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如何用流式細胞儀檢測GFP的表達

bqjdr67766 2015-03-06 18:28:38 1569  瀏覽
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參與評論

全部評論(2條)

  • xwj_1026 2015-03-07 00:00:00
    一般流式細胞儀都有FITC通道,GFP可以用該通道來測量.用同一細胞系的轉染了無GFP質粒的細胞做陰性對照,設置閾值.

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    評論

  • wkdrn20110301 2017-04-14 00:00:00
    流式細胞儀原理簡單來講就是將細胞包裹在細細的液流中,將細胞以一個一個的形式通過激光,GFP本身屬于綠色熒光蛋白,受到488左右的激光激發會釋放出熒光,通過檢測側向散射的熒光強度經過信號放大可以得到樣品的熒光情況。 具體的操作根據設備的不同都有不同,建議直接查看儀器的操作手冊,但基本原理都是相同的,需要先將要鑒定的細胞消化、過濾網去除大塊雜質,然后細胞懸液經由上樣管進入流式分析儀或分選儀。diyi次鑒定的話,需要準備陰性及陽性的對照,即不表達GFP的同種細胞,用該細胞設門,再上帶有GFP的細胞,檢測未知樣品時,用FITC或相對應的通道的信號強度,去除陰性的門就是陽性的細胞亞群了。

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