數(shù)字PCR為第三代PCR技術(shù)，憑借較高靈敏度和jingzhun度廣泛應用于核酸檢測領(lǐng)域。目前，越來越多的領(lǐng)域都會用到數(shù)字PCR（dPCR）技術(shù)，但關(guān)于實驗細節(jié)和結(jié)果評估缺少一個共識。在很多發(fā)表的文章中都缺乏足夠的dPCR實驗細節(jié)，這樣不利于評審文章，甚至難以根據(jù)文章重復實驗。

本期在線研討會給大家介紹通過6色熒光數(shù)字PCR技術(shù)檢測乳腺癌相關(guān)靶點，并借此闡述了整個數(shù)字PCR操作流程以及如何運用MIQE，希望對大家的文章發(fā)表能有所幫助，少走彎路，多發(fā)好文章。

掃描二維碼進入直播間

如今，隨著快速無創(chuàng)篩查、癌癥檢測以及臨床測序應用的擴大，診斷行業(yè)已經(jīng)鋪平了通往JZYL時代的道路。隨著市場對更kuai、更jingque診斷的需求，以及監(jiān)管的不斷發(fā)展，診斷專業(yè)人士需要一個能夠幫助他們建立伙伴關(guān)系、獲取行業(yè)知識、與同行建立網(wǎng)絡并從同行那里學習的綜合平臺，共同討論診斷行業(yè)的發(fā)展、里程碑、挑戰(zhàn)和機遇。第12屆Next-Generation Dx峰會將于8月25日-27日（美東時間）進行線上舉辦。

會議期間Stilla Technologies公司也將聚焦“液體活檢”進行交流互動，針對6色Crystal Digital PCR?系統(tǒng)的多重檢測能力進行zuixin技術(shù)的分享，大家可以觀看Stilla Technologies應用專家Kimberley Gutierrez博士的演講，并且在會議現(xiàn)場可以訪問我們的線上展位。

Kimerley Gutierrez博士將介紹Stilla的6色Crystal Digital PCR?系統(tǒng)，并闡述其是如何創(chuàng)建1個panel可同時對至少6個癌癥突變位點進行檢測。該報告將于美國東部時間8月25日下午1點25分在“液體活檢”ZT節(jié)目中播出。

想了解更多詳情，掃描下方二維碼注冊報名吧！

時間

2020年8月25-27日（美東時間）

會議ZT日程

2021年4月13日，深藍云Gene-π數(shù)字PCR學堂——數(shù)字PCR病毒載量檢測工具（北京站）在國家疾控ZX成功舉辦。為更好的服務于用戶，本次培訓班以理論結(jié)合實踐的形式，聚焦數(shù)字PCR原理系統(tǒng)、實驗操作、結(jié)果分析，病毒載量檢測等核心內(nèi)容，受到了用戶的一致好評。

數(shù)字PCR技術(shù)的誕生和發(fā)展為核酸定量和核酸檢測提供了全新的思路。無需標準品和標準曲線，可提供比qPCR的核酸定量，直接讀取陽性信號，通過泊松分布校正得到目標基因的JD拷貝數(shù)，并具有高靈敏度等特點。

本次訓練營對第三代數(shù)字PCR技術(shù)及naica??微滴芯片式數(shù)字PCR技術(shù)介紹、naica??數(shù)字PCR核酸JD定量技術(shù)中的病原體檢測應用、病毒載體JD拷貝濃度數(shù)字PCR檢測實驗設計、特別是一步法數(shù)字PCR新冠病毒檢測試劑盒的使用和結(jié)果判讀等方面進行了詳細介紹，同時進行實操。

▲ 專家在進行精彩的分享

▲ 實驗操作

作為數(shù)字PCR頭部企業(yè)技術(shù)開創(chuàng)者的法國Stilla Technologies公司于2019年提出數(shù)字PCR在線學習資源ZXgene-π學堂，為使用和即將使用數(shù)字PCR技術(shù)的專家學者提供有效的途徑，同時開展Gene-π數(shù)字PCR線下實操培訓課堂，為用戶提供完善的服務以及優(yōu)化的應用解決方案。

naica?微滴芯片式數(shù)字PCR系統(tǒng)

naica?微滴芯片式數(shù)字PCR系統(tǒng)，以Sapphire芯片（全自動）或Opal（高通量）芯片為耗材，形成25,000-30,000個微滴的2D陣列，以單層平鋪方式進行PCR擴增實驗。反應完成后對微滴進行三色通道或六色通道檢測，從而對起始核酸濃度進行JD定量。2.5小時內(nèi)，可快速獲得結(jié)果。

【數(shù)字PCR網(wǎng)絡研討會】

在CRISPR編輯的細胞系中

使用數(shù)字PCR進行標記拷貝數(shù)評估

       11月19日北京時間23:00（巴黎時間：17:00），歐洲分子生物學實驗室研究員Moritz Kueblbeck將于Genomeweb平臺在線分享“在CRISPR編輯的細胞系中使用數(shù)字PCR進行標記拷貝數(shù)評估”相關(guān)知識。

本網(wǎng)絡研討會將介紹如何使用dPCR快速定量CRISPR編輯的HeLa細胞中的綠色熒光蛋白拷貝數(shù)。討論還將介紹dPCR的工作原理和采集后的數(shù)據(jù)分析方法。

Moritz Kueblbeck在德國海德堡的癌癥研究ZX(DKFZ)做了八年的研究技術(shù)員。2014年,他加入了Jan Ellenberg在海德堡的歐洲分子生物學實驗室,在不同實驗室的項目中，他使用CRISPR/Cas9方法利用內(nèi)源性的標記蛋白(在HeLa和U-2 OS細胞進行不同標簽的純合敲入)進行人類細胞系基因組編輯。

內(nèi)容簡介

l  熒光蛋白或自標記是使用熒光顯微鏡研究活細胞中蛋白質(zhì)動力學的寶貴工具。然而，定量成像需要目標蛋白(POI)的生理表達水平，特別是當需要研究POI的化學計量相互作用時。

l  CRISPR使研究人員能夠標記幾乎任何感興趣的目標基因，使其可以研究相應POI的生理表達水平。然而，正確編輯細胞克隆的產(chǎn)生和選擇——即標記等位基因的預期數(shù)量和缺乏額外的整合——需要對標記的拷貝數(shù)進行定量評估。

l  探討dPCR是一種快速、可靠的熒光標記CRISPR編輯細胞定量檢測方法。

注冊頁面

點擊鏈接注冊報名：

https://event.on24.com/eventRegistration/EventLobbyServlet?target=reg20.jsp&partnerref=stilla&eventid=2111188&sessionid=1&key=2206BD6DA2548F0F9C46911E3A71DDB4?Tag=&sourcepage=register

法國Stilla Technologies公司開發(fā)的—款多重PCR專用預混液：naica^?multiplex PCR MIX（見表1），專用于naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)的多重檢測。并對naica^?multiplex PCR MIX的多重檢測性能進行了詳細評估。當面對有限的樣本量時，可保證多重數(shù)字PCR檢測的靈敏度和準確性；在復雜背景基因存在的情況下，依然能精確檢出低豐度的目的基因。

★ naica^?multiplex PCR MIX在naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR上進行6個靶標的同步準確定量

采用0.2~13000cp/ul的DNA樣品，使用10X naica^?multiplex PCR MIX在naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)上進行6個靶標的線性范圍分析，結(jié)果顯示6個靶標的R²均＞0.99，說明在naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)上，能夠可靠地實現(xiàn)6靶標同步準確定量（圖1)。與2X和5X濃度的數(shù)字PCR預混液(dPCR Mixes)相比，10X濃度的數(shù)字PCR預混液體積加入量降低了50％至80％，最大限度地提高樣品加入量。尤其是在檢測低濃度樣品或稀有靶標時，樣品加入量的增加可提高檢測靈敏度。

▲ 圖1：使用naica^?multiplex PCR MIX在naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR上進行6個靶標的線性分析，分別在藍色、青色、綠色、黃色、紅色和紅外線6個通道進行檢測。每個稀釋點的DNA濃度分別為：0.2、1.5、8.0、50、320、2050和13000 cp/ul，每個稀釋度進行3次重復。結(jié)果顯示6個靶標的R2均大于0.99，說明所有靶標的結(jié)果都高度真實可靠。

★ 在復雜的背景基因下，對低豐度目的基因進行精確定量

數(shù)字PCR的—個重要技術(shù)優(yōu)勢是能夠在存在多個靶標擴增的情況下檢測到低濃度靶標。為了評估naica^?multiplex PCR MIX的穩(wěn)定性。使用同一個目標DNA模板的不同濃度系列稀釋液（0.2~ 13000 cp/uL)進行檢測，同時其中摻入5種外部靶標模板（每個靶標的濃度為3000 cp/ul)。在不同測試條件下，結(jié)果均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（圖2A和2C)。這些結(jié)果與同一DNA 靶點在不同濃度下單獨檢測以及在不添加外部靶標的情況下獲得的結(jié)果具有可比性（圖2B和2D）。

▲ 圖2：使用naica^?multiplex PCR MIX的擴增結(jié)果真實可靠。將pUC18質(zhì)粒（圖A和B)和pUC57質(zhì)粒（圖C和D)的13000至0.2 cp/ul的系列稀釋液在5個外部擴增靶標背景下（每個靶標為3000 cp/ul(A,C)）和在不含外部靶標(B,D)的情況下進行定量檢測，3次重復。線性擬合系數(shù) R2>0.99，表明在不考慮多重背景的情況下，對所有靶標的測定結(jié)果都是真實可靠的。5個外部靶標的相對標準偏差保持在2.3％至3.1% (n=21)，顯示出極好的重復性。

★ naica^?multiplex PCR MIX應用亮點

?  實現(xiàn)數(shù)字PCR方法多重檢測的高度穩(wěn)定性和高檢測靈敏度；

?  可在naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)的動態(tài)范圍內(nèi)同時定量檢測6個獨立的DNA靶標，均具有良好線性關(guān)系；

?  5X和10X的數(shù)字PCR預混液，提高了naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)高階多重檢測能力；

?  10X PCR MIX比5X PCR MIX降低50％的體積用量，從而增加DNA的加入量。在檢測低濃度樣品或稀有靶標時，樣本加入量的增加可提高檢測靈敏度。

表1 naica^?multiplex PCR MIX貨號及規(guī)格

naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)

法國Stilla Technologies公司naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)，源于Crystal微滴芯片式數(shù)字PCR技術(shù)，自動化微滴生成和擴增，每個樣本孔可實現(xiàn)6熒光通道的檢測，智能化識別微滴并進行質(zhì)控，3小時內(nèi)即可獲得至少6個靶標基因的拷貝數(shù)濃度。

11月19日北京時間23:00（巴黎時間：17:00），歐洲分子生物學實驗室研究員Moritz Kueblbeck將于Genomeweb平臺在線分享“在CRISPR編輯的細胞系中使用數(shù)字PCR進行標記拷貝數(shù)評估”相關(guān)知識。

本網(wǎng)絡研討會將介紹如何使用dPCR快速定量CRISPR編輯的HeLa細胞中的綠色熒光蛋白拷貝數(shù)。討論還將介紹dPCR的工作原理和采集后的數(shù)據(jù)分析方法。

Moritz Kueblbeck在德國海德堡的癌癥研究ZX(DKFZ)做了八年的研究員。2014年,他加入了Jan Ellenberg在海德堡的歐洲分子生物學實驗室,在不同實驗室的項目中，他使用CRISPR/Cas9方法利用內(nèi)源性的標記蛋白(在HeLa和U-2 OS細胞進行不同標簽的純合敲入)進行人類細胞系基因組編輯。

內(nèi)容簡介

l  熒光蛋白或自標記是使用熒光顯微鏡研究活細胞中蛋白質(zhì)動力學的寶貴工具。然而，定量成像需要目標蛋白(POI)的生理表達水平，特別是當需要研究POI的化學計量相互作用時。

l  CRISPR使研究人員能夠標記幾乎任何感興趣的目標基因，使其可以研究相應POI的生理表達水平。然而，正確編輯細胞克隆的產(chǎn)生和選擇——即標記等位基因的預期數(shù)量和缺乏額外的整合——需要對標記的拷貝數(shù)進行定量評估。

l  探討dPCR是一種快速、可靠的熒光標記CRISPR編輯細胞定量檢測方法。

注冊地址：https://event.on24.com/eventRegistration/EventLobbyServlet?target=reg20.jsp&partnerref=stilla&eventid=2111188&sessionid=1&key=2206BD6DA2548F0F9C46911E3A71DD

安東帕在線研討會持續(xù)更新中，點擊您感興趣的“主題”，報名參加！

主題：建筑材料表征-從原料材料到成品

時間：2022-05-11, 15:00 - 18:00

主題：炭黑表面積測量-橡膠填料、黑色顏料和電池導電劑

時間： 2022-05-11, 21:00 - 22:00

主講人：Dr. Martin Thomas

主題：用SAXSpoint 5.0探索納米世界

時間：2022-05-18,15:00 - 15:45 

主講人：HeinerSantner, PhD

主題：從輔料處理到制片：制藥行業(yè)的粉體流變解決方案

時間：2022-05-24,16:00 - 17:00 

主講人：Dr.Helena Weingrill Marion

注冊：iphone手機需復制鏈接，瀏覽器打開

全封閉Naica數(shù)字PCR新型冠狀病毒超敏檢測方案

Cycloud與MicroFuture合作

深藍云生物科技與北京微未來科技，基于國家疾控ZX和WHO推薦區(qū)域，針對2019新型冠狀病毒的四段保守序列作為檢測靶標，開發(fā)超敏的數(shù)字PCR檢測方法和快速的定量PCR檢測方法。

【圖源：北京微未來科技】

區(qū)段分別為：RdRP基因（特異性靶點），E蛋白基因，N蛋白基因，保守基因S區(qū)位點。確保對2019新型冠狀病毒鑒定的高度特異性和靈敏度。      

與人冠狀病毒HcoV-229E、 HcoV-HKU1、 HcoV-OC43、 HcoV-NL63等型無交叉。

深藍云生物科技以專業(yè)服務科學為使命，愿所學，以致用，共戰(zhàn)病毒！

北京微未來科技有限公司以“解碼病原微生物，致力于傳染病防控”為企業(yè)使命。與北京深藍云生物科技共同在病毒的超敏檢測的數(shù)字PCR方法展開深入合作。 

聯(lián)系方式：

公司名稱：北京深藍云生物科技有限公司
聯(lián)系電話：010-57256059
E-mail：info@cycloudbio.com

在2021版的Methods in Molecular Biology·Lung Cancer第10章(127頁開始)介紹了使用naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)檢測NSCLC患者ctDNA樣本中的19種活化和耐藥位點，并對檢測方法進行了詳細的描述。

naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)檢測流程

文中闡述，naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)多重檢測速度快，每個患者樣本可獲得大量突變信息，通過naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)進行液體活檢可實現(xiàn)高靈敏度和高效的治療監(jiān)測，早期發(fā)現(xiàn)治療耐藥性。

Methods in Molecular Biology是Springer出版的權(quán)威分子生物學方法學系列著作，共1110冊，涵蓋了生物學的方方面面。包括生命科學、藥物科學、化學、藥學、材料學、細胞生物學、生物化學、人類基因組學、植物性、免疫學等。Lung Cancer就肺腫瘤生物學常用的實驗方法進行了深入的討論和細致的描述，包括用于建立肺癌診斷和預后的相關(guān)研究方法。

naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)

法國Stilla Technologies公司naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)，源于Crystal微滴芯片式數(shù)字PCR技術(shù)，自動化微滴生成和擴增，每個樣本孔可實現(xiàn)6熒光通道的檢測，智能化識別微滴并進行質(zhì)控，3小時內(nèi)即可獲得至少6個靶標基因的拷貝數(shù)濃度。