有研究發現，大劑量n-3 PUFA的攝入會損害人體的免疫系統功能，且單純n-3 PUFA對FZ乳腺癌的效果也不理想。因此，深入研究膳食脂肪酸，特別是不同n-6/n-3 PUFA構成與乳腺癌發SF展的關系及其分子機制，探討何種比例的n-6/n-3 PUFA攝入才能更有效地預防和YZ乳腺癌的發生、發展具有重要意義，同時這對從膳食途徑FZ乳腺癌也具有一定的現實意義。 PUFA是構成生物膜脂質結構極為重要的組成成分，對于生物膜結構與功能的維護和穩定至關重要。研究顯示，n-6及n-3 PUFA對細胞膜脂均具有極高的親和性，能夠直接滲透嵌入細胞膜，參與并改變膜脂的構成，而膜脂組成的改變勢必會對生物膜的物理特性和功能特性產生影響， 進而影響到細胞的種種生命活動。因此，我們推測，不同比例的n-6/n-3 PUFA作用于乳腺癌細胞，能夠對乳腺癌細胞膜脂組成、膜流動性以及關鍵跨膜信號蛋白的活性和表達等產生差異性影響，進而影響到乳腺癌細胞的增殖、凋亡和 遷移等，Z終表現出促癌或的不同生物學效應。 基于以上分析，并結合我國現階段居民日常膳食特點，本課題以不同構成比的n-6/n-3 PUFA，即單純n-6 PUFA、單純n-3 PUFA、1:1 n-6/n-3 PUFA、5:1 n-6/n-3 PUFA、10:1 n-6/n-3 PUFA分別作用于雌激素受體陽性(positive estrogen receptor ，ER+)的MCF-7人乳腺癌細胞系和ER陰性(ER-)的MDA-MB-231人乳腺癌細胞系，采用MTT增殖檢測、DAPI染色、TUNEL、 RT-PCR、Western blotting、氣相色譜(GC)、熒光漂白恢復(fluorescence recovery after photobleaching，FRAP)與激光共聚焦掃描顯微鏡等實驗技術，觀察和比較不同n-6/n-3 PUFA構成對兩種乳腺癌細胞增殖和凋亡的影響，并從乳腺癌細胞膜磷脂脂肪酸組成、膜流動性和膜信號蛋白胰島素樣生長因子受體-1(insulin- like growth factor -1 receptor，IGF-1R)表達等方面，系統探討不同n-6/n-3 PUFA構成對人乳腺癌細胞生物學效應及可能的作用機制。 本研究主要實驗及結果如下 1.細胞生長曲線與MTT檢測結果顯示，單純n-6 PUFA、5∶1 n-6/n-3 PUFA和10∶1 n-6/n-3 PUFA組MCF-7細胞增殖速度明顯高于對照組，其中以n-6 PUFA組細胞增殖速度Z快，10∶1 n-6/n-3 PUFA組次之，表明5∶1以上n-6/n-3 PUFA均能顯著促進MCF-7細胞增殖，且此效應隨n-6/n-3的比例而增強;與此相反，單純n-3 PUFA和1∶1 n-6/n-3 PUFA處理細胞24 h可見MCF-7細胞大量死亡，活細胞量明顯少于處理前和對照組，處理48 h后活細胞數有所增加，但增殖較緩，表明單純n-3 PUFA和1∶1 n-6/n-3 PUFA均能顯著YZMCF-7細胞的增殖，且兩者間YZ效應無顯著差異。MDA-MB-231細胞狀況與MCF-7細胞基本相似，提示至少高于5∶1比 例的n-6/n-3 PUFA才能顯著促進MDA-MB-231細胞增殖;此外1∶1 n-6/n-3 PUFA組細胞增殖速度略高于單純n-3 PUFA組，表明單純n-3 PUFA和1∶1 n-6/n-3 PUFA雖能顯著YZMDA-MB-231細胞的增殖，但前者YZ效應明顯強于后者。 2.細胞形態觀察可見，正常MCF-7細胞呈典型鵝卵石狀，而MDA-MB-231細胞呈梭形，貼壁生長，聚集成甸;單純n-6 PUFA、5∶1 n-6/n-3 PUFA和10∶1 n-6/n-3 PUFA組細胞形態與對照組比較均無明顯變化;單純n-3 PUFA組和1∶1 n-6/n-3 PUFA組細胞形態發生顯著變化，細胞生長紊亂、形態異常，大量細胞皺縮變圓，胞質凝縮，并與其周邊細胞分離，細胞貼壁性下降，表現出凋亡細胞的形態特 征。 3. DAPI染色及TUNEL凋亡檢測結果表明，與對照組比，單純n-3 PUFA和1∶1 n-6/n-3 PUFA處理MCF-7和MDA-MB-231細胞24 h后，細胞凋亡率均顯著升高(P0.05)，且兩者間無統計學差異;而單純n-6 PUFA組、5∶1 n-6/n-3 PUFA組和10∶1 n-6/n-3 PUFA組細胞無凋亡現象發生，表明n-3 PUFA和1∶1 n-6/n-3 PUFA能顯著誘導乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231細胞凋亡。 4.氣相色譜分析表明，n-6/n-3 PUFA不同構成比對兩種乳腺癌細胞膜的四種主要磷脂PE、PC、PS和PI的脂肪酸組成的影響基本一致，單純n-3 PUFA和1:1 n-6/n-3PUFA處理組可以顯著增加兩種細胞膜四種磷脂的C20:5百分比含量，降低了各磷脂的n-6/n-3比例;單純n-6 PUFA和10:1 n-6/n-3 PUFA處理組可以顯著增加兩種細胞四種磷脂的C18:2和C20:4的百分比含量，進而升高了各磷脂的n-6/n-3的比例，且四種磷脂中PE和PC的 改變Z為明顯;在n-3 PUFA和1:1 n-6/n-3 PUFA處理組，還可以觀察到PE和PC膜磷脂中的C22:6含量顯著增加，提示了EPA向DHA的轉化。以上表明不同n-6/n-3 PUFA構成能顯著改變MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌細胞膜磷脂脂肪酸的百分比組成。 5.以熒光探針NBD-C6標記細胞膜磷脂，利用熒光漂白恢復(FRAP)技術和激光共聚焦掃描顯微鏡檢測膜流動性變化的結果表明，單純n-6 PUFA、單純n-3 PUFA和1∶1 n-6/n-3 PUFA處理MCF-7細胞和MDA-MB-231細胞2 h，細胞膜流動性均顯著升高(P0.05)，表現為擴散系數顯著升高;處理12 h，兩種細胞膜流動性均較2 h時降低，單純n-6組膜流動性仍顯著高于對照組(P0.05)，而單純n-3 PUFA和1∶1 n-6/n-3 PUFA組膜流動性則顯著低于對照組(P0.05);表明n-3 PUFA和1∶1 n-6/n-3 PUFA能使乳腺癌細胞膜流動性產生波動，先使其升高，后又降低。 6. RT-PCR和Western blotting的檢測結果表明，不同n-6/n-3 PUFA構成比對MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌細胞IGF-1R mRNA及蛋白的表達具有不同的影響，單純n-6 PUFA、5:1 n-6/n-3 PUFA和10∶1 n-6/n-3 PUFA均能夠顯著上調兩種乳腺癌細胞IGF-1R mRNA及蛋白水平的表達，與之相反的是，單純n-3 PUFA和1∶1 n-6/n-3 PUFA顯著下調細胞IGF-1R mRNA和蛋白的表達。 綜上所述，本研究表明，不同n-6/n-3 PUFA構成對乳腺癌細胞的影響是不同的。n-6/n-3 PUFA構成比高于5:1時具有顯著促進乳腺癌細胞增殖的效應，而n-6/n-3 PUFA構成比低于1:1時則具有抗乳腺癌細胞增殖、而誘導其凋亡的作用。這可能與兩種多不飽和脂肪酸對乳腺癌細胞膜脂質構成的差異性改變，進而影響到膜 流動性等膜生物物理特性和膜功能，以及某些關鍵信號蛋白的活性和表達等密切相關。

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