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【干貨】數(shù)字PCR用于病原微生物檢測那些你不可不知的優(yōu)勢

艾普拜生物科技(蘇州)有限公司 2021-05-28 10:26:51 1281  瀏覽
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    病原體(pathogens)是指可造成人或動植物感染疾病的微生物(包括細(xì)菌、病毒、立克次氏體、真菌)、寄生蟲或其他媒介(微生物重組體包括雜交體或突變體)。(來源:百度百科)

    傳統(tǒng)的病原體檢測金標(biāo)準(zhǔn)方法是“涂片鏡檢法+分離培養(yǎng)法”,但這種方法耗時長,細(xì)菌培養(yǎng)一般需要1-3天,真菌培養(yǎng)一般需要1-3周,對于發(fā)病較快結(jié)核桿菌等則需要1個月,同時還存在鏡檢和分離培養(yǎng)等方法還不易對相關(guān)病原體進(jìn)行分型檢測的問題,特別是臨床上對于急性感染疾病一般無法用這種方法在就診前獲得檢測結(jié)果。

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    隨著技術(shù)的發(fā)展,陸續(xù)出現(xiàn)了分子診斷技術(shù)、免疫學(xué)檢測方法和化學(xué)法檢測等病原體檢測手段,目前使用最多的是分子診斷技術(shù)。第三代PCR技術(shù)-數(shù)字PCR,作為分子診斷領(lǐng)域的佼佼者,在病原體核酸檢測方面彰顯出巨大優(yōu)勢:

    1、擺脫病原微生物檢測對標(biāo)準(zhǔn)品的依賴

    病毒等微生物的載量對于闡釋疾病病程,后續(xù)ZL及LX評估是至關(guān)重要的, qPCR技術(shù)的ZD瓶頸在于需要依賴標(biāo)準(zhǔn)曲線,而且擴(kuò)增效率的差異會直接導(dǎo)致實驗室內(nèi)或者不同實驗室之間的熒光定量PCR檢測結(jié)果的偏差。數(shù)字PCR基于單分子層面的檢測可以擺脫對標(biāo)準(zhǔn)品的依賴,且不受PCRYZ物的影響,尤其是在缺乏標(biāo)準(zhǔn)品的檢測項目中,數(shù)字PCR可用于直接定量病原微生物的拷貝數(shù)。

    2、靈敏度高

    在病原微生物的檢測方面,數(shù)字PCR利用其靈敏度高的特點,對各種樣品中的病原微生物展開廣泛的研究,可以用于早期診斷和用藥的低拷貝病毒的監(jiān)控。如人類免疫缺陷病毒(HIV)抗逆轉(zhuǎn)錄病毒ZL過程中病毒殘留的監(jiān)控;抗甲氧西林金黃色葡萄球菌的感染監(jiān)控。(詳細(xì)內(nèi)容見文末相關(guān)文章鏈接)

    3、大大縮短報告周期

    使用數(shù)字PCR檢測臨床標(biāo)本無需經(jīng)過病原微生物培養(yǎng)過程,大大縮短了報告周期,使快速檢測潛在的病原微生物成為可能,且利于從大量不同的背景核酸中檢出病原微生物,對于感染性疾病的診斷和控制意義重大,有助于及時減少患者服用無效藥物的數(shù)量,及早采用其他備用藥物。

    naica?微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)

    法國Stilla Technologies公司naica?微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng),源于Crystal微滴芯片數(shù)字PCR技術(shù),自動化微滴生成和擴(kuò)增,每個樣本孔可實現(xiàn)6熒光通道的檢測,智能化識別微滴并進(jìn)行質(zhì)控,3小時內(nèi)即可獲得至少6個靶標(biāo)基因的JD拷貝數(shù)濃度,融合傳統(tǒng)微滴式和芯片式優(yōu)勢,被稱為下一代數(shù)字PCR技術(shù)。


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【干貨】數(shù)字PCR用于病原微生物檢測那些你不可不知的優(yōu)勢

圖源:網(wǎng)絡(luò)侵刪

病原體(pathogens)是指可造成人或動植物感染疾病的微生物(包括細(xì)菌、病毒、立克次氏體、真菌)、寄生蟲或其他媒介(微生物重組體包括雜交體或突變體)。(來源:百度百科)

傳統(tǒng)的病原體檢測金標(biāo)準(zhǔn)方法是“涂片鏡檢法+分離培養(yǎng)法”,但這種方法耗時長,細(xì)菌培養(yǎng)一般需要1-3天,真菌培養(yǎng)一般需要1-3周,對于發(fā)病較快結(jié)核桿菌等則需要1個月,同時還存在鏡檢和分離培養(yǎng)等方法還不易對相關(guān)病原體進(jìn)行分型檢測的問題,特別是臨床上對于急性感染疾病一般無法用這種方法在就診前獲得檢測結(jié)果。

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隨著技術(shù)的發(fā)展,陸續(xù)出現(xiàn)了分子診斷技術(shù)、免疫學(xué)檢測方法和化學(xué)法檢測等病原體檢測手段,目前使用最多的是分子診斷技術(shù)。第三代PCR技術(shù)-數(shù)字PCR,作為分子診斷領(lǐng)域的佼佼者,在病原體核酸檢測方面彰顯出巨大優(yōu)勢:

1、擺脫病原微生物檢測對標(biāo)準(zhǔn)品的依賴

病毒等微生物的載量對于闡釋疾病病程,后續(xù)ZL及LX評估是至關(guān)重要的, qPCR技術(shù)的ZD瓶頸在于需要依賴標(biāo)準(zhǔn)曲線,而且擴(kuò)增效率的差異會直接導(dǎo)致實驗室內(nèi)或者不同實驗室之間的熒光定量PCR檢測結(jié)果的偏差。數(shù)字PCR基于單分子層面的檢測可以擺脫對標(biāo)準(zhǔn)品的依賴,且不受PCRYZ物的影響,尤其是在缺乏標(biāo)準(zhǔn)品的檢測項目中,數(shù)字PCR可用于直接定量病原微生物的拷貝數(shù)。

2、靈敏度高

在病原微生物的檢測方面,數(shù)字PCR利用其靈敏度高的特點,對各種樣品中的病原微生物展開廣泛的研究,可以用于早期診斷和用藥的低拷貝病毒的監(jiān)控。如人類免疫缺陷病毒(HIV)抗逆轉(zhuǎn)錄病毒ZL過程中病毒殘留的監(jiān)控;抗甲氧西林金黃色葡萄球菌的感染監(jiān)控。(詳細(xì)內(nèi)容見文末相關(guān)文章鏈接)

3、大大縮短報告周期

使用數(shù)字PCR檢測臨床標(biāo)本無需經(jīng)過病原微生物培養(yǎng)過程,大大縮短了報告周期,使快速檢測潛在的病原微生物成為可能,且利于從大量不同的背景核酸中檢出病原微生物,對于感染性疾病的診斷和控制意義重大,有助于及時減少患者服用無效藥物的數(shù)量,及早采用其他備用藥物。

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2021-05-28 10:26:51 1281 0
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不可不知,vocs在線監(jiān)測儀的重要性

VOCs(VolatileOrganicCompounds)學(xué)名揮發(fā)性有機(jī)物,按照世界衛(wèi)生組織的定義,沸點在50—250℃的化合物,室溫下飽和蒸氣壓超過133.32Pa,在常溫下以蒸氣形式存在于空氣中的一類有機(jī)物為揮發(fā)性有機(jī)物(VOCs)。VOCs 成分復(fù)雜,目前已經(jīng)監(jiān)測出的VOCs 有300 多種,按其化學(xué)結(jié)構(gòu)的不同,可以進(jìn)一步分為烷類、芳烴類、烯類、鹵烴類、酯類、醛類、酮類、醇類和其他化合物等,是大氣、水質(zhì)、土壤和其他沉積物中普遍存在且組成復(fù)雜的一類有機(jī)污染物。其毒性、刺激性、致癌作用對人類健康造成較大影響,可對人造成損害神經(jīng)、肺中毒、血液中毒、腎臟中毒、肝臟及新陳代謝中毒等損害。

因此,研究環(huán)境中揮發(fā)性有機(jī)物的存在、來源、分布規(guī)律、遷移轉(zhuǎn)化及其對人體健康的影響逐漸受到人們的重視,對它的排放監(jiān)控迫在眉睫,而其工業(yè)源為VOCs 排放的主要來源;

CEMS-8000 VOCs 固定污染源揮發(fā)性有機(jī)物連續(xù)監(jiān)測系統(tǒng)由由在線氣相色譜儀、煙氣采樣探頭子系統(tǒng)、預(yù)處理子系統(tǒng)、供氣子系統(tǒng)、數(shù)據(jù)采集及處理子系統(tǒng)、溫壓流子系統(tǒng)組成。

在線樣品前處理裝置可實現(xiàn)管道樣品中粉塵的有效去除,防止煙氣中的粉塵進(jìn)入到分析系統(tǒng)中,對系統(tǒng)器件造成損壞,影響儀器的使用壽命;樣品傳輸管路加熱至恒定溫度,保證樣品的穩(wěn)定傳輸,有效防止樣品在傳輸過程中的損失,提高樣品檢測的準(zhǔn)確度;在線氣相色譜儀采用先進(jìn)的色譜分離檢測技術(shù),檢測量程寬、檢測靈敏度高,可有效監(jiān)測煙氣排放前非甲烷總烴的濃度變化;測量信號送入數(shù)據(jù)采集與處理子系統(tǒng),通過模擬信號傳輸至DCS 系統(tǒng),實現(xiàn)工作現(xiàn)場的無人值守連續(xù)監(jiān)測運(yùn)行。該系統(tǒng)具有現(xiàn)場數(shù)據(jù)實時傳輸功能,可通過DCS 系統(tǒng)監(jiān)控測試結(jié)果變化趨勢。


2020-05-27 15:34:53 186 0
3D數(shù)字PCR為jing準(zhǔn)YL帶來哪些優(yōu)勢
 
2018-11-27 09:28:50 365 0
數(shù)字電接點壓力表的優(yōu)勢?
 
2013-10-17 23:19:35 349 1
實驗室中,那些不可忽視的安全問題

       對于實驗員或者平時有很多機(jī)會接觸實驗室的工作者來說,每天大部分的時間都是在實驗室中度過的,而實驗室內(nèi)一般都比較復(fù)雜,包括很多儀器設(shè)備和化學(xué)試劑。如果不小心謹(jǐn)慎,很容易造成~人身傷害和財產(chǎn)損失。那么從哪幾個方面可以有效預(yù)防和避免事故的發(fā)生呢?

 1.儀器的質(zhì)量問題

      現(xiàn)代人越來越追求高品質(zhì)的生活,對于飲食健康問題也更加關(guān)注和注重,而凱氏定氮儀廣泛用于食品、乳制品、飲料、藥品、土壤等等中蛋白質(zhì)氮的總體含量的測定,是產(chǎn)品質(zhì)量檢測的重要理化分析儀器,凱氏定氮儀使用簡單靈活、操作方便,非常適合實驗室及檢驗機(jī)構(gòu)常規(guī)檢測使用。

其中,蒸餾裝置就是凱氏定氮儀里非常重要的一個部件,蒸餾過程中由于水分的蒸發(fā)必須要補(bǔ)水,如果缺水或者不及時補(bǔ)水而繼續(xù)加熱會造成機(jī)器干燒,嚴(yán)重時會使機(jī)器損壞,甚至引起火災(zāi)。為此,沛歐經(jīng)過自己的專研,擁有了一種自有的《用于定氮儀的蒸餾杯防干燒裝置》技術(shù),讓儀器杜絕干燒,為實驗員撐起一把“保護(hù)傘”。也有人比較擔(dān)心,常常會問“儀器可不可以連續(xù)做樣品”“儀器能連續(xù)工作多少時間”“儀器工作時間長了,對人或者對樣品會不會有影響”,在這里,沛歐想告訴您,湖北省地質(zhì)局第1大隊每天使用沛歐凱氏定氮儀做100多個樣品…用戶對于沛歐定氮儀都是非常認(rèn)可的。

(湖北省地質(zhì)局第1大隊)

2.實驗室內(nèi)應(yīng)該穿工作服

在實驗室內(nèi),有著各種各樣的化學(xué)試劑,穿上工作服可以避免試劑污染自己的衣物,同時也可以保持實驗室的清潔衛(wèi)生。

3.實驗室內(nèi)禁止吸煙、飲食 

在實驗室內(nèi)吸煙,會對他人造成影響,而且容易引起火災(zāi)事故,嚴(yán)重的甚至?xí)?dǎo)致爆炸,對他人和自身安全造成嚴(yán)重的傷害。同樣,實驗室內(nèi)飲食、或者把食物帶入實驗室,有可能食物會被試劑污染,食用也影響自身的健康問題。

4.認(rèn)真洗手

在實驗室內(nèi)工作,會接觸到化學(xué)試劑,手上也可能會沾染上一些,所以在實驗結(jié)束后,離開實驗室時應(yīng)該認(rèn)真洗手。

您給沛歐的是信任,沛歐還您的是價值!



(來源:上海沛歐分析儀器有限公司)

2019-06-24 09:53:10 303 0
小白福利—數(shù)字萬用表上的那些指標(biāo)你都會嗎?

小編作為一名地地道道的文科生,在剛剛進(jìn)入電測儀器這個行業(yè)時,對儀器的各個指標(biāo)都是“兩眼一抹黑”,為了幫助和我剛?cè)腴T一樣“小白”的伙伴,今天安泰測試技術(shù)就簡單給大家科普一下萬用表的主要指標(biāo),這些你都會嗎?

1、萬用表的顯示位數(shù)

計數(shù)顯示:萬用表的顯示位數(shù)范圍。

位數(shù)顯示:傳統(tǒng)叫法,能顯示從0-9中所有數(shù)字的位數(shù)稱整位數(shù),其他統(tǒng)稱半位。

例如Fluke F289,滿量程顯示讀數(shù)為49999,即四位半的萬用表。

2、顯示位數(shù)影響測量結(jié)果的分辨率

例:Fluke F170顯示位數(shù)的優(yōu)勢,35/6位

萬用表測量電網(wǎng)電壓時,普通31/2位數(shù)字萬用表的zui高位是0或1,對于220V或380V電壓測量,只能用三位顯示,分辨率為1V。用35/6位的數(shù)字萬用表來測量電網(wǎng)電壓,zui高位可以顯示0~5,利用四位顯示,分辨率為0.1V。此時的測量分辨力與41/2位的F87V相同。

3、分辨率,位數(shù)及計數(shù)

分辨率是指一臺萬用表能測量結(jié)果的好壞。通過了解萬用表的分辨率就可以知道是否能觀測到被測量信號的微小變化。例如,如果數(shù)字萬用表在4V量程內(nèi)的分辨率為1mV,那么在測量1V的信號時就能觀測到1mV(1/1000 伏)的微小變化。

如果你要測量1/4英寸或1毫米的長度,你不會去買一把以英寸(或厘米)為單位的尺子。當(dāng)你的正常體溫是98.6°F時,使用只有整數(shù)標(biāo)記的體溫計測量是沒用的。你需要的是一支分辨率為0.1°F的體溫計。

位數(shù)和字用于描述萬用表的分辨率。數(shù)字萬用表按其顯示的位數(shù)和字?jǐn)?shù)進(jìn)行分類。一臺 3? 位的萬用表可以顯示三個從0到9的全數(shù)字位,以及一個半位(只能顯示1或空白)。一臺 3? 位萬用表可以達(dá)到1999字的分辨率。一臺 4? 位萬用表可以達(dá)到19999字的分辨率。

用分辨率字來描述一臺數(shù)字萬用表比用位數(shù)更準(zhǔn)確。現(xiàn)今的 3? 位表的分辨率已經(jīng)提高到3200、4000或6000字。

對于某些測量,3200字萬用表具有更好的分辨率。例如,如果要測量200伏或更高電壓,一臺1999字的表就無法測量到0.1伏。而一臺3200字的表在測量高達(dá)320伏電壓時仍可以顯示到0.1伏。當(dāng)被測電壓高于320伏,而又要達(dá)到0.1伏的分辨率時,就要用價格貴一些的20000字的數(shù)字表。

4、儀表精度指標(biāo)描述以及計算方法

“讀數(shù)誤差 + 量程誤差”

讀數(shù)精度:表示為“測量讀數(shù)的百分比”。例如,電壓測量精度為讀數(shù)的±1%,含義為:對于100.0V的電壓測量顯示讀數(shù),其電壓真實值在99.0V至101.0V之間。

數(shù)字式測量儀表的技術(shù)規(guī)格中,除讀數(shù)精度指標(biāo)外,一般還加一個數(shù)字誤差范圍(digits)。該數(shù)字表明了在測量顯示讀數(shù)的zui后一位上可能存在的zui大誤差范圍。例如,精度表述為±(1%+2digits),對于100.0V的測量顯示讀數(shù),其電壓真實值將在98.8V至101.2V之間。

所以,可以總結(jié)出誤差范圍的公式應(yīng)該是:

誤差值

= ±(讀數(shù)誤差×讀數(shù)+量程誤差×該讀數(shù)下的分辨率)

真實值范圍應(yīng)該是:

真實值

= 儀表讀數(shù) ±(讀數(shù)誤差×讀數(shù)+量程誤差×該讀數(shù)下的分辨率)

看完這篇文章,你會看數(shù)字萬用表的指標(biāo)了嗎?如果你在選型過程中還有什么問題,歡迎咨詢安泰測試技術(shù)工程師。


2020-08-25 11:18:25 940 0
不可不知!vocs吸附治理法的優(yōu)缺點各是什么?

吸附法

技術(shù)原理:采用顆粒活性炭/活性炭纖維作為吸附材料,吸附飽和后的吸附材料利用熱源將吸附質(zhì)氣化,解析出的高濃度有機(jī)蒸汽被脫附介質(zhì)帶入冷凝單元,經(jīng)冷凝、分離,回收有機(jī)溶劑。依據(jù)據(jù)脫附介質(zhì)不同,有水蒸汽脫-溶劑回收附技術(shù)和熱氮?dú)饷摳?溶劑回收技術(shù)。

 

優(yōu)點:

適用于低濃度的各種污染物;

活性炭價格不高,能源消耗低,應(yīng)用起來比較經(jīng)濟(jì);

通過脫附冷凝可回收溶劑有機(jī)物;

應(yīng)用方便,只與同空氣相接觸就可以發(fā)揮作用;

活性炭具有良好的耐酸堿和耐熱性,化學(xué)穩(wěn)定性較高。

缺點:

吸附量小,物理吸附存在吸附飽和問題,隨著吸附劑的消耗,吸附能力也變?nèi)酰褂靡欢螘r間后可能會出現(xiàn)吸附量小或失去吸附功能;

吸附時,存在吸附的專一性問題,對混合氣體,可能吸附性會減弱,同時也存在分子直徑與活性炭孔徑不匹配,造成脫附現(xiàn)象;

活性炭吸附只是將有毒害氣體轉(zhuǎn)移,并沒有達(dá)到分解有害氣體的功效,可能會帶來二次污染。不適高濃度廢氣,不適含水或含粒狀物的廢氣。


2020-06-05 15:54:14 11 0
用于微生物檢測鑒定的質(zhì)譜技術(shù)主要有哪些
 
2018-12-05 04:51:42 370 0
國家標(biāo)準(zhǔn)微生物檢測方法 有pcr嗎
 
2017-06-06 10:04:37 369 1
數(shù)字PCR的原理
 
2018-11-18 07:58:07 280 0
半導(dǎo)體行業(yè)試劑篇——那些不可不提的酸

在“監(jiān)控半導(dǎo)體芯片生產(chǎn)中離子污染的神器——ICS 6000離子色譜”一文中我們主要介紹了半導(dǎo)體行業(yè)中關(guān)于芯片生產(chǎn)需要嚴(yán)格關(guān)注空氣與純水的質(zhì)量。然而除了環(huán)境空氣與超純水,還有一部分是需要關(guān)注的就是化學(xué)試劑。

在電子產(chǎn)品的生產(chǎn)過程中需要用到的試劑是電子級試劑,要求電性雜質(zhì)含量極低,才可以控制產(chǎn)品ZZ的質(zhì)量。而有些半導(dǎo)體材料中甚至?xí)藶榧尤胍恍┨囟ǖ某煞?,從而其電?dǎo)性能才具有可控性,因此試劑中雜質(zhì)離子的含量,就變得尤為重要。

那么涉及到半導(dǎo)體的試劑有哪些呢?

他們的作用分別是什么呢?

我們大致可以將其分為三類:酸(如氫氟酸、硝酸、硫酸等)、堿(氫氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化銨等)、溶劑(異丙醇、丙酮等),本篇主要給大家介紹酸。

半導(dǎo)體中常用的酸

國際半導(dǎo)體設(shè)備與材料產(chǎn)業(yè)協(xié)會(SEMI)對這有各種明確的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定(見下表,單位為ppm,以zui高級別算)。

那么對于這些高純度的試劑中的雜質(zhì)離子,我們怎么樣去測試呢?測試過程中會遇到什么樣的問題呢?今天我們首先針對不同種類的酸,且看賽默飛離子色譜為大家提出的一個個的解決方案!

高純試劑——?dú)浞?、磷酸中的雜質(zhì)

利用這兩種酸均為弱酸的特點,因此可采用同一方法——柱切換進(jìn)行分析,相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)分別為:

SEMI C28 氫氟酸中的陰離子、GBT 31369-2015;

SEMI C36 濃磷酸中的陰離子、GBT 28159-2011。

譜睿柱切換系統(tǒng)流路圖

氫氟酸(HF)、磷酸(H3PO4)、乙酸(CH3COOH)均為弱酸,利用排斥柱Donnan原理,弱酸及有機(jī)酸在排斥柱上有保留而無機(jī)陰離子沒有保留的特點,我們采取柱切換的方式可以將以弱酸為基體的主成分切換掉,同時無機(jī)陰離子進(jìn)入到濃縮柱中進(jìn)行富集。再經(jīng)過高容量色譜柱進(jìn)行分離,可以準(zhǔn)確測定氫氟酸與濃磷酸中無機(jī)陰離子含量,避免了高濃度基質(zhì)的干擾,且檢出限可達(dá)10ppb。

氫氟酸中常見陰離子譜圖

濃磷酸的離子排斥色譜圖

(1. 強(qiáng)酸離子;2. 磷酸根)

濃磷酸中常見陰離子譜圖


高純試劑——濃硝酸中陰離子

弱酸的方案我們得到了解決,那么無機(jī)強(qiáng)酸中的陰離子怎么去解決呢?這又面臨著新的挑戰(zhàn),硝酸是無機(jī)強(qiáng)酸,柱切換的方式已然不可用,那么這次挑戰(zhàn)得到解決有賴于我們賽默飛特有的高容量色譜柱,高容量色譜柱可以保證即使在出現(xiàn)高基體的情況下,也不會導(dǎo)致色譜柱飽和且不會影響痕量離子的分離度,稀釋50倍后,濃度差可達(dá)十萬倍,進(jìn)樣分析譜圖如下,檢出限可達(dá)1ppm。

75%硝酸稀釋50倍進(jìn)樣


高純試劑——濃硫酸中雜質(zhì)陰離子

恭喜飛飛又完成了一項挑戰(zhàn),解決了濃硝酸中痕量陰離子的問題,可是挑戰(zhàn)還有哦,濃硫酸的問題又該如何解決呢?濃硫酸是二元強(qiáng)酸,且保留很強(qiáng),那么賽默飛有那么多款色譜柱,總有一款適合你(濃硫酸),選擇合適的高容量色譜柱,使得硫酸根離子既不會飽和色譜柱,也可以與待測離子有較好的分離度,也可以做到直接稀釋進(jìn)樣哦。

硫酸稀釋后測試后譜圖

硫酸稀釋后加標(biāo)譜圖(分別加標(biāo)20、30、50ppb)


高純試劑——鹽酸中雜質(zhì)陰離子

強(qiáng)酸體系中,還有一員大將——濃鹽酸,高容量色譜柱依然是解決該方案的首要因素,可以很好分離高基體中的痕量物質(zhì),濃鹽酸稀釋200倍后可直接進(jìn)樣進(jìn)行分析,譜圖如下:


0.5% HCl及其加標(biāo)譜圖(50ppb)

這么多年以來,賽默飛離子色譜與半導(dǎo)體行業(yè)一起成長,為各大半導(dǎo)體企業(yè)及其供應(yīng)鏈上下游行業(yè)提供穩(wěn)定的技術(shù)支持與可靠的數(shù)據(jù)保證。下面附上可實現(xiàn)上述功能的離子色譜全明星陣容。

Thermo Scientific? Dionex? 

ICS-6000 離子色譜儀

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Aquion? RFIC?離子色譜儀

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填寫表單即刻獲取【賽默飛Dionex離子色譜產(chǎn)品系列】

2020-10-16 17:59:56 1020 0
一文知曉PCR,定量PCR,數(shù)字PCR方法選擇

從1985年至今的30多年時間里,PCR分析經(jīng)歷了三代技術(shù)的發(fā)展。DY代傳統(tǒng)PCR技術(shù),采用瓊脂糖凝膠電泳的方法對PCR產(chǎn)物進(jìn)行定性分析。第二代熒光定量PCR技術(shù),通過在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號的積累實時監(jiān)控PCR進(jìn)程,ZH用Cq值對基因進(jìn)行定量分析。第三代數(shù)字PCR技術(shù),通過將PCR反應(yīng)液進(jìn)行有限稀釋,實現(xiàn)核酸分子的單分子擴(kuò)增,ZZ采取終點法檢測陽性微滴的熒光信號,有熒光信號的微滴判讀為 1;沒有熒光信號的微滴判讀為 0,因此該技術(shù)被稱為數(shù)字PCR。

PCR技術(shù)在不斷地蛻變卻從未淡出我們的視野,如今已經(jīng)滲透到分子生物學(xué)領(lǐng)域的各種研究層面。尤其在今年大流行疾病中,展現(xiàn)了PCR技術(shù)的強(qiáng)大之處。那在科學(xué)研究中,我們該如何選擇傳統(tǒng)PCR 、熒光定量 PCR與數(shù)字 PCR呢?

首先我們要清楚,三代PCR技術(shù)所有的基礎(chǔ)源于PCR反應(yīng)的基本原理和PCR反應(yīng)的3個重要階段,分別是指數(shù)期、線性期和平臺期。

指數(shù)期

指數(shù)期內(nèi),每個循環(huán)PCR產(chǎn)物量大約增加1倍(假定 100%反應(yīng)效率),該階段的擴(kuò)增反應(yīng)具有高度特異性和精確度。

線性期(高變異性)

隨著PCR反應(yīng)體系成分的消耗,其中的一個或者多種成分限制反應(yīng),導(dǎo)致反應(yīng)開始減緩,并且每個循環(huán)的PCR 產(chǎn)物不再加倍。

平臺期

反應(yīng)停止,不再產(chǎn)生更多的產(chǎn)物。因為每個樣品具有不同的反應(yīng)動力學(xué),所以每個反應(yīng)將在不同的時間點進(jìn)入平臺期,平臺期內(nèi)可以看到這些差異。

傳統(tǒng) PCR

傳統(tǒng)PCR通過瓊脂糖凝膠電泳對PCR終產(chǎn)物進(jìn)行分析(圖2),它的局限性就在于只能做定性分析。在圖3中,3個反應(yīng)孔含有相同量的 DNA模板,但到達(dá)平臺期后產(chǎn)生的熒光信號卻不同,說明擴(kuò)增產(chǎn)物的量存在不同(反應(yīng)動力學(xué)變化所致)。這也表明了傳統(tǒng)PCR平臺期測量時結(jié)果存在變異,產(chǎn)出的DNA量不一定能反映最初情況,所以無法進(jìn)行定量。

熒光定量 PCR

同樣在圖3中,發(fā)現(xiàn)在指數(shù)期內(nèi),3個反應(yīng)孔的擴(kuò)增曲線完全重合,說明指數(shù)期內(nèi)進(jìn)行檢測將更加精確,可實現(xiàn)更加準(zhǔn)確的定量。閾值線是擴(kuò)增產(chǎn)物熒光強(qiáng)度超過背景時的一個熒光強(qiáng)度值,樣品達(dá)到此熒光強(qiáng)度值所經(jīng)過的循環(huán)數(shù)稱為Cq值。通過比較未知濃度的樣品與一系列標(biāo)準(zhǔn)品的Cq值,可以精確測定未知反應(yīng)中的模板 DNA數(shù)量。


數(shù)字 PCR

數(shù)字 PCR 是通過將樣本DNA隨機(jī)分布至獨(dú)立的反應(yīng)單元中,每個反應(yīng)單元中包含或者不包含1個或多個拷貝的目標(biāo)分子,所有獨(dú)立的反應(yīng)單元進(jìn)行平行擴(kuò)增后,對每個反應(yīng)單元的陰性或者陽性熒光信號進(jìn)行檢測并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,就可以計算出原始樣本的拷貝數(shù),無需參考標(biāo)準(zhǔn)品或內(nèi)源性對照品,也不需要標(biāo)準(zhǔn)曲線。

傳統(tǒng)PCR 、熒光定量 PCR與數(shù)字 PCR的選擇


深藍(lán)云生物科技為您提供美國Azure Cielo 3/6通道熒光定量PCR系統(tǒng)和

        法國Stilla Naica全自動3色/6色微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)。


Azure  Cielo?實時熒光定量PCR系統(tǒng)

來自于美國Azure Biosystems公司,為您提供Azure Cielo-3通道和Azure Cielo-6通道,可根據(jù)實驗需求靈活配置。這款產(chǎn)品采用了高能LED作為光源系統(tǒng),可保證光源強(qiáng)度高,光源一致性好;高品質(zhì)的帕爾貼溫度模塊作為溫控系統(tǒng),升降溫速率快,可設(shè)置12列跨度30°C的溫度梯度;ZY的CMOS拍照+光纖信號傳輸作為檢測系統(tǒng),CMOS檢測靈敏度高,光纖傳輸速度快,無光損失和干擾。Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統(tǒng)可為您的科學(xué)研究提供高JZ度、高靈敏度和高可靠性的實驗結(jié)果。

Naica?微滴芯片式數(shù)字PCR系統(tǒng)

法國Stilla Technologies Naica數(shù)字PCR平臺是實現(xiàn)高靈敏DNA/RNAJD定量的技術(shù)工具,只需一步移液操作,即可自動生成單層平鋪的微滴,同一反應(yīng)液進(jìn)行多基因的單分子模板擴(kuò)增,通過三色或六色熒光通道檢測,自動QC質(zhì)控,識別多色熒光中有效的陰陽性微滴,從而達(dá)到目的DNA/RNA的高JZjuedui定量。同時提供原始數(shù)據(jù)、單微滴追溯等功能,確保數(shù)據(jù)真實可靠。




參考文獻(xiàn):

1. Sykes PJ, Neoh SH, Brisco MJ, Hughes E, Condon J, Morley AA. Quantitation of targets for PCR by use of limiting dilution. Biotechniques. 1992;13(3):444-449.

2. Vogelstein B , Kinzler K W . Digital PCR[J]. Proceedings of the National Academy of ences of the United States of America, 1999, 96(16):9236-9241.

3. Heyries KA, Tropini C, Vaninsberghe M, et al. Megapixel digital PCR. Nat Methods. 2011;8(8):649-651.

4. Dingle TC, Sedlak RH, Cook L, Jerome KR. Tolerance of droplet-digital PCR vs real-time quantitative PCR to inhibitory substances. Clin Chem. 2013;59(11):1670-1672.

5. Whale AS, Huggett JF, Cowen S, et al. Comparison of microfluidic digital PCR and conventional quantitative PCR for measuring copy number variation. Nucleic Acids Res. 2012;40(11):e82.


2020-08-31 11:14:24 1000 0
干貨丨標(biāo)準(zhǔn)品稱量配制中不可小覷的實驗環(huán)境

       不知道各位老師在配制和使用標(biāo)準(zhǔn)品時,有沒有注意過周遭的實驗環(huán)境呢?有沒有在日常的實驗過程中發(fā)現(xiàn)天平稱量不準(zhǔn)卻苦于找不到原因?


       其實,在實驗室的監(jiān)控項目中,不同實驗室對溫濕度都有要求。每項實驗的進(jìn)行都需要精確可靠的監(jiān)測儀器提供準(zhǔn)確的環(huán)境參數(shù)數(shù)據(jù)。稱量過程中的氣溫、濕度和氣流速度等,都會對稱量結(jié)果產(chǎn)生影響。


實驗室環(huán)境條件標(biāo)準(zhǔn)

       檢測和校準(zhǔn)實驗室能力認(rèn)可準(zhǔn)則CNAS-CL01中明確規(guī)定了實驗室的設(shè)施和環(huán)境條件應(yīng)該適合實驗室活動,并且必須將其形成文件;實驗室需要監(jiān)測、控制和記錄環(huán)境條件等等。這是因為實驗室環(huán)境條件直接影響著各種實驗或檢測結(jié)果。


實驗室環(huán)境條件到底從什么方面影響著標(biāo)準(zhǔn)品的使用呢?

1

濕度對稱量的影響


? 稱量容器或樣品可能帶有靜電。

       玻璃、塑料、粉末或者顆粒物質(zhì)等低導(dǎo)電率材料無法輕易排除這些靜電,而這些靜電往往需要數(shù)分鐘或數(shù)小時才會消散。干燥空氣(相對濕度低于40%)更易產(chǎn)生靜電。靜電力會作用于樣品、容器與環(huán)境之間,因此產(chǎn)生稱量誤差。

       具體體現(xiàn):每次稱量都會有不同的結(jié)果。稱量顯示值不穩(wěn)定。稱量結(jié)果的重復(fù)性差。

       解決方法:增加空氣濕度(相對濕度在 45 % - 60 % 之間);使用去靜電組件。


? 特定標(biāo)準(zhǔn)品容易潮解,環(huán)境濕度過高會引起變質(zhì),影響使用。

       有些標(biāo)準(zhǔn)品容易吸潮,環(huán)境濕度過高會使稱量不準(zhǔn)確,影響后續(xù)數(shù)據(jù)分析。

       揮發(fā)性有機(jī)物標(biāo)準(zhǔn)品在環(huán)境溫度過高時容易揮發(fā),出現(xiàn)實際配制的量過低的情況。

       具體體現(xiàn):天平顯示值按單方向漂移。吸濕/蒸發(fā)。您稱量的是揮發(fā)性物質(zhì)的損耗重量(如:水蒸發(fā))或者是樣品吸濕而增加的重量(吸收大氣水份)。

       解決方法:使用潔凈并且干燥的稱量容器;使用加蓋或加塞的窄頸容器;保持實驗室內(nèi)濕度處于標(biāo)準(zhǔn)區(qū)間。


2

溫度對稱量的影響


溫度對電子天平內(nèi)部機(jī)械的影響。

       電子天平內(nèi)的永磁體、動圈、取樣電阻等溫度敏感材料會隨著環(huán)境溫度變化和線圈發(fā)熱引起溫度漂移,從而影響電子天平的計量性能。

       具體體現(xiàn):外部荷載不發(fā)生改變而電子天平的示值仍然會發(fā)生緩慢的變化。

       解決方法:為了避免此因素對標(biāo)準(zhǔn)品稱量準(zhǔn)確度的影響,因?qū)㈦娮犹炱椒旁诤銣睾銤竦姆Q量室中通電開機(jī)充分預(yù)熱兩個小時后進(jìn)行重復(fù)性核查并通過才能進(jìn)行稱量。


標(biāo)準(zhǔn)品溫度對電子天平內(nèi)部環(huán)境的影響。

       標(biāo)準(zhǔn)品與周圍環(huán)境之間的溫度存在差異,溫度差異會產(chǎn)生沿稱重容器流動的氣流。空氣沿著容器外側(cè)流動會產(chǎn)生一個向上的作用力,這個力會導(dǎo)致稱重結(jié)果產(chǎn)生錯誤。直到形成溫度平衡后才會終止。

       具體體現(xiàn):樣品在動態(tài)浮力作用下,稱得重量會比實際重量輕,并在稱量過程中出現(xiàn)稱量顯示值單方向漂移。

       解決方法:為了避免此因素對標(biāo)準(zhǔn)品稱量準(zhǔn)確度的影響,當(dāng)把標(biāo)準(zhǔn)品從冰箱等貯存環(huán)境中取出以后,要等到標(biāo)準(zhǔn)品溫度與稱量環(huán)境溫度一致時才可以開始稱量。



溫度對電子天平靈敏度的影響。

       溫度對靈敏度的影響程度取決于測量值因環(huán)境溫度變化而產(chǎn)生的可逆性漂移。這由靈敏度的溫度系數(shù) (TC) 測得,與每攝氏度的顯示重量(或者校品重量)偏差百分比一致。

溫度對定容的影響。

       當(dāng)有機(jī)化合物液體的溫度上升或下降時,由于熱脹冷縮的關(guān)系,液體的體積會膨脹或縮小,液體的密度亦隨溫度減小或增大。


3

其他環(huán)境條件對標(biāo)準(zhǔn)品配制的影響


氣流對稱量的影響

       天平的放置位置和操作環(huán)境出現(xiàn)氣流;天平距離空調(diào)排氣口、吊扇、窗戶或散熱器太近;天平位于實驗室設(shè)備中冷卻風(fēng)扇產(chǎn)生的氣流中;樣品與其周圍環(huán)境形成的巨大溫差產(chǎn)生氣流;天平位于未加以保護(hù)的開放區(qū)域。

       具體體現(xiàn):顯示的稱量值不斷漂移,導(dǎo)致難以進(jìn)行回零/去皮操作,穩(wěn)定時間過長,測量準(zhǔn)確性差。

       解決方法:請將您的天平與氣流源保持足夠的距離。為防止秤盤暴露于氣流之中,可使用手動或自動防風(fēng)罩。


振動對稱量的影響

       在天平放置位置的振動會導(dǎo)致天平數(shù)值的偏差,天平的可讀性越好,越易受振動的影響。

       解決方法:請將您的天平放置在專業(yè)實驗臺上;安裝位置與稱量臺必須足夠穩(wěn)定;確保當(dāng)有人倚靠在實驗臺時,天平顯示屏指數(shù)不會改變;不得在天平下放置軟墊,如寫字墊等;天平的理想位置是實驗臺的桌腳處,因為此處振動最小。


熱輻射對稱量的影響

       熱輻射會影響天平的熱平衡引起示值錯誤,最常見的輻射源為太陽和白熾燈。

       解決方法:請將您的天平放置在無窗的墻角附近,直射的陽光會影響稱量結(jié)果;將您的天平放置在遠(yuǎn)離照明裝置的地方,盡量使用熒光燈管;避免多人同時圍繞在天平前。


2021-05-06 13:08:30 537 0
干貨丨你會渦旋混合嗎?

實驗室中的旋渦混合器,在混合少量樣品時起到了非常大的作用。它混合速度快且徹底,液體呈旋渦狀,能將附在管壁上的試液全部混勻,而且由于其無需在樣品中加入攪動部件,避免了交叉污染。廣泛用于樣品前處理、生化及微生物檢測等各類需快速混勻的實驗任務(wù)。

渦旋混合器是利用偏心旋轉(zhuǎn)原理使試管等容器中的液體產(chǎn)生渦流,從而使溶液充分混合。要達(dá)到WM的混勻效果,充分的渦旋很重要。但是,如果試管中樣品裝量過多的話,即使渦旋速度調(diào)到ZD,在液體中也只能形成紊流,而非真正的渦旋,這樣一來,整個混勻效果將大打折扣。通常,會建議將試管中的裝量控制在管子容量(或者高度)的2/3及以下。

下面,我們通過實驗來比較一下不同裝樣量時的渦旋混勻效果。


01 實驗方法

在15 mL離心管中加入不同量的純水,再加入少量高濃度堿性藍(lán)溶液,純水:堿性藍(lán)溶液=14:1。然后進(jìn)行渦旋混合,渦旋轉(zhuǎn)速:2500 rpm,渦旋時間:10秒。


02 實驗結(jié)果比較

2.1 樣品量為離心管容量的1/3、2/3和3/3時的比較

樣品量為離心管容量的1/3、2/3和3/3時,即溶液加入量為5 mL、10 mL和14 mL。從圖1可以看到,在未進(jìn)行渦旋時,堿性藍(lán)溶液是處于上層,所以,我們可以通過觀察堿性藍(lán)溶液的分散情況來判定渦旋混合是否徹底。


圖1 未渦旋的情況


渦旋之后,從圖2中可以看到溶液量為5 mL和10 mL時,其渦旋情況穩(wěn)定,堿性藍(lán)溶液能夠在10秒內(nèi)很好的與純水混合。而溶液量為14 mL的離心管中,并沒有形成穩(wěn)定的渦旋,只有局部的紊流發(fā)生,在10秒之后,堿性藍(lán)溶液并未能與純水混合好,與未渦旋之前的狀態(tài)差不多。


圖2 渦旋時和渦旋后的情況


2.2 樣品量為離心管容量的2/3至3/3之間的比較

為進(jìn)一步比較樣品量為離心管容量的2/3至3/3之間時渦旋情況,直接將2.1中渦旋后的14 mL樣品用塑料滴管慢慢吸取掉一部分溶液,至離心管中溶液量分別為12 mL和11 mL。從圖3和圖4可以看到,在渦旋時并沒有形成穩(wěn)定的渦流,且伴隨有局部的紊流發(fā)生。在渦旋10秒后,在離心管的底部位置能看到無色的部分,即堿性藍(lán)溶液依舊沒有與純水完全混勻。


圖3 12mL裝樣量渦旋時和渦旋后的情況


圖4 11mL裝樣量渦旋時和渦旋后的情況


03 實驗總結(jié)

從上述2.1和2.2的實驗比較來看,樣品量應(yīng)控制在離心管總?cè)萘康?/3及以下時,才能在渦旋時形成穩(wěn)定、WM的渦流,從而能夠更好的混合樣品。

這就是渦旋的正確打開方式,你記住了嗎?

2021-05-31 10:35:50 976 0
焊接機(jī)器人,那些不可忽視的事---徠深科技

    隨著電子技術(shù)、計算機(jī)技術(shù)、數(shù)控及機(jī)器人技術(shù)的發(fā)展,自動焊接機(jī)器人, 從60年代開始用于生產(chǎn)以來,其技術(shù)已日益成熟,焊接技術(shù)進(jìn)步的突出的表現(xiàn)就是焊接過程由機(jī)械化向自動化、信息化和智能化發(fā)展,焊接機(jī)器人突破了焊自動化的傳統(tǒng)方式,使小批量自動化生產(chǎn)成為可能。

焊接機(jī)器人的編程技巧

1.選擇合理的焊接順序,以減小焊接變形、焊槍行走路徑長度來制定焊接順序。

2.焊槍空間過渡要求移動軌跡較短、平滑、安全。

3.優(yōu)化焊接參數(shù),為了獲得Z佳的焊接參數(shù),制作工作試件進(jìn)行焊接試驗和工藝評定。

4.采用合理的變位機(jī)位置、焊槍姿態(tài)、焊槍相對接頭的位置。工件在變位機(jī)上固定之后,若焊縫不是理想的位置與角度,就要求編程時不斷調(diào)整變位機(jī),使得焊接的焊縫按照焊接順序逐次達(dá)到水平位置。同時,要不斷調(diào)整機(jī)器人各軸位置,合理地確定焊槍相對接頭的位置、角度與焊絲伸出長度。工件的位置確定之后,焊槍相對接頭的位置必須通過編程者的雙眼觀察,難度較大。這就要求編程者善于總結(jié)積累經(jīng)驗。

5.及時插入清槍程序,編寫一定長度的焊接程序后,應(yīng)及時插入清槍程序,可以防止焊接飛濺堵塞焊接噴嘴和導(dǎo)電嘴,保證焊槍的清潔,提高噴嘴的壽命,確保可靠引弧、減少焊接飛濺。

6.編制程序一般不能一步到位,要在機(jī)器人焊接過程中不斷檢驗和修改程序,調(diào)整焊接參數(shù)及焊槍姿態(tài)等,才會形成一個好程序。

機(jī)器人系統(tǒng)故障

1.發(fā)生撞槍

可能是由于工件組裝發(fā)生偏差或焊槍的TCP不準(zhǔn)確,可檢查裝配情況或修正焊槍TCP。

2.出現(xiàn)電弧故障,不能引弧

可能是由于焊絲沒有接觸到工件或工藝參數(shù)太小,可手動送絲,調(diào)整焊槍與焊縫的距離,或者適當(dāng)調(diào)節(jié)工藝參數(shù)。

3.保護(hù)氣監(jiān)控報警

冷卻水或保護(hù)氣供給存有故障,檢查冷卻水或保護(hù)氣管路。

焊接機(jī)器人常見缺陷

1.出現(xiàn)焊偏問題

可能為焊接的位置不正確或焊槍尋找時出現(xiàn)問題。這時,要考慮TCP(焊槍ZX點位置)是否準(zhǔn)確,并加以調(diào)整。如果頻繁出現(xiàn)這種情況就要檢查一下機(jī)器人各軸的零位置,重新校零予以修正。

2.出現(xiàn)咬邊問題

可能為焊接參數(shù)選擇不當(dāng)、焊槍角度或焊槍位置不對,可適當(dāng)調(diào)整。

3.出現(xiàn)氣孔問題

可能為氣體保護(hù)差、工件的底漆太厚或者保護(hù)氣不夠干燥,進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整就可以處理。

4.飛濺過多問題

可能為焊接參數(shù)選擇不當(dāng)、氣體組分原因或焊絲外伸長度太長,可適當(dāng)調(diào)整機(jī)器功率的大小來改變焊接參數(shù),調(diào)節(jié)氣體配比儀來調(diào)整混合氣體比例,調(diào)整焊槍與工件的相對位置。

5.焊縫結(jié)尾處冷卻后形成一弧坑問題

可編程時在工作步中添加埋弧坑功能,可以將其填滿。



2019-07-15 16:52:57 368 0

6月突出貢獻(xiàn)榜

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