pcr擴增沒有條帶
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請教大家，我用別人肯定能作出來的ISSR體系擴增之后為什么什么條帶都沒有呢，感覺藥品應該沒有問題。將DNA稀釋100倍后用紫外分光光度計測DNA od260/280 1.8左右，符合要求呀，電泳檢測只是輕微拖尾，條帶挺亮的，是不是測得DNA濃度不對呢？還有我用的是純水不... 請教大家，我用別人肯定能作出來的ISSR體系擴增之后為什么什么條帶都沒有呢，感覺藥品應該沒有問題。將DNA稀釋100倍后用紫外分光光度計測DNA od260/280 1.8左右，符合要求呀，電泳檢測只是輕微拖尾，條帶挺亮的，是不是測得DNA濃度不對呢？還有我用的是純水不知道有沒有影響？ 展開
全部評論(3條)
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- yuzmzz 2009-04-28 00:00:00
- 你是不是跑錯膠了？不要用瓊脂糖膠跑，要跑PAGE，然后染色或者顯影，瓊脂糖膠靈敏度低
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- 沙漠之鵠 2009-04-27 00:00:00
- 你是不是引物加多了啊，PCR后run膠有100bp下有團帶嗎？還有一點是，“紫外分光光度計測DNA od260/280 1.8”用儀器有時候會有錯覺的，當有酒精殘余的時候測的也會很好，但是酒精影響PCR。用純水沒什么問題的，DNA濃度也不是個太大的問題，你在看看體系有沒有忘加東西。
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- 敏姐是個好人0 2009-04-30 00:00:00
- SSR用4%PAGE膠檢測，加樣時一定要注意Z后分開加的引物家進去了，而且夠量(0.5ul是很少的，要注意).我用的PCR程序是94度10分鐘，94度35秒.55度35秒，72度45秒，35循環，Z后再10分鐘的72度. 你測到的1.8只是說明DNA比較純，也許模板濃度不夠啊，要達到5ng/ul以上才好用，模板濃度太低也擴不出來的. 你跑膠之后有沒有引物二聚體的帶，如果有，說明模板加的正常，如果沒有，可能是加模板沒加好. 水只要用滅菌的純水就行了，沒什么的，師兄都說PCR是很粗放，很簡單的.加油!!!
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