分子即時(shí)檢測(cè)(mPOC, molecular Point-of-Care) 的開(kāi)發(fā)面臨多重挑戰(zhàn)。盡管傳統(tǒng)RT-PCR技術(shù)具備高靈敏度和特異性，但其對(duì)冷鏈儲(chǔ)存和復(fù)雜操作的依賴(lài)使其難以滿(mǎn)足mPOC場(chǎng)景的需求。

本文聚焦于RT-PCR檢測(cè)的第一步——逆轉(zhuǎn)錄 (RT, reverse transcription) 步驟的儲(chǔ)存優(yōu)化。傳統(tǒng)逆轉(zhuǎn)錄酶需冷凍保存以防止活性衰減，而mPOC檢測(cè)站點(diǎn)往往缺乏維護(hù)冷鏈的能力。為此，羅氏工業(yè)原料 (CustomBiotech)通過(guò)創(chuàng)新酶工程和制劑技術(shù)，推出可在室溫穩(wěn)定儲(chǔ)存的突變型M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶 (NxtScript與NxtScript 2G) ，為簡(jiǎn)化mPOC檢測(cè)流程提供關(guān)鍵解決方案。

逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶及主混合物的長(zhǎng)期穩(wěn)定性通常需要依賴(lài)-20℃以下儲(chǔ)存，這對(duì)資源有限的mPOC場(chǎng)景構(gòu)成重大挑戰(zhàn)。在某些情況下，即使是冷藏 (4–8°C) 儲(chǔ)存也可能難以實(shí)現(xiàn)。緩解冷鏈管理難題的一種方法是將材料干燥為室溫穩(wěn)定的固態(tài)形式，通常通過(guò)凍干技術(shù)實(shí)現(xiàn)。凍干技術(shù)可將液態(tài)試劑轉(zhuǎn)化為室溫穩(wěn)定的固態(tài)形式，顯著降低儲(chǔ)存復(fù)雜度。然而，RT-PCR試劑中常見(jiàn)的某些成分在未調(diào)整緩沖液條件的情況下，難以甚至無(wú)法進(jìn)行凍干。其中，甘油是一種常用的儲(chǔ)存緩沖液成分，用于提高酶的穩(wěn)定性，但其存在可能對(duì)凍干過(guò)程產(chǎn)生不利影響，可以通過(guò)以下策略?xún)?yōu)化：

（點(diǎn)擊查看大圖）

盡管凍干技術(shù)具有顯著優(yōu)勢(shì)，但其對(duì)專(zhuān)用設(shè)備和高成本工藝的需求仍存在局限。理想情況下，試劑能夠在液態(tài)形式下實(shí)現(xiàn)室溫穩(wěn)定，然而液體試劑混合物甚至僅酶本身的長(zhǎng)期室溫穩(wěn)定性可能仍需存在技術(shù)瓶頸。通過(guò)依賴(lài)具有短期或中期室溫或冷藏穩(wěn)定性的試劑，或許可以避免繁瑣的凍干過(guò)程。例如，可以在倉(cāng)儲(chǔ)期間將材料保存在冷凍條件下，但在分發(fā)至終端用戶(hù)后，允許在較短的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行冷藏或室溫儲(chǔ)存。NxtScript RT和NxtScript 2G RT可能適用于此類(lèi)流程，適用于更為復(fù)雜場(chǎng)景，并具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)：

（點(diǎn)擊查看大圖）