全部評(píng)論(2條)
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- kbbdnju30015 2016-09-25 00:00:00
- 可以選用凝膠電泳,根據(jù)帶電性不同進(jìn)行分離純化。
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- Ameiy2011 2016-11-21 00:00:00
- 你可以參照蛋白的分級(jí)制備分離,但不一定是純的蛋白,我看好多資料顯示都采用的osbrone分級(jí)方法,其中分離醇溶蛋白的有機(jī)溶劑略有不同,以下是其中一篇的方法,你可參考以下: 4.1 原料的預(yù)處理 苦養(yǎng)粉加入正己烷,室溫下脫脂12h,其間換正己烷數(shù)次,脫脂后將苦養(yǎng)粉置于通風(fēng)櫥中風(fēng)干48h,然后把脫脂后的苦蕎粉裝入具塞試劑瓶中,置于冰箱4"C保存?zhèn)溆谩?4.2 苦養(yǎng)麥蛋白質(zhì)組分的分級(jí)制備 清蛋白 取100g脫脂苦蕎粉.加入到蒸餾水中(料水比為l:10),室溫下攪拌提取lh,然后4"C,10000r/min離心20min,收集上清液,沉淀重復(fù)提取一次,離心,上清液合并后濃縮,冷凍干燥所得產(chǎn)品即為清蛋白組分. 球蛋白 清蛋白提取后的沉淀加入到Imol/L NaCI中(料水比為1:10),室溫下攪拌提取lh,然后4"C,10000r/min離心20min,收集上清液,沉淀重復(fù)提取一次,離心,上清液合并后于4"C透析(MWCO :8000-10000Da)48h,其間換水?dāng)?shù)次,然后離心獲得沉淀,沉淀冷凍于燥后即為球蛋白組分。 醇溶蛋白 球蛋白提取后的沉淀加入到55%(v/v)正丙醇中(料水比為l:10),室溫下攪拌提取lh,然后4"0,10000rlmin離心20min,收集上清液,沉淀重復(fù)提取一次,離心,上清液合并后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮,然后冷凍干燥,所得產(chǎn)品即為醇溶蛋白。 谷蛋白 醇溶蛋白提取后的沉淀加入到0.05mol/LNaOH中(料水比為1:10),室溫下攪拌提取lh,于4"C,10000r/min離心20min,收集上清液,沉淀重復(fù)提取一次,離心,上清液合并后加入三至Z終濃度lOOg/L,然后4℃,10000r/min離心10min,沉淀用冷丙酮洗滌兩次,室溫下風(fēng)干,所得產(chǎn)品即為谷蛋白。 蛋白質(zhì)含量的測(cè)定采用微量Kieldahl定氮法,定氮系數(shù)為6.25。
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