sds-page電泳技術分離蛋白質是根據蛋白質什么性質不同

無畏曦 2017-12-16 09:31:59 950 瀏覽

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巨蟹king87 2017-12-16 20:13:55

你的膠是考染的嗎? 首先你得先知道一點蛋白質的基本理論知識(不會不知道吧?難道你是學醫的?)，或者說蛋白質(包括其他分子，如DNA、RNA等)電泳的原理(或者說是分離原理)。只說蛋白質:蛋白質在正常情況下，一般帶有負電荷，因由不同的蛋白分子因為性質(空間結構以及基團性質)不同而帶電量不同，這樣結合蛋白質分子本身的不同質量，會在電場下(即電泳中)產生不同的移動速度，進而將不同的蛋白分離開。又為了消除蛋白質分子間性質的差別，創造一個單一因素的電泳分離條件，所以在進行蛋白質電泳之前，都會對蛋白質進行變性處理(非變性膠等不在此列)，使蛋白質肽鏈打開:SDS是陰離子去污劑，作為變性劑和助溶試劑，它能斷裂分子內和分子間的氫鍵，使分子去折疊，破壞蛋白分子的二、三級結構。而強還原劑如巰基乙醇，二硫蘇糖醇能使半胱氨酸殘基間的二硫鍵斷裂。在樣品和凝膠中加入還原劑和SDS后，分子被解聚成多肽鏈，解聚后的氨基酸側鏈和SDS結合成蛋白- SDS膠束，所帶的負電荷大大超過了蛋白原有的電荷量，這樣就消除了不同分子間的電荷差異和結構差異。如此，蛋白質(準確的說應該是變形后的蛋白質或者是蛋白- SDS膠束)便會在電場中根據不同的帶電量- 亦即分子量而分成不同的條帶。每一條帶代表著不同分子量大小的蛋白質組合(一組蛋白質)。上面只說的是SDS-PAGE膠蛋白質電泳。當然，在電泳后，需要進行染色，你才能看到蛋白條帶(Marker除外，因為它是帶有耦合染料的蛋白質分子或片段)。

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