9热视频_一区免费在线_亚洲国产AV无码专区亚洲AV_免费日本中文字幕_99人人澡_国产精品九色

儀器網(yiqi.com)歡迎您!

| 注冊 登錄
網站首頁-資訊-專題- 微頭條-話題-產品- 品牌庫-搜索-供應商- 展會-招標-采購- 社區-知識-技術-資料庫-方案-產品庫- 視頻

問答社區

Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統檢測單拷貝DN

艾普拜生物科技(蘇州)有限公司 2021-01-05 11:36:45 470  瀏覽

  • 介紹:

    Azure Cielo? 3和Cielo? 6 實時熒光定量PCR系統具有ZY的靈敏度。該系統配置新型的高性能光學系統,采用16組光纖單孔掃描設計,一根光纖用于高能LED激發,另一根用于光信號檢測,可16孔同時采集(圖1)。特殊的激發/發射方式保證單孔掃描時僅激發一個孔,光纖傳導也有效消除光散射,完全避免孔外區域的激發,減少背景噪聲的來源,以便更靈敏的檢測。

    同時Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統采用“全孔檢測”技術,每個孔可采集大約100,000個數據點。檢測時取讀數的平均值,JZ測定每個孔的熒光強度。這種“全孔檢測”為每個采集時間點提供了比單孔掃描系統更準確的數據,因為單孔掃描系統僅僅采集少量的數據點。

    如何可靠地檢測低拷貝數的靶標呢?首先要考慮引物和探針的特異性,這會直接影響qPCR檢測能力的高低,其次考慮靈敏度,即當探針信號高于背景噪聲時儀器檢測的靈敏度。在其他的反應成分相同的情況下,更高靈敏度的儀器可以更早的檢測到信號或得到更小的Cq值。為了證明Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統在低拷貝數的靶標檢測中的靈敏度和重復性,進行了單拷貝靶標DNA的擴增實驗。

    方法:

    配制20μl反應體系,利用單拷貝DNA為模板進行qPCR擴增。

    分別在Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統和競爭產品的系統上運行兩次96孔板。使用每個儀器提供的軟件收集和分析數據,以確定每個孔的Cq值。

    結果與討論:

    單拷貝DNA擴增結果發現,在Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統中檢測到88個孔(92%)有熒光信號,競爭產品中檢測到77個孔(80%)(圖2A),結果表明,Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統提高了單拷貝擴增的檢測概率,這也反映了其檢測靈敏度更高。那么對于單拷貝DNA擴增來說,那些沒有熒光信號的孔可能是靶標DNA沒有進入到孔中,所以沒有檢測到熒光信號。

    同時發現,Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統測量的Cq平均值比競爭產品要早2個循環(Cq 36.39 vs 38.53)(圖2A)。并且Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統的Cq值SD小于競爭產品的值(0.91 vs 1.16),這進一步說明了Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統的檢測具有良好的重復性。

    此外,將兩者的擴增曲線進行比較,發現在競爭產品上某些擴增曲線起峰較晚,擴增曲線起峰位置不一致(圖3B),Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統的擴增曲線起峰位置基本一致(圖3A)。這也說明了Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統高靈敏度的“全孔檢測”技術和多數據點的捕獲方式可以給您帶來真實可靠的擴增結果。

    總的來說,隨著靶標DNA數量的減少,qPCR的可靠性也會逐漸降低,然而現代應用不斷突破這一技術的極限,對qPCR的性能提出了更高的要求。以上結果證明了Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統具有ZY的靈敏度和可靠性,即使檢測單拷貝DNA分子,仍可獲得具有高度重復性的定量數據。

    參考文獻:

    1. Lockey C, Otto E, Long Z. Real-Time Fluorescence Detection of a Single DNA Molecule. BioTechniques. 1998; 24:744–746.

    2. Stowers CC, Haselton FR, Boczko EM. An Analysis of Quantitative PCR Reliability Through Replicates Using the Ct Method. J Biomed Sci Eng. 2010;3(5):459-469.

    3. Stadler J, Eder J, Pratscher B, et al. SNPase-ARMS qPCR: Ultrasensitive Mutation-Based Detection of Cell-Free Tumor DNA in Melanoma Patients. PLoS One. 2015;10(11):e0142273.

    4. Tosiano MA, Jacobs JL, Shutt KA, et al. A Simpler and More Sensitive Single-Copy HIV-1 RNA Assay for Quantification of Persistent HIV-1 Viremia in Individuals on Suppressive Antiretroviral Therapy. J Clin Microbiol. 2019;57(3):e01714-e01718.


參與評論

全部評論(0條)

獲取驗證碼
我已經閱讀并接受《儀器網服務協議》

熱門問答

Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統檢測單拷貝DN


介紹:

Azure Cielo? 3和Cielo? 6 實時熒光定量PCR系統具有ZY的靈敏度。該系統配置新型的高性能光學系統,采用16組光纖單孔掃描設計,一根光纖用于高能LED激發,另一根用于光信號檢測,可16孔同時采集(圖1)。特殊的激發/發射方式保證單孔掃描時僅激發一個孔,光纖傳導也有效消除光散射,完全避免孔外區域的激發,減少背景噪聲的來源,以便更靈敏的檢測。

同時Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統采用“全孔檢測”技術,每個孔可采集大約100,000個數據點。檢測時取讀數的平均值,JZ測定每個孔的熒光強度。這種“全孔檢測”為每個采集時間點提供了比單孔掃描系統更準確的數據,因為單孔掃描系統僅僅采集少量的數據點。

如何可靠地檢測低拷貝數的靶標呢?首先要考慮引物和探針的特異性,這會直接影響qPCR檢測能力的高低,其次考慮靈敏度,即當探針信號高于背景噪聲時儀器檢測的靈敏度。在其他的反應成分相同的情況下,更高靈敏度的儀器可以更早的檢測到信號或得到更小的Cq值。為了證明Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統在低拷貝數的靶標檢測中的靈敏度和重復性,進行了單拷貝靶標DNA的擴增實驗。

方法:

配制20μl反應體系,利用單拷貝DNA為模板進行qPCR擴增。

分別在Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統和競爭產品的系統上運行兩次96孔板。使用每個儀器提供的軟件收集和分析數據,以確定每個孔的Cq值。

結果與討論:

單拷貝DNA擴增結果發現,在Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統中檢測到88個孔(92%)有熒光信號,競爭產品中檢測到77個孔(80%)(圖2A),結果表明,Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統提高了單拷貝擴增的檢測概率,這也反映了其檢測靈敏度更高。那么對于單拷貝DNA擴增來說,那些沒有熒光信號的孔可能是靶標DNA沒有進入到孔中,所以沒有檢測到熒光信號。

同時發現,Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統測量的Cq平均值比競爭產品要早2個循環(Cq 36.39 vs 38.53)(圖2A)。并且Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統的Cq值SD小于競爭產品的值(0.91 vs 1.16),這進一步說明了Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統的檢測具有良好的重復性。

此外,將兩者的擴增曲線進行比較,發現在競爭產品上某些擴增曲線起峰較晚,擴增曲線起峰位置不一致(圖3B),Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統的擴增曲線起峰位置基本一致(圖3A)。這也說明了Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統高靈敏度的“全孔檢測”技術和多數據點的捕獲方式可以給您帶來真實可靠的擴增結果。

總的來說,隨著靶標DNA數量的減少,qPCR的可靠性也會逐漸降低,然而現代應用不斷突破這一技術的極限,對qPCR的性能提出了更高的要求。以上結果證明了Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統具有ZY的靈敏度和可靠性,即使檢測單拷貝DNA分子,仍可獲得具有高度重復性的定量數據。

參考文獻:

1. Lockey C, Otto E, Long Z. Real-Time Fluorescence Detection of a Single DNA Molecule. BioTechniques. 1998; 24:744–746.

2. Stowers CC, Haselton FR, Boczko EM. An Analysis of Quantitative PCR Reliability Through Replicates Using the Ct Method. J Biomed Sci Eng. 2010;3(5):459-469.

3. Stadler J, Eder J, Pratscher B, et al. SNPase-ARMS qPCR: Ultrasensitive Mutation-Based Detection of Cell-Free Tumor DNA in Melanoma Patients. PLoS One. 2015;10(11):e0142273.

4. Tosiano MA, Jacobs JL, Shutt KA, et al. A Simpler and More Sensitive Single-Copy HIV-1 RNA Assay for Quantification of Persistent HIV-1 Viremia in Individuals on Suppressive Antiretroviral Therapy. J Clin Microbiol. 2019;57(3):e01714-e01718.


2021-01-05 11:36:45 470 0
基于Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統檢測低拷貝

我們都知道在實時定量PCR(qPCR)中,可以通過Cq值和標準曲線得出樣本的初始拷貝數。但Cq值與樣品中靶標的拷貝數有關,也會受到PCR反應的效率和儀器檢測靈敏度的影響。高靈敏度的儀器可以減少檢測樣品所需的循環數,節省時間并提高效率;同時也可以減少假陰性的存在。Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統的設計初衷,就是為了高靈敏高性能而生,每個孔配有單獨的激發和發射光纖,可有效提高靈敏度并降低背景噪聲干擾(圖1左)。此外跟同類產品相比,Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統使用全孔檢測技術,每個孔可采集約100,000個數據點,使每個qPCR擴增曲線能夠準確、可重復和靈敏地表示熒光強度,從而提高熒光數據的可靠性(圖1右)。

▲ 圖1. 高性能光路系統

為了進一步表明Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統的靈敏度,與同類產品進行了以下比較實驗:使用酵母的三個RNA靶標進行檢測,分別是高豐度的Actin基因、低豐度的6Y’端?;?,以及單拷貝的TEL06R端?;颉?/p>

材料和方法

從10mL酵母培養液中制備出RNA,將3μg RNA逆轉錄成cDNA作為模板備用。對于Actin,在Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統上使用的cDNA按1:20稀釋;其他的cDNA均按1:10進行稀釋。引物如下:

▲ 表1. Actin、6Y’端粒基因和TEL06R端粒基因的引物對

采用4個4倍系列稀釋的cDNA模板和一個無模板對照來計算qPCR擴增效率,反應體系和擴增程序如下:

結果和討論

在高豐度Actin和低豐度6Y’端?;虻臋z測中,Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統和同類產品的擴增效率非常相似(表2)。然而,在單拷貝TEL06R端?;虻臋z測中,發現同類產品得到的Cq值偏大,位于35-38之間,導致計算出的擴增效率大于200%,不能作為參考數據;Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統則計算得出E=96%(表2)。

▲ 表2. 各基因的擴增效率及R2值

同時結果表明,盡管Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統的Actin cDNA上樣量僅為同類產品的一半,但Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統的Cq值小于同類產品的Cq值,兩者相差0.65(表3)。針對低豐度的6Y’端?;蚝蛦慰截惖腡EL06R端?;?,兩者的Cq值差異較大,差值分別是2.25和4.02(表3)。這些結果表明,隨著基因起始拷貝數的減少,Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統靈敏度的提高變得尤為重要。

▲ 表3. 各基因的數據對比

靈敏度也會直接影響數據的準確度和再現性。隨著PCR循環數的增加,非特異性產物或引物二聚體擴增的可能性也增加。尤其是使用非特異性熒光染料(如SYBR green)檢測PCR產物時,更需要避免過多的循環數。因此,在早期循環中檢測擴增的能力大大提高了數據的可靠性。

具有單孔檢測的Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統設計用于最小化背景噪聲和最大化靈敏度,以實現qPCR反應中特異性和精確度??炜焐暾堅囉?,讓它幫助你優化qPCR實驗吧。


2021-11-24 09:54:06 187 0
Azure Cielo熒光定量PCR系統無需ROX校準

ROX是一種廣泛使用的惰性熒光染料,通常添加到qPCR反應液中以校正熒光信號。然而,隨著熒光技術在儀器中的發展,比如在Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統,為了標準化而單獨使用染料的步驟已不再需要。當實時熒光定量PCR系統首次引入市場時,許多產品使用固定光源和檢測系統對96孔整板進行同時成像,導致熱塊中每個孔的光路不同(圖1)。光程差異將導致每個孔的JD熒光測量值發生變化,這取決于它們在板上的位置。例如,具有較短光程的孔可能比具有較長光程的孔具有更高的熒光讀數,從而導致兩孔之間的熒光值偏差增大。因此,許多研究者開始使用參考染料(如ROX)對這種信號變化進行標準化校正。

Azure Cielo?實時熒光定量PCR的光學系統

由圖1可知,在傳統實時PCR系統的全板成像中,與角落的孔相比,ZX區域的孔可以檢測到更高的熒光信號。由于ROX信號不受qPCR反應的影響,只要qPCR混合液的屬性保持不變,那么它在整個qPCR過程中也會保持穩定。基于這個原因以及ROX更優越的光譜特性,ROX被視為一個很好的參考染料,可用于熒光信號的歸一化處理,以校準光程差引起的熒光變化。但是ROX作為參考染料的挑戰在于,它占用了一個可能用于檢測靶標的熒光通道。隨著流感病毒和COVID-19新冠病毒(參照ANDiS SARS-CoV-2 and Influenza A/B RT-qPCR Detection Kit)等應用變得越來越普遍,多重反應也越來越常規,這也說明了多通道檢測的重要性。

Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統采用新型的高性能光學系統,在qPCR實驗中無需ROX校準。該光學系統采用16組光纖單孔掃描設計,一根光纖用于高能LED激發,另一根用于光信號檢測,可16孔同時采集,確保數據采集的一致性(圖2)。此外采用“全孔檢測”技術,每個孔可采集大約100,000個數據點,檢測時取讀數的平均值,JZ測定每個孔的熒光強度(圖3)。這種“全孔檢測”為每個采集時間點提供了比單孔掃描系統更具重現性和可靠性的數據,因為單孔掃描系統僅僅采集少量的數據點。

應用實例:

1、方法:

配制20μl反應體系,在Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統進行10個重復孔的qPCR擴增。

2、結果與討論:

結果表明,Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統能很好地檢測到每個qPCR擴增產物。由圖4可知,10個重復孔的擴增曲線高度一致,說明所有孔檢測到的信號均勻增加;計算得出Cq平均值為17.54,標準偏差低至0.02。Cq值的變異系數(CV)為0.13%,也反映了數據的高JZ度。

光纖檢測系統與Marlow-Peltier溫度模塊相結合,在qPCR實驗中實現了孔間信號檢測的均勻性和加熱溫度的均勻性,并且由于每個樣品都是單孔激發和掃描,因此避免了背景信號的干擾。通過10個重復反應的低標準偏差和CV值進一步證明了Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統的產品特點,即可完全消除光程差,不需要使用ROX進行均一化處理,Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統仍能獲得高JZ度的可靠數據。

Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統

Azure Cielo? 實時熒光定量PCR系統來自于美國Azure Biosystems公司,可為您提供3/6檢測通道,根據實驗需求靈活配置。這款產品采用了高能LED作為光源系統,可保證光源強度高,光源一致性好;高品質的帕爾貼溫度模塊作為溫控系統,升降溫速率快,可設置12列跨度30°C的溫度梯度;ZY的CMOS拍照+光纖信號傳輸作為檢測系統,CMOS檢測靈敏度高,光纖傳輸速度快,無光損失和噪音干擾,無需ROX校準。Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統可為您的科學研究提供高JZ度、高靈敏度和高可靠性的實驗結果。


申請SY

關注“深藍云生物科技”公眾號→云活動→免費SY。


2021-01-29 17:08:20 1186 0
6通道的Azure Cielo? Real Time熒光定量PCR系統

美國Azure Biosystems公司成立于2013年,致力于為分子生物學和細胞生物學提供先進的整體解決方案,是近紅外成像系統,產品從高端掃描成像到常規凝膠成像。2020年推出Azure Cielo實時熒光定量PCR系統。Azure Cielo秉承了公司品牌設計理念,為生命科學研究者提供性能穩定,數據準確可靠,流程智能簡便,結構精巧安全的實時熒光定量PCR系統。


Azure Cielo實時熒光定量PCR系統產品特性


中英文界面操作和分析軟件



性能穩定可靠,實現長時間的連續工作


穩定可靠的加熱模塊和光學系統,確保儀器連續運行>1000小時,數據依然穩定可靠,重復性高度一致。


在Azure Cielo上,連續運行1000輪PCR實驗,96孔重復/輪實驗(GAPDH定量,1.5小時/實驗)并連續計算Cq值得平均值和Cq值的標準偏差。Cq值=22.4±0.01。


免費索取詳細技術資料: http://cycloudbio.mikecrm.com/6iLygi0


2020-06-22 19:17:49 446 0
6通道的Azure Cielo? Real Time熒光定量

美國Azure Biosystems公司成立于2013年,致力于為分子生物學和細胞生物學提供先進的整體解決方案,是近紅外成像系統leader,產品從高端掃描成像到常規凝膠成像。2020年推出Azure Cielo實時熒光定量PCR系統。Azure Cielo秉承了公司品牌設計理念,為生命科學研究者提供性能zhuoyue穩定,數據jingzhun可靠,流程智能簡便,結構精巧安全的實時熒光定量PCR系統。


Azure Cielo實時熒光定量PCR系統產品特性


中英文界面操作和分析軟件



性能穩定可靠,實現長時間的連續工作


穩定可靠的加熱模塊和光學系統,確保儀器連續運行>1000小時,數據依然穩定可靠,重復性高度一致。


在Azure Cielo上,連續運行1000輪PCR實驗,96孔重復/輪實驗(GAPDH定量,1.5小時/實驗)并連續計算Cq值得平均值和Cq值的標準偏差。Cq值=22.4±0.01。


免費索取詳細技術資料: http://cycloudbio.mikecrm.com/6iLygi0


2020-09-01 10:51:39 369 0
實時熒光定量PCR檢測方法,你選對了嗎?

來自美國Azure Biosystems公司的Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統,融合了高品質Pilter溫度模塊和基于光纖傳輸的光學檢測系統,為您的科學研究提供高jing準、高靈敏的可靠結果。北京深藍云生物科技有限公司已經為您準備好了儀器,期待您的SY哦~

既然儀器已經備好了,那么該怎樣選擇檢測方法呢?

眾所周知,qPCR依托于熒光檢測技術,通過使用DNA結合染料、熒光PCR引物或探針等實時監測目的基因的擴增,從而對目的基因進行定量分析。為了避免在實驗時出差錯,下面就跟著小編一起來看一下常用的經典方法吧~

1、 DNA結合染料—SYBR Green I 法


?  原理:SYBR Green I 是一種DNA結合染料,其與雙鏈DNA結合后,熒光大大增強,DNA與染料結合所釋放的熒光量與dsDNA的數量成正比。因此,檢測到的熒光信號可反映出PCR體系存在的雙鏈DNA數量。

?  特征:可逆熒光,Z大吸收波長497nm,Z大發射波長520nm。

?  適用情況:非特異性的熒光染料,不能識別特定的雙鏈,只要是雙鏈(包括非特異性擴增產物、引物二聚體等)就會結合發光,在臨床上使用可能會有假陽性發生。但該方法容易建立實驗體系,可進行熔點分析,通用性好,價格相對較低,在科研中使用比較普遍。


2 、TaqMan 探針法


?  原理:檢測時除了需要一對特異性引物外,還需要一條與靶序列互補配對的寡核苷酸鏈—TaqMan探針,其5’末端包含熒光報告基團R,3’末端為淬滅基團Q。當探針與靶序列互補配對時,熒光基團發射的熒光因與3’端的淬滅基團接近而淬滅。在進行延伸反應時,聚合酶的5’核酸外切酶活性將探針切斷,使得熒光基團與淬滅劑分離,發射熒光。熒光信號和產物的量相匹配。

?  特征:檢測到的是積累熒光,隨著循環數的增加,釋放出來的熒光基團不斷積累。

?  適用情況:特異性較強,可進行多重qPCR分析,但成本較染料法要高一些,實驗構建相對復雜。常用的熒光基團推薦:FAM、VIC、HEX、CY5等。


3 、分子信標(molecular beacon)


?  原理:分子信標方法在檢測時除了需要一對引物以外,還需要一條呈發夾結構的寡核苷酸探針(25-40nt),分子信標的 5'端附有熒光報告基團,3'端附有淬滅基團,環被設計成與靶序列互補的15–30核苷酸,其兩端各有5-7個核苷酸互補形成莖結構,將報告基團與淬滅基團連接到一起。發夾結構中,由于報告基團接近淬滅基團,監測不到熒光信號,當環的部分與核酸序列互補配對,分子信標打開成鏈狀,使得熒光基團與淬滅劑分開,發射熒光。

?  特征:莖環結構,也是積累熒光。

?  適用情況:高特異性、可以用于多重反應,適合區分等位基因。但不能做熔點分析;發夾的莖結合過強過弱都不合適,過強的話,信標不能與靶標正確雜交,過弱的話,會隨機折疊成非發夾結構,導致產生雜信號。常用的熒光基團有FAM 、Texas Red等。


4  、熒光共振能量傳遞(FRET)


?  原理:FRET探針又稱雙雜交探針,由兩條相鄰探針組成。一個探針3'端帶有供體基團,第二個探針的5'端帶有受體基團,在PCR反應的退火步驟,兩條探針頭尾相連地分別雜交在靶標序列上,熒光分子接近,從供體到受體產生熒光共振能量傳遞,受體熒光信號的增加與擴增子出現的量成比例。

?  特征:由于FRET探針是靠近發光,所以檢測信號是實時信號,而非積累熒光。

?  適用情況:除引物外需要設計兩條探針,通用性不高;需挑選合適的供體及受體基團,供體基團發射波長與受體基團的激發波長需顯著重疊,而供體基團發射波長與受體基團的發射波長要明顯分離??勺鋈埸c分析,特異性較強。


5 、 LUX Primers


?  原理:LUX (light upon extention) 引物是通過熒光標記的引物,使引物可以實現探針的功能。其原理和分子信標類似,LUX引物也是發夾結構,其中一條引物3’端用熒光報告基團標記。在沒有單鏈模板的情況下,該引物自身配對,形成發夾結構,使熒光淬滅。在模板存在的情況下,引物與模板配對,發夾結構打開,產生熒光信號。

?  特征:積累熒光;不需要額外設計探針。

?  適用情況:不能進行熔點分析,通用性比不上SYBR Green I。但不需要專門設計探針,同時不會受非特異性擴增產物和引物二聚體的影響,特異性較SYBR Green I強。

【以上內容來源于網絡整理,侵刪】

看完了上面關于經典qPCR檢測方法的介紹,您是不是有想去跑一輪qPCR的沖動呢?

美國Azure Biosystems公司的Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統,提供Azure Cielo-3通道和Azure Cielo-6通道,可根據實驗需求靈活配置。

?   數據可靠性: 連續1000次實驗后,結果高度一致,溫控jing準,性能穩定可靠。

?  應用靈活性: 提供多種qPCR應用分析,定制化報告。

?   流程智能化: 中英文用戶界面,觸控操作,可多機聯用。

?   交互靈活性: 主機可獨立運行qPCR程序,電腦、Wi-Fi、網絡交互。



2020-06-18 10:28:41 946 0
如何處理實時熒光定量PCR數據

實時熒光定量PCR數據中的基本概念:

在整個擴增過程中會出現基線期,指數期,線性期和平臺期。其中在基線期和指數增長期,擴增產物都是以指數級增長,但是在基線期我們沒辦法檢測;而到了線性期和平臺期之后,由于不同基因,或者不同條件下其擴增效率差別很大,因此沒有辦法計算模板的含量。因此,在指數增長期的CT值就成了計算模板含量的關鍵值。

▲ 圖一:線性圖譜

▲ 圖二:對數圖譜

為什么知道CT值就能夠得到最初的目標基因含量呢?

如圖三,表示一個基因單次擴增曲線。N為擴增產物的分子數,模板的分子數乘以1+擴增效率的n次方,n代表循環次數。也就是說,如果擴增效率為100%,產物的分子數就等于模板數乘以2的n次方。但是在線性增長期和平臺期,擴增效率不可能是100%,因此PCR理論方程只在指數期成立,也就是圖三綠色框的部分。

▲ 圖三

數據處理:

以下三張圖分別表示我們在做熒光定量PCR時提到的三個名稱:擴增曲線、標準曲線、溶解曲線。

1、juedui定量:使用一系列稀釋的已知濃度的標準品與未知樣本同時進行測定,根據系列濃度標準品的CT值與起始模板量之間的線性比例關系。

注意事項:

?  標準品必須來源可靠,濃度已知。

?  標準品要和待測樣品同時在儀器中擴增。

?  只能根據標準品覆蓋的濃度范圍進行待測樣本濃度的推測。

2、相對定量:是用來確定經過不同處理的樣品之間的表達差異或目標在不同時相差的表達差異,也就是倍數差異。


Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統

來自美國Azure Biosystems公司,以創新服務于生命科學為愿景。Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統融合了高品質Peltier溫度模塊和基于光纖傳輸的光學檢測系統,為您的科學研究提供高精準、高靈敏的可靠結果。Azure Cielo 3/6檢測通道,可根據實驗需求靈活配置。同時配有10.3觸控系統,主機本身可獨立運行、連接、遠程交互,讓您隨時隨地知悉實驗進程和及時獲得實驗結果。



2022-06-06 14:14:13 239 0
適用于實時熒光定量PCR儀QS7 八聯管pcr板

適用于實時熒光定量PCR儀QS7 八聯管pcr板本生生物供應:全系熒光定量PCR耗材,PCR管,進口PCR板,移液器吸嘴,離心管,進口凍存管,培養皿,培養板,培養瓶,吸頭,儀器及手套,色譜耗材,針頭過濾器等等。

八聯管 96孔板

貨號品名顏色規格
V1082-C0.1ml PCR八聯管透明120條/盒,10盒/箱
V1082-M0.1ml PCR八聯管乳白色120條/盒,10盒/箱
V2081-C0.2ml PCR八聯管透明120條/包,10盒/箱
V2081-M0.2ml PCR八聯管乳白色120條/盒,10盒/箱
V2082-C0.2ml PCR八聯管透明120條/包,10盒/箱
V2082-M0.2ml PCR八聯管乳白色120條/盒,10盒/箱
VP1011-C無裙邊96*0.1mlPCR板透明10塊/盒,20盒/箱
VP1011-M無裙邊96*0.1mlPCR板乳白色10塊/盒,20盒/箱
VP1021-C半裙邊96*0.1mlPCR板透明10塊/盒,20盒/箱
V4801-M半裙邊96*0.1mlPCR板乳白色10塊/盒,20盒/箱
V4802-M半裙邊96*0.1mlPCR板乳白色10塊/盒,20盒/箱
VP1031-C全裙邊96*0.1mlPCR板透明10塊/盒,20盒/箱
VP2001-C無裙邊96*0.2mlPCR板透明10塊/盒,20盒/箱
VP2031-C無裙邊96*0.2ml凸PCR板透明10塊/盒,20盒/箱
VP2011-C半裙邊96*0.2mlPCR板透明10塊/盒,20盒/箱
VP2021-C半裙邊96*0.2mlPCR板透明10塊/盒,20盒/箱
V3841-M全裙邊384*40ulPCR板透明+乳白色10塊/盒,20盒/箱
V3842-M全裙邊384*40ulPCR板乳白色10塊/盒,20盒/箱
V4801-MRoche 480專用PCR 96孔板乳白色10塊/盒, 20盒/箱

適用于實時熒光定量PCR儀QS7 八聯管pcr板

ABI7500,伯樂PCR儀專用8聯排0.1/0.2,96孔板 ROCHE480熒光定量PCR儀專用96孔pcr板

適用儀器:

適用于羅氏Lightcycler480熒光定量PCR儀

用途:

廣泛應用于遺傳、生化、免疫、醫藥等領域,不僅應用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎研究,還可用于疾病的診斷或任何有DNA,RNA的地方,屬于實驗室一次性易耗品。

實驗相關耗材:

S-5009Tip 0.5-10ul進口加長吸嘴,無色, 帶濾芯,盒裝滅菌, 無DNA酶無RNA酶無熱源

S-5103Tip 0.5-20ul進口加長吸嘴,無色, 帶濾芯, 盒裝滅菌,無DNA酶無RNA酶無熱源

S-5105Tip 1-100ul進口加長吸嘴,無色, 帶濾芯,盒裝滅菌, 無DNA酶無RNA酶無熱源

S-5106Tip 1-200ul進口加長吸嘴,無色, 帶濾芯, 盒裝滅菌,無DNA酶無RNA酶無熱源

S-5107SRTip 100-1300ul進口加長吸嘴,無色, 帶濾芯, 盒裝滅菌,無DNA酶無RNA酶無熱源

BS-1778人α-酮異戊酸脫氫酶(α-KAD)ELISA試劑盒

BS-1779人支鏈氨基酸脫氫酶(BCAAD)ELISA試劑盒

BS-1780人uroguanylin(UGN)ELISA試劑盒

BS-1781人串珠素(HSPG2)ELISA試劑盒

BS-1782人淀粉樣蛋白A1(SAA1)ELISA試劑盒

BS-1783人白介素29(IL-29)ELISA試劑盒

BS-1784人甲殼質酶蛋白40(YKL-40)ELISA試劑盒

T-200-Y-R-S200ul盒裝滅菌黃吸頭 96個/10盒/5彩盒/箱

T-350-C-R-S300ul盒裝滅菌吸頭 96支/10*5盒/箱

T-1000-B-R-S1000ul盒裝滅菌藍吸頭100個/10盒/5彩/箱

TGL-200RD-57-R200ul盒裝圓嘴上樣吸頭 200支/2盒/箱

TR-222-C-L-R-S200ul盒裝滅菌低吸附帶刻度吸頭96*10*5盒

23-0005-ST0.5ml凍存管,自立,外旋蓋,底部帶二維碼

23-0015-ST1.5ml凍存管,自立,外旋蓋,底部帶二維碼

0.1-10ul 帶濾芯超微吸頭,盒裝,無色,無菌,96/鉸鏈盒,10盒/包裝,5包裝/箱

20-200ul 帶濾芯吸頭,有刻度,盒裝,無色透明,無菌,96/鉸鏈盒,10盒/包裝,5包裝/箱

4306737MicroAmp? Optical 96-Well Reaction Plate with Barcode

4309849MicroAmp? Optical 384-Well Reaction Plate with Barcode

適用于實時熒光定量PCR儀QS7 八聯管pcr板

產品優勢:本生生物代理實驗室耗材,PCR耗材品種全,可替代儀器原廠耗材,性價比高,質量穩定,對用戶可以節省實驗成本。

2021-10-11 14:42:00 473 0
熒光定量PCR檢測報告單
患者信息:男29歲江西南昌病情描述(發病時間、主要癥狀等):我前一個星期檢測患有前列腺炎,它有張單子是熒光定量PCR檢測報告單,顯示:CT結果《220檢測下限220單位copies/mlUU結果《... 患者信息:男 29歲 江西 南昌 病情描述(發病時間、主要癥狀等): 我前一個星期檢測患有前列腺炎,它有張單子是熒光定量PCR檢測報告單,顯示: CT 結果《220 檢測下限 220 單位 copies/ml UU 結果 《300 檢測下限 300 單位 copies/ml 這樣的結果正常嗎? 展開
2011-08-24 02:09:02 695 1
實時熒光定量PCR儀和基因擴增儀的區別是什么
 
2018-11-10 11:44:55 421 0
實時熒光定量PCR儀和基因擴增儀的區別是什么?
實時熒光定量PCR儀和基因擴增儀的區別是什么? 功能是不是大概相似,有了其中一臺是不是就不用另外一臺了?
2009-03-05 10:14:21 1076 4
PCR八聯管,0.1ml8聯排實時熒光定量PCR管平蓋

PCR八聯管,0.1ml8聯排實時熒光定量PCR管平蓋,透明本生生物公司供應:熒光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量離心管,進口凍存管,細胞培養皿,培養板,培養瓶,吸頭,儀器及手套,色譜耗材,針頭過濾器,分光光度計。

型號:23-2080
品名:PCR八聯管,0.1ml8聯排實時熒光定量PCR管平蓋,透明
規格:125 條/盒, 10盒/箱
描述:0.1ml 8聯排實時熒光定量PCR管+蓋, 平蓋 無DNA酶無RNA酶無熱源,透明
PCR八聯管,0.1ml8聯排實時熒光定量PCR管平蓋,透明
產品簡介:
1 超透明,低吸附。
2 PCR管更易封蓋,保證無外來空氣引發的氣溶膠污染。
3 用*高等級的進口聚丙烯獨特配方改良而成,比同類產品更好的導熱率,快速的反應和均一的熱導性。
4 使用高精密通量模具生產PCR耗材,確保塑料原料在模具中的散布均一性和同步性。
產品用途:適配于0.1ml8聯排實時熒光定量PCR管。

PCR八聯管,0.1ml8聯排實時熒光定量PCR管平蓋,透明推薦產品:0.1ml PCR透明八聯管
0.1ml PCR乳白色八聯管
熒光定量PCR八聯管光學平蓋
0.1ml PCR平蓋單管
0.2ml PCR透明八聯管
0.2ml PCR乳白色八聯管
熒光定量PCR八聯管光學平蓋
0.2ml PCR平蓋單管
0.2ml PCR凸蓋單管
無裙邊96孔*0.1ml PCR板
無裙邊96孔*0.1ml PCR板
Roche480專用PCR96孔板
0.2ml PCR帶托架平蓋單管
全裙邊96孔*0.1ml PCR板
熒光定量PCR 板光學封板膜
全裙邊384孔*40ul PCR板
全裙邊384孔*40ul PCR板
0.5~10ul無菌盒裝吸嘴(PC材質)透明96支/盒, 50盒/箱
0.5~10ul無菌盒裝吸嘴(PP材質)透明96支/盒, 50盒/箱

產品優勢:本生生物代理實驗室耗材,PCR耗材品種全,可替代儀器原廠耗材,性價比高,質量穩定,對用戶可以節省實驗成本。
適應客戶:醫院檢驗科PCR實驗室,中心實驗室心;第三方檢測機構,科研院所,大專院校,制藥廠,試劑生產廠家,疾控中心,檢驗檢疫。

2021-09-10 14:30:30 684 0
PCR八聯管,0.1ml8聯排實時熒光定量PCR管平蓋

PCR八聯管,0.1ml8聯排實時熒光定量PCR管平蓋,透明本生生物公司供應:熒光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量離心管,進口凍存管,細胞培養皿,培養板,培養瓶,吸頭,儀器及手套,色譜耗材,針頭過濾器,分光光度計。

型號:23-2080
品名:PCR八聯管,0.1ml8聯排實時熒光定量PCR管平蓋,透明
規格:125 條/盒, 10盒/箱
描述:0.1ml 8聯排實時熒光定量PCR管+蓋, 平蓋 無DNA酶無RNA酶無熱源,透明
PCR八聯管,0.1ml8聯排實時熒光定量PCR管平蓋,透明
產品簡介:
1 超透明,低吸附。
2 PCR管更易封蓋,保證無外來空氣引發的氣溶膠污染。
3 用*高等級的進口聚丙烯獨特配方改良而成,比同類產品更好的導熱率,快速的反應和均一的熱導性。
4 使用高精密通量模具生產PCR耗材,確保塑料原料在模具中的散布均一性和同步性。
產品用途:適配于0.1ml8聯排實時熒光定量PCR管。

PCR八聯管,0.1ml8聯排實時熒光定量PCR管平蓋,透明推薦產品:0.1ml PCR透明八聯管
0.1ml PCR乳白色八聯管
熒光定量PCR八聯管光學平蓋
0.1ml PCR平蓋單管
0.2ml PCR透明八聯管
0.2ml PCR乳白色八聯管
熒光定量PCR八聯管光學平蓋
0.2ml PCR平蓋單管
0.2ml PCR凸蓋單管
無裙邊96孔*0.1ml PCR板
無裙邊96孔*0.1ml PCR板
Roche480專用PCR96孔板
0.2ml PCR帶托架平蓋單管
全裙邊96孔*0.1ml PCR板
熒光定量PCR 板光學封板膜
全裙邊384孔*40ul PCR板
全裙邊384孔*40ul PCR板
0.5~10ul無菌盒裝吸嘴(PC材質)透明96支/盒, 50盒/箱
0.5~10ul無菌盒裝吸嘴(PP材質)透明96支/盒, 50盒/箱

產品優勢:本生生物代理實驗室耗材,PCR耗材品種全,可替代儀器原廠耗材,性價比高,質量穩定,對用戶可以節省實驗成本。
適應客戶:醫院檢驗科PCR實驗室,中心實驗室;第三方檢測機構,科研院所,大專院校,制藥廠,試劑生產廠家,疾控中心,檢驗檢疫。

2021-09-14 15:41:59 399 0
PCR八聯管,0.2ml12聯排實時熒光定量PCR管平蓋

PCR八聯管,0.2ml12聯排實時熒光定量PCR管平蓋本生生物公司供應:熒光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量離心管,進口凍存管,細胞培養皿,培養板,培養瓶,吸頭,儀器及手套,色譜耗材,針頭過濾器,分光光度計。

型號:23-2084
品名:PCR八聯管,0.2ml12聯排實時熒光定量PCR管平蓋
規格:200套/盒,10盒/箱
描述:0.2ml 12聯排實時熒光定量PCR管+蓋,透明,超薄壁, 平蓋,非滅菌
PCR八聯管,0.2ml12聯排實時熒光定量PCR管平蓋
實時PCR使用的PCR產品:
在普通PCR之外,每個產品,從單個PCR管、PCR八聯排管到PCR板,都通過實時PCR應用測試。所有的PCR管和排管的蓋子均設計能夠使熒光信號通過,到達PCR儀光學檢測單元。
對于八聯排管和PCR板的密封,有兩種不同的排蓋。半圓形的八聯排管蓋,有一小塊平的可透光的區域。然而實時PCRMax佳的選擇是EU可透光的全平八聯排管蓋。
它極其透明的如玻璃般的區域,具有光學封板膜良好的特質,與封板膜相比,他們沒有黏附的缺點,展示了較好的密封性,因此蒸發率極低。

PCR八聯管,0.2ml12聯排實時熒光定量PCR管平蓋推薦產品:0.1ml PCR透明八聯管
0.1ml PCR乳白色八聯管
熒光定量PCR八聯管光學平蓋
0.1ml PCR平蓋單管
0.2ml PCR透明八聯管
0.2ml PCR乳白色八聯管
熒光定量PCR八聯管光學平蓋
0.2ml PCR平蓋單管
0.2ml PCR凸蓋單管
無裙邊96孔*0.1ml PCR板
無裙邊96孔*0.1ml PCR板
Roche480專用PCR96孔板
0.2ml PCR帶托架平蓋單管
全裙邊96孔*0.1ml PCR板
熒光定量PCR 板光學封板膜
全裙邊384孔*40ul PCR板
全裙邊384孔*40ul PCR板
0.5~10ul無菌盒裝吸嘴(PC材質)透明96支/盒, 50盒/箱
0.5~10ul無菌盒裝吸嘴(PP材質)透明96支/盒, 50盒/箱

產品優勢:本生生物代理實驗室耗材,PCR耗材品種全,可替代儀器原廠耗材,性價比高,質量穩定,對用戶可以節省實驗成本。
適應客戶:醫院檢驗科PCR實驗室,實驗室;第三方檢測機構,科研院所,大專院校,制藥廠,試劑生產廠家,疾控,檢驗檢疫。

2021-09-16 13:53:53 368 0

6月突出貢獻榜

推薦主頁

最新話題

主站蜘蛛池模板: 无码专区永久免费AV网站_日本少妇被黑人xxxxx软件_狂野欧美激情性XXXX按摩_av喷水高潮喷水在线观看com_豆奶导航_中国av一级片_欧美一区二区三区国产精品_国产精品丝袜肉丝出水 | 91人人视频在线观看_国产69精品久久久久久久_午夜精品在线观看视频_免费国产小视频_亚洲精品久久久久58_婷婷午夜激情网_久草精品一区_亚洲精品国产精品国产 | 一级毛片免费在线_爱爱视频网站免费_亚洲无嘛_国产色片免费色网视频_伊人久久精品欧洲综合网_天堂va蜜桃一区_亚洲精品一区二区三区不_国产免费啪视频观看网站 | 国产亚洲成人网_国产三级在线观看_人成在线免费网站_亚洲国产成av人天堂无码_97在线视频免费看_久久久69_亚洲激情成人网_国色天香乱码区 | 欧洲一区在线观看_妞干网免费_一区二区国产日产_超碰aⅴ人人做人人爽欧美_国产又黄又硬又湿又黄的_欧美午夜无码大片免费看_久热精品视频在线播放_亚洲无亚洲人成网站77777 | 高潮毛片无遮挡免费高清_午夜亚洲精品专区高潮日w_在线欧美a_国产成人午夜精华液_全球av在线_亚洲精品久久久蜜夜影视_奇米影视888狠狠狠777不卡_亚洲色大成网站www久久 | 麻豆影院_免费毛片手机在线播放_日韩成人自拍_狠狠干亚洲色图_老头把我添高潮了A片故视频_韩国一级片免费看_久久久久黄_91精品国产91久久久久 | 日韩精品中文字幕无码专区_欧美日韩综合精品_91成人看片_蜜臀av免费一区二区三区久久乐_粉色视频在线观看免费观看_亚洲av日韩av综合_日本艳妓BBW高潮一19_女人扒开屁股让男人桶 | 噜噜在线视频_99热1_www.久久久精品_人与性动交AAAABBBB视频_日韩欧美国产亚洲_美国一级欧美三级_国产网友愉拍精品视频手机人_在线毛片片免费观看 | 人妻无码αv中文字幕久久琪琪布_正在播放亚洲一区_日韩欧美在_狠狠色噜噜狠狠狠777米奇小说_婷婷综合基地俺也来_成人依依网_久久久这里有精品999_国产精品久久久久一区二区三区 | 男男网站18禁免费_网红主播精品视频在线观看_中文字幕av一区二区三区免费看_国产v亚洲v天堂无码_2021av在线_91黄色免费看_久久久久久成人_东北老女人高潮大叫对白 | 日日添日日鲁日日夜_99re超碰_91popn国产在线_操碰久久_99精品在免费线偷拍_成人精品国产亚洲_女人内精69xxxxx免费软件_这里只有精品在线观看 | 麻豆高清免费国产一区_日韩av一区二区三区美女毛片_国内精品久久久久影院优_欧美性猛交xxxx乱大交游戏_91在线免费看_91精品国产综合久久男男_久久久久久欧美_国产婷婷一区二区三区久久 | 国产成人在线看_超级碰碰青草免费视频_亚洲欧美成人中文字幕在线_毛片免费视频播放_亚洲手机在线播放_特黄aaaaaaaaa毛片免_超黄毛片_9999亚洲 | 国产专区亚洲精品无码_国产一级录像_18禁无遮挡无码啪啪网站_欧美人成片免费看视频_色哟哟亚洲精品一区二区_日本极品少妇videossexhd_亚洲精品在线免费看_在线观看一区 | 在线天堂资源www中文_特级无码A级毛片特黄_中文字幕2018第一页_影音先锋成人影院_天天番号网_亚洲经典视频_日本狠狠色_国产乱码久久久久久 | 国产福利视频网站_免费成年人视频在线观看_四lll少妇bbbb搡bbbb_精品久久久久久无码人妻_蜜臀成人_一区二区三区在线观看免费视频_亚洲欧美国内爽妇网_日本无遮挡吸乳呻吟视频 | 欧美色交_免费看成人A片无码照片_中文永久有效幕中文永久_涩涩天堂_日本一区二区不卡在线_噼里啪啦2在线观看免费_日本xxxwww免费视频_国产呦在线沙发 | 亚洲AV女人的天堂在线观看_好大好硬好湿免费视频_欧美激情一区二区三区四区_老色鬼视频77777av_欧美成人精品一区二区三区在线观看_日韩午夜视频在线_女同性一区二区三区人了人一_一级伦奸视频 | 日韩国产欧美在线观看_蜜桃免费在线视频_亚洲国产系列_日韩av激情在线观看_日本e片色视频_一区二区三区资源_国产成人av大片在se_久久999精品 | 先锋资源av免费网_嗯啊亚洲_人人妻人人爽人人做夜欢视频九色_亚洲综合一区二区三区无码_免费又黄又裸乳的视频_国产视频www_69国产在线_中国亚州女人69内射少妇 | 老师粉嫩小泬喷水视频90_台湾毛片_9191网站_久久激情欧美_www.日本黄色_日韩爱爱片_91麻豆免费在线观看_欧美黑人肉体狂欢大派对 韩国女主播一区二区三区_亚洲综合色自拍一区_精品视频一区二区三区中文字幕_国产女人高潮抽搐叫床视频_jiujiure国产_97aⅰ内射白浆蜜桃精品_又硬又粗又大一区二区三区视频_亚洲永久免费 | 免费在线黄_91国自产精品中文字幕亚洲_一呦二呦三呦精品网站_亚洲爆乳少妇无码激情_青青国产在线视频_超碰1998_日本高清www_看a级片 | 国产亚洲欧美日韩国产片_色在线视频_日韩精品2区_日本护士毛茸茸高潮_国产精品影视在线_色片免费在线观看_操一操干一干_调教女m屁股撅虐调教 | 成人乱码免费视频A片含羞草传媒_成人午夜毛片_国产精品久久久久永久免费_久久精品成人免费国产_亚州av网_91剧场_青青青草伊人_亚洲精品一区二区三区蜜桃久 | 色综合首页_亚洲综合一区无码精品_黄色A级国产免费大片_在线观看a视频_色视频综合_精品国产不卡一区二区_日韩免费成人_亚洲欧洲无码一区二区三区 | www狠狠操_69xx视频在线播放_一级黄色aaaa_精品少妇爆乳无码av无码专区_九色91porny_无码人妻丰满熟妇区五十路百度_久久大香国产成人AV_深夜A级毛片视频免费 | 影院亚洲_国产精品一区自拍_中文字幕亚洲区_中文屏幕乱码av_台湾av在线播放_巨大欧美黑人XXXXBBBB_麻豆视频免费在线_成人黄色a | 亚洲视频久久_成年人a视频_91天堂_4438╳全国最大色倩网址_www.亚洲成人_youjizz日韩_色婷婷91_久久婷婷五月综合色丁香 | 中文字幕在线国产_亚洲一本大道av久在线播放_男人进去女人爽免费视频_中文字幕无码日韩中文字幕_日日夜夜天天射_国内久久久_狠狠做深爱婷婷久久综合一区_国产高清福利无码视频 | 播五月开心婷婷欧美综合_亚洲av午夜成人片动漫番_日本久久综合网_夜色资源网站ye321_新版天堂资源中文www官网_国产精品嫩草影院免费_久久精品福利_男人的天堂av社区在线 | 韩国日本三级在线_日韩在线播放网站_久久线视频_dvd女人裸体_亚洲国产免费网站_A片粗大的内捧猛烈进出视频_精品人伦一区二区三区蜜桃免费_久久久免费精品re6 | 国产青草视频在线观看视频_高清videosgr欧美熟妇_国产暴力强伦轩1区二区小说_粉嫩国产一区二区三区免费_亚洲免费成人在线_直接看片的av网址在线看片_日韩熟女精品一区二区三区_www久久 | 天天操天天插天天干_91一级毛片_无码亲近乱子伦免费视频在线观看_69vd视频_国产高清激情在线观看_欧美性受xxxx_色欧美色美色一区二区在线_99看片 | 少妇88久久中文字幕_久久a级毛片免费观看_国产成人精品日本亚洲网站_在线观看av一区二区_色悠久久久久久久综合网_国产免费踩踏调教视频_xxxx另类黑人_涩涩婷婷 | 国产免费观看久久_91最新在线视频_曰韩免费视频_女人高潮一级一片_边摸边吃奶边做爽gif动态视频_久色国产在线_伊人网视频在线观看_午夜福利啪啪片 | 欧美日韩中文字幕一区二区高清_人与性动交aaaabbbb_国产一区二区三区四区五区加勒比_国产成人综合欧美精品久久_99久久国产宗和精品1上映_日本丰满人要无码视频_日韩成人区_国产美女视频黄 | 人妻无码久久一区二区三区免费_人妻偷人VA精品国产旡码_久草在线视频网_中文字幕在线观看_国产嫩草影院久久久久_成人动漫网站入口_高清国产一区二区_狠狠躁夜夜躁人人躁婷婷91 | 看片免费黄在线观看入口_成年男人的天堂_国产熟妇的荡欲午夜视频_www.av小次郎_五月色丁香综缴合_年轻母亲4在线_懂色av色吟av夜夜嗨_国产伦理久久精品久久久久 | 中文字幕不卡免费视频_亚洲欧美日韩另类精品一区_少妇午夜三级伦理影院播放器_亚洲精品乱码久久观看网_久青草无码视频在线观看_在线不卡a资源高清_欧美第2页_亚洲国产成人在线播放 | www.成年人_日日夜夜91_欧美第6页_春药高潮抽搐流白浆在线播放_中文字幕国语版毛片免费_热久久久久久久久_精品国产三级在线观看_国产黄色毛片 |