重組抗體，也被稱為重組免疫球蛋白，是通過基因工程技術將抗體的基因在合適的宿主細胞中表達并生產出來的一類抗體。與傳統的多克隆抗體和單克隆抗體相比，重組抗體具有更高的特異性和親和力，并且可以針對特定的抗原表位進行設計和優化。

重組抗體的類型包括嵌合抗體、雙特異性抗體、抗體片段和Fc融合蛋白等。下面一起來看一下他們各種的應用：https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/recombinant-antibody-overview

①嵌合抗體

1975年，雜交瘤技術的發現徹底改變了抗體研究和臨床開發。然而，鼠源性抗體的療-效受到人抗鼠抗體（HAMA）效應的限制，鼠源性單抗對人體具有異種蛋白的免疫原性 ,在人體內半衰期較短。1984年，研究人員通過基因工程構建了第一個嵌合抗體，也是公認的第一種重組抗體，以降低鼠源抗體在人體內的免疫原性。其中，約30%-35%的分子來源于小鼠的抗體序列，約65%-70%來源于人的抗體序列。所得嵌合抗體保留了親代小鼠抗體的抗原結合能力。抗體嵌合是開發治-療性人源化抗體的第一步。義翹神州采用CDR移植技術和計算機輔助分子建模，提供高質量的單克隆抗體人源化服務，成功率高，人源化程度>90%。

②抗體片段

每一個完整的免疫球蛋白（IgG）分子包含通過二硫鍵連接的兩條重鏈和兩條輕鏈。抗體片段（如Fab、scFv和VHH）體積小，比其全長抗體具有更好的組織或腫瘤穿透力。因此，它們在免疫治-療方面具有巨大的前景，尤其是在實體瘤方面。此外，它們的半衰期也較短，可用作放射性顯像劑。然而，由于缺乏Fc區，它們不能引起Fc介導的抗體效應功能，如抗體依賴性細胞毒性（ADCC）和補體依賴性細胞毒性（CDC）。

起初采用酶解法對IgG抗體進行片段化。胃蛋白酶作用于鉸鏈區二硫鍵所連接的兩條重鏈的近C端，水解產生被稱為F(ab’)2的二價Fab片段。然后，通過木瓜蛋白酶將該片段裂解為兩個相同的Fab片段。然而，酶解法限制了可制備的抗體片段類型，而且不適合工業化大規模生產和純化。隨著抗體工程技術的進步，這些問題可以通過重組生產抗體片段來解決。抗體基因克隆測序成功后，可通過瞬時轉染在原核表達系統（如大腸桿菌）和哺乳動物系統（HEK293細胞）中表達抗體片段。

憑借豐富的重組生產經驗，義翹神州建立了高通量VHH表達平臺，交付了多個VHH抗體生產項目，總體成功率超過90%。除了常見的VHH形式，我們還可以表達雙特異和多特異VHH。此外，義翹神州還可以表達其他各種高特異性和親和力的抗體片段，如scFv和Fab。

③雙特異性抗體

與常規單克隆抗體不同，雙特異性抗體（bsAb）具有兩個結合位點，可識別同一抗原上兩個不同抗原或表位。由于這一特性，雙特異性抗體備受研究者和制藥業的關注。截止目前，美國食品藥品監督管理局（FDA）已批準了4種雙抗藥物，而且160多種雙抗正在進行臨床試驗，用于治-療癌癥、糖尿病、阿爾茨海默病和其他疾病。

起初，雙特異性抗體通過四源雜交瘤技術制備，但這對下游抗體生產和純化構成了巨大的挑戰。隨著過去20年重組DNA技術的發展，出現了幾種雙特異性抗體形式，以適應所需的靶標-產品特征。為了解決重鏈錯配問題，Genentech首先提出了“knob-into-hole”（KiH）技術，該技術通過對CH3結構域進行改造，在每條重鏈中創建一個“knob”或一個“hole”，以誘導異源二聚化。同樣地，研究人員也采用了common light chain 和CrossMab等其他技術來解決輕鏈錯配問題。表達雙特異性抗體主要在哺乳動物細胞中進行。由于單克隆抗體和雙特異性抗體之間的各種結構相似性，許多已建立的常規單抗純化工藝也可適用于雙特異性抗體。（參見另一篇文章：“雙特異性抗體：抗體治-療中的新星”）

④Fc融合蛋白

Fc融合蛋白（又稱Fc嵌合融合蛋白、Fc-Ig和Fc標簽蛋白）是一種同源二聚體，由免疫球蛋白的Fc段與具有生物學活性的蛋白分子組成。雖然單克隆抗體是治-療性生物制劑開發的重-點，但Fc融合蛋白也是一類成功的生物制藥產品，至少有13種藥物獲得了歐洲藥品管理局（EMA）和美國FDA的批準。除治-療應用外，Fc融合蛋白還是基礎研究中的檢測試劑，包括流式細胞術、免疫組織化學和蛋白結合試驗。事實上，與Fc區的連接可以提高一些結合蛋白的溶解度和穩定性。鑒于其大小和對糖基化的需求（大多數是糖蛋白），Fc融合蛋白主要在哺乳動物表達系統中產生。

目前，抗體工程技術取得了一定的進步，這極大地促進了各種形式重組抗體的開發，用于疾病治-療。FDA已批準了100多種抗體藥物，目前有多種抗體處于臨床后期開發階段。此外，重組抗體還可用于許多研究應用：蛋白免疫印跡（WB）、免疫組織化學（IHC）、免疫熒光（IF）、流式細胞術（FC）和表面等離子體共振（SPR）。

總之，重組抗體是基因工程技術的重要應用之一，其類型多樣，具有廣泛的應用前景。隨著基因工程技術的發展，重組抗體的生產成本和安全性問題也將得到進一步優化，為臨床治-療和科學研究提供更多有效的工具。同時，我們也應該認識到重組抗體的潛在風險和挑戰，加強對其安全性和有效性的評估和監管，以確保其能夠更好地服務于人類的健康事業。

更多重組抗體詳情關注：https://cn.sinobiological.com/news/recombinant-antibodies-formats

腺相關病毒也稱腺伴隨病毒，屬于微小病毒科依賴病毒屬，是目前發現的一類結構最簡單的單鏈DNA缺陷型病毒，需要輔助病毒（通常為腺病毒）參與復制。

重組腺相關病毒載體（rAAV）源于非致病的野生型腺相關病毒，由于其安全性好、宿主細胞范圍廣、免疫源性低，在體內表達外源基因時間長等特點，被視為最有前途的基因轉移載體之一，在世界范圍內的基因ZL和疫苗研究中得到廣泛應用。

目前用于定量的標準生物分析方法需要3天的感染期和1天的分析時間，這成為快速工藝優化的主要障礙。本篇應用采用了強陽離子交換色譜法，建立了一種快速定量分析方法[1]，分析時間可縮短到20 min以內。

1 樣品制備

重組腺相關病毒2型 (rAAV-2) 參考方法[2]制備。

2 分析條件

色譜柱：TSKgel SP-NPR（4.6 mm I.D.×3.5 cm, 2.5 μm）

流動相A：50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 5 mM MgCl, 100 mM NaCl（pH 7.5）

流動相B：50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 5 mM MgCl, 500 mM NaCl（pH 7.5）

流速：1.0 mL/min

柱溫：室溫

檢測器：UV@280 nm

樣品：重組腺相關病毒2型（rAAV-2）

進樣量：10-100 μL（1.0×1011DRP）

3 分析結果

圖1. 純化后rAAV-2載體分離色譜圖

圖2. rAAV-2載體校正曲線

結果與討論

采用無孔強陽離子交換色譜柱TSKgel SP-NPR對重組腺相關病毒2型載體進行定量分析，實驗結果表明，該方法可以在20分鐘內完成一次分析。定量線性范圍較寬 (1.0×10¹⁰-5.0×10¹¹DRP, R²值0.997)，可適用于稀釋和濃縮樣品的分析。收集流出峰紫外光譜與進樣樣品紫外光譜一致，感染率無明顯變化，說明病毒載體分析后仍保留活性。該方法可廣泛用于過程開發、基因ZL用重組腺相關病毒的純化與分析。

TSKgel SP-NPR色譜柱采用了無孔的親水性聚合物填料，表面鍵合有強陽離子交換基團，由于其粒徑較小，可實現快速分離。該色譜柱尤其適合分析腺相關病毒，并且具有ji高的蛋白回收率。

參考文獻：

1. D. Debelak, J. Fisher, S. Iuliano, D. Sesholtz, D. L. Sloane, E. M. Atkinson, J. Chromatogr. B, 740 (2000) 195-202.

2. K. R. Clark, F. Voulgaropoulou, D.M. Fraley, P.R. Johnson, Human Gene Ther. 6 (1995) 1329–1341.