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【深藍云直播課堂】Naica數字PCR技術用于基因編輯和多重突變檢測

艾普拜生物科技(蘇州)有限公司 2020-08-17 12:22:13 402  瀏覽
  • 基因編輯技術指能夠讓人類對目標基因進行“編輯”,實現對特定DNA片段的敲除、加入等。而CRISPR/Cas9技術自問世以來,就有著其它基因編輯技術無可比擬的優勢,技術不斷改進后,更被認為能夠在活細胞中最有效、最便捷地“編輯”任何基因。



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【深藍云直播課堂】Naica數字PCR技術用于基因編輯和多重突變檢測

基因編輯技術指能夠讓人類對目標基因進行“編輯”,實現對特定DNA片段的敲除、加入等。而CRISPR/Cas9技術自問世以來,就有著其它基因編輯技術無可比擬的優勢,技術不斷改進后,更被認為能夠在活細胞中最有效、最便捷地“編輯”任何基因。



但是在CRISPR基因編輯之后,工作并沒有結束,你需要驗證感興趣的基因是否成功突變。想知道如何利用高靈敏度、高jingzhun度的數字PCR技術來檢測基因編輯嗎?快來參加本次深藍云直播課堂吧!



2020-08-17 12:22:13 402 0
深藍云直播課堂 | 單重PCR到多重PCR實驗設計

PCR技術以特異性的寡核苷酸引物放大擴增特定的DNA片段,一對引物在單次反應擴增單個基因。通常每個靶標分別進行檢測,即單重PCR反應,但當我們需要檢測多個靶標基因時,單重PCR費時費力同時無法排除不同樣品孔間的加樣差異,如內參基因的歸一化檢測,需要在同一反應管中檢測內參基因和目標基因,多重PCR實驗無疑是最簡單直接的解決方案。

多重PCR也稱復合PCR,是在常規PCR基礎上改進并發展起來的一種PCR擴增技術,即可在一個反應體系中加入兩對以上引物,同時擴增出多個核酸片段。在熒光定量PCR(qPCR)和數字PCR(digital PCR)技術中,多重PCR設計配合多熒光通道可以進行更多靶標的相對于標準品的檢測和直接的JD定量檢測,既具有單重PCR的敏感性和特異性,同時又比單重PCR更加GX、快捷和經濟。

多重PCR實驗具體如何進行?又有哪些注意事項?實時熒光定量PCR和數字PCR如何和多重PCR結合?北京深藍云生物科技有限公司云課堂將為您答疑解惑。

想要了解更多關于單重PCR和多重PCR實驗設計的相關信息,快來參加5月13號的直播課堂吧!


掃描二維碼進入直播間



2021-05-08 09:36:15 355 0
深藍云直播課堂: MIQE指南下數字PCR技術文章發表

目前,越來越多的領域都會用到數字PCR(dPCR)技術,但關于實驗細節和結果評估缺少一個共識。在很多發表的文章中都缺乏足夠的dPCR實驗細節,這樣不利于評審文章,甚至難以根據文章重復實驗。

為了讓大家更好地遵循MIQE進行實驗,科學家依托于法國Stilla Technologies的Naica數字PCR平臺發布了一篇文章Reproducible and Sensitive Assays using 3-and 6-colour Crystal Digital PCR? for Detecting Point Mutations in Human Breast Cancer,通過6色熒光數字PCR技術檢測了乳腺癌相關靶點,并借此闡述了整個數字PCR操作流程以及如何運用MIQE。


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2020-07-17 16:51:12 570 0
深藍云直播課堂視頻新聞回放上線啦

你想從Western Blot小白進階到實驗高手嗎?想了解Z先進的數字PCR定量技術嗎?想了解新冠病毒數字PCR檢測方案嗎?想知道不一樣的正倒置一體熒光顯微鏡嗎?想了解實時熒光定量PCR原理與分析方法嗎?你想知道的問題都在深藍云直播課堂。

有些朋友說因時間關系,沒能趕上直播講座,沒關系, 小編為您雙手奉上精彩的直播視頻分享~



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2020-04-29 16:56:59 373 0
深藍云直播課堂-如何獲得高質量的引物和探針?

對于做分子生物學實驗的科研人員來說,引物探針是一個無比熟悉的詞語。不管是普通的PCR、實時熒光定量PCR(qPCR)還是靈敏度及jing準度更高的數字PCR(dPCR),高質量的引物和探針都是實驗成功的關鍵。

然而想要獲得的引物探針,得到一個好的實驗結果也并非那么容易。好的實驗結果千篇一律,不好的實驗結果各不相同,可能一不小心就有了非特異性產物或者擴增不出產物等等。從實驗小白到大神,不斷地學習和摸索是少不了的。針對不同的PCR在引物和探針設計上又有哪些不同呢?如何評估設計的引物和探針的質量呢?為了讓您少走彎路,深藍云直播間與您在線交流如何獲得更優的qPCR、dPCR引物及探針,為您的實驗助一份力!



2020-04-20 09:18:15 360 0
【網絡在線課堂】數字PCR與CRISPR基因編輯強強聯合!

1119日北京時間23:00巴黎時間:17:00),歐洲分子生物學實驗室研究員Moritz Kueblbeck將于Genomeweb平臺在線分享“CRISPR編輯的細胞系中使用數字PCR進行標記拷貝數評估”相關知識


本網絡研討會將介紹如何使用dPCR快速定量CRISPR編輯的HeLa細胞中的綠色熒光蛋白拷貝數。討論還將介紹dPCR的工作原理和采集后的數據分析方法。


Moritz Kueblbeck在德國海德堡的癌癥研究ZX(DKFZ)做了八年的研究員。2014,他加入了Jan Ellenberg在海德堡的歐洲分子生物學實驗室,在不同實驗室的項目中,他使用CRISPR/Cas9方法利用內源性的標記蛋白(HeLaU-2 OS細胞進行不同標簽的純合敲入)進行人類細胞系基因組編輯。

內容簡介

 

l  熒光蛋白或自標記是使用熒光顯微鏡研究活細胞中蛋白質動力學的寶貴工具。然而,定量成像需要目標蛋白(POI)的生理表達水平,特別是當需要研究POI的化學計量相互作用時。

l  CRISPR使研究人員能夠標記幾乎任何感興趣的目標基因,使其可以研究相應POI的生理表達水平。然而,正確編輯細胞克隆的產生和選擇——即標記等位基因的預期數量和缺乏額外的整合——需要對標記的拷貝數進行定量評估。

l  探討dPCR是一種快速、可靠的熒光標記CRISPR編輯細胞定量檢測方法。

注冊地址:https://event.on24.com/eventRegistration/EventLobbyServlet?target=reg20.jsp&partnerref=stilla&eventid=2111188&sessionid=1&key=2206BD6DA2548F0F9C46911E3A71DD

2019-11-13 15:35:16 368 0
深藍云qPCR知識小課堂---TaqMan探針法

在之前發表的文章《實時熒光定量PCR檢測方法,你選對了嗎?》中提到,實時熒光定量PCR常用的方法包括了SYBR Green染料法、TaqMan探針法、分子信標、熒光共振能量傳遞(FRET)和LUX Primers等。那么應用最為廣泛的則是SYBR Green染料法和TaqMan探針法,兩者各有所長。今天,先給大家介紹TaqMan探針法,它優秀在哪里?

TaqMan 探針法

最關鍵的Taqman探針,是一條與靶序列特異性結合的寡核苷酸序列,其能夠結合到正反向引物結合區域的中間部位,隨著PCR反應的進行,DNA聚合酶在延伸到探針位置時會將其水解,從而釋放熒光基團,擴增產物產生信號。

TaqMan探針法的優勢

?  高特異性,只有在探針和靶標基因之間發生特異性的水解,才會生成熒光信號。

?  多重分析,可選擇不同的報告基因染料標記探針,在一個反應管內擴增并檢測多個不同的序列。

?  無需PCR后處理,減少分析工作量并節省材料成本。

探針序列的設計原則

1. TaqMan探針的長度zuihao不超過30bp。理想情況下,有15bp可獲得ZJ特異性;

2. Tm值在67℃-72℃之間,確保探針的Tm值比引物的高5-10℃,在退火過程中優先結合到模板上;

3. 探針序列的GC含量在20%至80%之間,避免多個重復的堿基出現,尤其要避免4個或超過4個的G堿基;

4. 探針盡量避免出現二聚體或者發夾結構,以保證足夠高的模板結合效率;

5. 探針5’端不能為G,因為即使單個G堿基與FAM熒光報告基團相連時,G也可以淬滅FAM基團所發出的熒光信號,從而導致假陰性的出現。

引物探針設計不再犯愁

深藍云生物為您提供Gene-π網站在線設計引物探針,可為您快速設計引物探針并進行評估,復制鏈接可進行查詢:https://www.gene-pi.com/item/primers-and-probes-2/

如何選擇熒光基團和淬滅基團

修飾基團的選擇是探針法的重要環節,那么我們需要注意以下幾項:

1. 根據熒光定量PCR儀熒光通道,選擇適配的熒光基團,優先選擇常用的熒光基團,如FAM、VIC或CY5等;

2. 根據熒光基團類型選擇淬滅基團。早期的淬滅基團TAMRA,自身會發出熒光信號,干擾檢測結果,后續慢慢地被其他淬滅基團替代。目前淬滅基團最常用的就是BHQ、NFQ-MGB或QSY等;

3. 進行多重qPCR檢測時,每個通道要選擇不同的熒光基團,且避免各標記基團的激發和發射波長重疊,出現熒光干擾的情況。

Azure Cielo?實時熒光定量PCR

來自美國Azure Biosystems公司的Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統,為您提供Azure Cielo-3通道和Azure Cielo-6通道,可根據實驗需求靈活配置。


除此之外,Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統融合了高品質Peltier溫度模塊和基于光纖傳輸的光學檢測系統,可為您的科學研究就提供高jingzhun、高靈敏可靠結果。



?   數據可靠性

連續1000次實驗后,結果高度一致,溫控jingzhun,性能穩定可靠。

?  應用靈活性

提供多種qPCR應用分析,定制化報告。

?   流程智能化

中英文用戶界面,觸控操作,可多機聯用。

?   交互靈活性

主機可獨立運行qPCR程序,電腦、Wi-Fi、網絡交互。


2020-07-24 16:53:08 594 0
【深藍云直播課】Echo顯微鏡使用技巧—Rebel

顯微鏡是由一個透鏡或幾個透鏡的組合構成的一種光學儀器,是人類進入原子時代的標志。顯微鏡是人類最偉大的發明物之一,那么該如何使用顯微鏡呢?長期使用顯微鏡的小伙伴們,長期觀察目鏡筒是否會感到眼睛酸澀?想要分享視野中的發現時是否會困擾如何去跟別人描述新發現的位置?想要記錄視野圖像時是否需要反復的找合適角度拍照?


想要知道上面問題的解決辦法嗎?那就趕緊快來參加8月25日的深藍云直播課堂吧!您想知道的答案都在本次課程里,come on!


直播課



2020-08-24 15:00:55 448 0
深藍云干貨課堂——如何抓住qPCR數據分析的關鍵

同學們又是做qPCR實驗的一天,有沒有懷著忐忑又期待的心情去點開“analysis”的呢?點開之后,發現擴增曲線不正常,或者Cq值過大,又或者SD值太高,那這樣的實驗結果還靠譜嗎?現在讓小編來告訴你,qPCR實驗的成功與否,關鍵在于各組數據是否達到判定標準以及是否符合實驗預期,小小的qPCR實驗它可以變得很簡單,也可以變得很復雜,如何抓住qPCR數據分析的關鍵,是分析qPCR結果可信度的diyi步。

qPCR數據分析的關鍵

qPCR數據分析主要是利用Cq值進行計算,所以我們需要了解qPCR反應中幾個重要的參數,根據參數的表現來進行實驗評估:


擴增曲線:圖1反映的是熒光信號變化量的對數與qPCR反應循環數的關系。圖2反映的是隨著qPCR反應的進行相應的熒光信號的變化,比較直觀,但是指數期很短。標準的擴增曲線是呈現出“S”型,具有特征性的形狀:首先背景信號,然后是三個增長階段(指數增長期、線性增長期和平臺期)。


圖1:擴增曲線對數圖譜。圖源:Azure Cielo qPCR系統。

圖2:擴增曲線線性圖譜。圖源:Azure Cielo qPCR系統。

基線:通常3-15個循環時,熒光信號變化不大,變化趨勢接近于一條直線,即擴增曲線的水平部分,這樣的直線就是基線。同一次反應中針對不同的基因需單獨設置基線。

閾值:是一個熒光強度值,穿過閾值與X軸平行的直線稱為閾值線,自動設置是3-15個循環的熒光信號的標準偏差的10倍。手動設置是置于指數擴增期,剛好可以清楚地看到熒光信號明顯增強。同一次反應中針對不同的基因可單獨設置閾值,但對于同一個基因擴增一定要用同一個閾值。

Cq值:qPCR擴增過程中,擴增產物的熒光信號達到設定的閾值時所經過的擴增循環次數,與起始濃度的對數成線性關系。分析定量時一般取Cq:15-35,太大或者太小都會導致定量的不準確。

圖3:擴增曲線。圖源:Azure Cielo qPCR系統。

評估qPCR反應的效果

1、擴增效率及相關系數

為了正確地評估PCR擴增效率,至少需要做3次平行重復,并至少做5個數量級倍數(5logs)連續梯度稀釋模板濃度。擴增效率E在90-110%之間時,認為擴增接近理想情況。

R2值:評估PCR效率的另一個關鍵參數,它是說明兩個數值之間相關程度的統計學術語。如果R2等于1,則可以用Y值(Cq)來準確預測X值(初始模板量)。反之,如果R2等于0,就不能通過Y值來預測X值。一般認為,標準曲線的R2值大于0.98時,兩個數值之間相關的可信度很好。

圖4:標準曲線。圖源:Azure Cielo qPCR系統。

2、重復性

重復性即是指精確度,反映多次測量值之間的接近程度。標準偏差(standarddeviation,偏差的平方根)是最常用的精確度計量方法。如果許多數據點都靠近平均值,那么標準偏差就小;如果許多數據點都遠離平均值,則標準偏差就大。例如,假設PCR反應效率是100%,那么2倍稀釋點之間的平均Cq間隔應該恰為1個Cq值。要以99.7%的幾率分辨2倍稀釋濃度,標準偏差就必須小于等于0.167。為了能夠在95%以上的情況下分辨出2倍稀釋,標準偏差必須小于等于0.250。總的來說,重復孔之間的標準偏差不大于0.2,說明實驗的重復性較好。

圖5:8個重復孔的擴增曲線。圖源:Azure Cielo qPCR系統。

3、重現性

指不同批次之間或不同實驗室之間qPCR結果的變化,通常表示為拷貝數或Cq值的SD或CV。

圖6:4臺獨立的Azure Cielo 儀器上檢測GAPDH,Cq =20.11,SD= 0.002。

4、靈敏度

分析靈敏度是指一個樣本中可通過實驗精確測量的最小拷貝數,而臨床靈敏度是指在特定疾病患者們中,被檢測確定為陽性的百分比。靈敏度為limit of detection(LOD),即在給定的分析程序中,可以確定且合理(通常使用95%的概率)檢測得到的濃度,可通過梯度稀釋樣品來確定ZD檢測限。LOD理論上最小是3 copy/aliquot,這是由遵從泊松分布的取樣誤差導致的。假設符合泊松分布,那PCR有95%的可能性至少包含和檢測到1個拷貝。

圖7:5個數量級的動態范圍檢測。圖源:Azure Cielo qPCR系統。

5、準確度

反映測量值和真實值的接近程度,以倍數變化或拷貝數進行估算。

6、特異性

指qPCR實驗中只可以檢測到目的基因,引物特異性擴增靶序列,而不會擴增其他基因序列。可通過凝膠電泳檢測擴增產物是否為單一條帶,或通過qPCR反應,根據溶解曲線是否具有單峰來判斷。

圖8:溶解曲線。圖源:Azure Cielo qPCR系統。

Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統

來自美國Azure Biosystems公司的Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統,為您提供Azure Cielo-3通道和Azure Cielo-6通道,可根據實驗需求靈活配置。該系統融合了高品質Peltier溫度模塊和基于光纖傳輸的光學檢測系統,可為您的科學研究就提供高jingzhun、高靈敏可靠結果。

Azure  Cielo?性能展示

?   高重現性和穩定性

連續1000次實驗后,結果高度一致
GAPDH定量,Cq值=22.4±0.01

?  高重復性

重復孔的擴增曲線高度重合

96孔重復結果(GAPDH),Cq平均值=19.1,

變異系數(Cv)=0.002。

?   高分辨率

準確區分2倍濃度差異樣品

人內參cDNA(GAPDH)進行10個梯度,

2倍稀釋,3個重復,線性擬合度

R2=0.998,擴增效率E=99.89%


2020-08-11 19:12:33 852 0
深藍云qPCR知識小課堂---SYBR Green染料法

TaqMan探針法因其良好的特異性以及可多重檢測而受到實驗人員的青睞,其實除了探針法外,還有很多好的實驗方法也被實驗人員廣泛認可,這次就介紹一下另一個應用廣泛的方法:SYBR Green染料法,它又是因為哪些優點獲得實驗人員的青睞呢?

染料法原理

染料法一般使用的是SYBR Green I染料,這是一種可以與雙鏈DNA小溝結合的熒光染料,其不會與單鏈DNA結合,且在游離狀態下幾乎無熒光,只有與雙鏈DNA結合才會發出熒光,因此將PCR擴增產生的雙鏈DNA數量與熒光強度直接關聯,產生實時監測的效果。

SYBR Green染料法優點

?  通用性好,適合進行大多數類型的定量反應,可以進行熔解曲線的分析。

?  無需設計探針,引物設計相對簡單,不用考慮基團選擇,易于上手;成本低,無需合成探針。

?  無需PCR后處理,減少分析工作量并節省材料成本。

SYBR Green染料法缺點

SYBR Green染料法也有其缺點,SYBR Green染料法一個反應只能檢測一個基因,無法進行二重甚至多重的實驗。同樣的相對于TaqMan探針法其特異性較差,當引物存在二聚體或者非特異性擴增時,染料同樣可以結合并發出熒光,影響定量結果。因此對于SYBR Green染料法而言,設計一套好用的引物是重中之重。

深藍云生物為您提供Gene-π網站在線設計引物,可為您快速設計引物并進行評估,復制鏈接可進行查詢:https://www.gene-pi.com/item/primers-and-probes-2/


設計好引物后,我們該怎么進行實驗呢?

1.實驗條件的優化

我們需要對設計的引物擴增效果進行分析,使用陽性模板進行擴增,確定擴增產物為單一條帶,且大小符合設計預期,如有條件可以對擴增產物進行測序,保證準確性。當引物無問題后,進行反應條件的探索,對退火溫度進行溫度梯度檢測,找到合適的退火溫度,即PCR擴增效果好,陰性模板無擴增,條帶單一,熔解曲線單峰等。

2.預實驗

設計好引物并探索好實驗條件后,對樣本進行一次預實驗,預實驗將樣本進行梯度稀釋用以制作標準曲線,分析內參基因以及目的基因的擴增效率是否接近且在100%左右,其次可確認高濃度模板中是否有yizhi劑干擾,從而確定實驗時合適的模板濃度(樣本是否需要稀釋或濃縮)。

3.正式實驗

當我們完成了實驗條件和預實驗后就可以進行正式實驗了,每個樣品都需要3個或以上的重復,保證結果的準確性。


Azure Cielo?實時熒光定量PCR

來自美國Azure Biosystems公司的Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統,為您提供Azure Cielo-3通道和Azure Cielo-6通道兩種機型,可根據實驗需求靈活配置。

除此之外,Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統融合了高品質Peltier溫度模塊和基于光纖傳輸的光學檢測系統,可為您的科學研究就提供高jingzhun、高靈敏可靠結果。



?   數據可靠性

連續1000次實驗后,結果高度一致,溫控JZ,性能穩定可靠。

?  應用靈活性

提供多種qPCR應用分析,定制化報告。

?   流程智能化

中英文用戶界面,觸控操作,可多機聯用。

?   交互靈活性

主機可獨立運行qPCR程序,電腦、Wi-Fi、網絡交互。


2020-10-26 14:08:54 709 0
多重PCR技術要點解析

多重PCR概述

多重PCR(multiplex PCR),又稱多重引物PCR或復合PCR,它是在同一PCR反應體系里加上二對以上引物,同時擴增出多個核酸片段的PCR反應,其基本原理與常規PCR相同,區別在于多重PCR反應體系加入一對以上引物,各對引物分別結合在模板相對應部位,最終擴增出一條以上目的DNA片段。

多重PCR的特點

?高效性:在同一PCR反應管內同時檢出多種基因,或對有多個型別的目的基因進行分型,特別是微量樣本的多基因檢測。

?系統性:多重PCR適宜于成組病原體的檢測,如肝炎病毒,腸道致病性細菌,性病,無芽胞厭氧菌,戰傷感染細菌及細菌戰劑的同時偵檢。

?經濟簡便性:多種病原體在同一反應管內同時檢出,將大大的節省時間,節省試劑,節約經費開支。

多重PCR應用

?基因診斷、腫瘤診斷、病原微生物的檢測。

?基因分型、連鎖分析。

?植物分子育種、基因表達檢測、病蟲害檢測。

?病原菌污染檢測。

?區域捕獲測序。

多重PCR之難

多重PCR并不是單純的將多對特異性引物混合成一個體系。多重PCR之所以難,在于多個靶點之間擴增條件不兼容,每個靶點都需要旁邊其他的引物配合。

就像是三人兩足游戲一樣,每個靶點成功擴增都是需要綁在一起的兩個人(一對引物)默契配合。而多重PCR就需要所有的選手同時起跑又同時到達,并且所有的選手都達到發揮。

多重PCR優化

為了達到更好的擴增效果,一般可以通過以下幾個方面進行優化。

◆引物的優化:

◆反應體系:

◆反應條件:

◆常見問題解決辦法:

多重PCR要求在同一反應體系內對多個位點進行特異性擴增。因而引物間的配對與競爭性擴增均會影響擴增效果。如果能選擇合適的反應體系、反應條件以及更合適的PCR儀,則有望提高多重PCR的擴增效果。所以在進行多重PCR的時候,不應墨守成規,要根據自身實驗情況對實驗條件進行不斷優化,達到擴增效果。


2022-10-20 11:24:40 172 0
naica? PCR MIX與naica?數字PCR檢測更配

法國Stilla Technologies公司開發的—款多重PCR專用預混液:naica?multiplex PCR MIX(見表1),專用于naica?六通道微滴芯片數字PCR系統的多重檢測。并對naica?multiplex PCR MIX的多重檢測性能進行了詳細評估。當面對有限的樣本量時,可保證多重數字PCR檢測的靈敏度和準確性;在復雜背景基因存在的情況下,依然能精確檢出低豐度的目的基因。

★ naica?multiplex PCR MIX在naica?六通道微滴芯片數字PCR上進行6個靶標的同步準確定量

采用0.2~13000cp/ul的DNA樣品,使用10X naica?multiplex PCR MIX在naica?六通道微滴芯片數字PCR系統上進行6個靶標的線性范圍分析,結果顯示6個靶標的R2均>0.99,說明在naica?六通道微滴芯片數字PCR系統上,能夠可靠地實現6靶標同步準確定量(圖1)。與2X和5X濃度的數字PCR預混液(dPCR Mixes)相比,10X濃度的數字PCR預混液體積加入量降低了50%至80%,最大限度地提高樣品加入量。尤其是在檢測低濃度樣品或稀有靶標時,樣品加入量的增加可提高檢測靈敏度。

▲ 圖1:使用naica?multiplex PCR MIX在naica?六通道微滴芯片數字PCR上進行6個靶標的線性分析,分別在藍色、青色、綠色、黃色、紅色和紅外線6個通道進行檢測。每個稀釋點的DNA濃度分別為:0.2、1.5、8.0、50、320、2050和13000 cp/ul,每個稀釋度進行3次重復。結果顯示6個靶標的R2均大于0.99,說明所有靶標的結果都高度真實可靠。

★ 在復雜的背景基因下,對低豐度目的基因進行精確定量

數字PCR的—個重要技術優勢是能夠在存在多個靶標擴增的情況下檢測到低濃度靶標。為了評估naica?multiplex PCR MIX的穩定性。使用同一個目標DNA模板的不同濃度系列稀釋液(0.2~ 13000 cp/uL)進行檢測,同時其中摻入5種外部靶標模板(每個靶標的濃度為3000 cp/ul)。在不同測試條件下,結果均呈現良好的線性關系(圖2A和2C)。這些結果與同一DNA 靶點在不同濃度下單獨檢測以及在不添加外部靶標的情況下獲得的結果具有可比性(圖2B和2D)。

▲ 圖2:使用naica?multiplex PCR MIX的擴增結果真實可靠。將pUC18質粒(圖A和B)和pUC57質粒(圖C和D)的13000至0.2 cp/ul的系列稀釋液在5個外部擴增靶標背景下(每個靶標為3000 cp/ul(A,C))和在不含外部靶標(B,D)的情況下進行定量檢測,3次重復。線性擬合系數 R2>0.99,表明在不考慮多重背景的情況下,對所有靶標的測定結果都是真實可靠的。5個外部靶標的相對標準偏差保持在2.3%至3.1% (n=21),顯示出極好的重復性。

★ naica?multiplex PCR MIX應用亮點

?  實現數字PCR方法多重檢測的高度穩定性和高檢測靈敏度;

?  可在naica?六通道微滴芯片數字PCR系統的動態范圍內同時定量檢測6個獨立的DNA靶標,均具有良好線性關系;

?  5X和10X的數字PCR預混液,提高了naica?六通道微滴芯片數字PCR系統高階多重檢測能力;

?  10X PCR MIX比5X PCR MIX降低50%的體積用量,從而增加DNA的加入量。在檢測低濃度樣品或稀有靶標時,樣本加入量的增加可提高檢測靈敏度。

表1 naica?multiplex PCR MIX貨號及規格

naica?六通道微滴芯片數字PCR系統

法國Stilla Technologies公司naica?六通道微滴芯片數字PCR系統,源于Crystal微滴芯片式數字PCR技術,自動化微滴生成和擴增,每個樣本孔可實現6熒光通道的檢測,智能化識別微滴并進行質控,3小時內即可獲得至少6個靶標基因的拷貝數濃度。


2021-09-30 10:19:15 223 0
直播邀請| FluidFM:CRISPR基因編輯技術的新突破


[主題]

    FluidFM:CRISPR基因編輯技術的新突破


[直播時間]

    2020年3月26日,16:00 - 17:00


[報告簡介]

    提高轉染物質導入細胞核的效率目前仍然是基因編輯中的一大挑戰。FluidFM 技術能夠將轉染物質直接注射到細胞核中,從根本上解決這一難題。這一技術對于極難轉染或原代的細胞系的基因編輯有著十分重要的意義。

    本次研討會是關于“提高CRISPR基因編輯效率的全新方法”的網絡研討會。向您展示如何通過直接向細胞核中導入轉染物質,從而解決細胞轉染效率低下的問題。


特別提示:本次研討會還包括在線的實驗演示!


[產品簡介]

    瑞士Cytosurge公司多功能單細胞顯微操作系統—FluidFM BOT,是將原子力系統、微流控系統、細胞培養系統為一體的單細胞操作系統。主要功能包括單細胞注射、單細胞提取以及單細胞分離。

    FluidFM BOT打開了傳統單細胞實驗手段無法觸及領域的大門。突破了單細胞研究、藥物開發、細胞系開發中的障礙,讓細胞膜不再成為阻礙單細胞研究的壁壘。

    多功能單細胞顯微操作系統FluidFM BOT濃縮了FluidFM科技的全部精華,尤其是在自動化程度和操作速度上的提高。它不僅保留了產品在生物學上的能力。更能夠將這些功能進行組合來創造更加GX、便捷全新試驗方法。


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廣州市天河區珠江新城華強路2號富力盈豐大廈1216室 510623

[主辦方]




2020-03-23 16:14:29 173 0
(高考)+目的基因的獲取方法?PCR技術用于何處?
 
2018-05-10 09:11:33 436 1
深藍云網絡直播講座預告 | 遇見ECHO REVOLVE——玩“轉”顯微鏡

您是否有過長時間觀察顯微鏡而眼睛酸澀?您是否有過為觀察玻片和培養皿而在兩臺顯微鏡之間奔波?您是否有過為觀察傳統顯微鏡繁冗操作而愁苦?

不必說明場全視野觀察,高清晰顯示,極簡化操作;也不必說熒光模塊自動轉換,多通道熒光疊加,圖像輔助編輯;單是正倒置一體式觀察,就備受科研工作者的青睞。

尊重傳統,勇于創新,來自ECHO公司的顯微鏡REVOLVE采用IPAD替代傳統目鏡,釋放您的雙眼;明場/熒光雙相機雙光源,提高觀察效果;APP軟件控制,簡化顯微操作;給您帶來不一樣的觀察體驗!

大家知道顯微觀察中,正置顯微鏡更適合于玻片觀察、油鏡觀察;倒置顯微鏡則更適合于培養皿/培養瓶觀察、孔板觀察,不僅如此,往往還需要明場與熒光觀察。因此,一臺顯微鏡滿足以上所有需要,就顯得彌足珍貴。

直播課



2020-04-13 17:12:41 217 0
深藍云生物數字PCR打卡送書活動開啟啦!

第三代PCR技術即數字PCR(digtal PCR)技術,可以實現對起始樣品核酸的定量。在反應體系中加入熒光染料的同時將反應體系進行分區,實現單分子模板擴增,Z后通過陽性反應器數直接讀出目標序列的拷貝數,可以對低拷貝基因進行檢測,彌補了熒光PCR的不足。因其出色的靈敏度和精確度,數字PCR在檢測微量核酸樣本,稀有突變,拷貝數變異,復雜樣品檢測等方面均有廣泛的應用前景。


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除了數字PCR,還有Western Blot解決方案打卡送書供大家學習,點擊鏈接:http://www.cycloudbio.com/product/38404.html 報名參加吧。


2020-04-13 17:11:09 345 0

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