2020年4月21日，由Tara N. Guhr Lee等在《Journal of Cystic Fibrosis》期刊中發(fā)表了《Accumulation and persistence of ivacaftor in airway epithelia with prolonged treatment》的文章，文中使用Azure Sapphire對IRDye 680孵育的印跡膜掃描成像，對CFTR蛋白進(jìn)行定量分析。

背景：

囊性纖維化（CF）的基本缺陷反映了囊性纖維化跨膜電導(dǎo)調(diào)節(jié)劑（CFTR）的功能喪失，囊性纖維蛋白是參與氯離子和碳酸氫鹽跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運的質(zhì)膜蛋白。CF的一個關(guān)鍵ZL方法是CFTR調(diào)節(jié)劑，即用于改善異常CFTR功能的藥物。

CFTR調(diào)節(jié)劑的當(dāng)前劑量策略基于血清藥代動力學(xué)，但靶組織（如氣道上皮）中的藥物濃度尚不清楚。先前的數(shù)據(jù)表明，CFTR調(diào)節(jié)劑可能在氣道上皮中積聚，血清藥代動力學(xué)可能無法準(zhǔn)確預(yù)測慢性ZL的效果。

方法：

在ZL和沖洗階段的各個時間間隔，通過質(zhì)譜法測量藥物濃度，在Ussings室中評估電生理功能，并通過Western印跡定量成熟的CFTR蛋白。

結(jié)果：

與lumacaftor或tezacaftor相比，CF-HBEs中ivacaftor的累積程度要大得多，并且在沖洗14天后仍然持續(xù)升高。CFTR活性在ZL7天達(dá)到峰值，但隨著ivacaftor的進(jìn)一步積累而降低，盡管沖洗后仍保持在基線以上。

結(jié)論：

慢性ZL期間和之后，CFTR調(diào)節(jié)劑的細(xì)胞內(nèi)累積和持續(xù)存在提示氣道上皮內(nèi)復(fù)雜的藥代動力學(xué)和藥效學(xué)特性不能由血清藥代動力學(xué)預(yù)測。可能需要直接測量靶組織中的藥物以優(yōu)化劑量策略，并且ZL停止后CFTR調(diào)節(jié)劑的持續(xù)存在對個性化藥物ZL方法具有重要意義。

Sapphire 雙模式多光譜激光成像系統(tǒng)可完成NIR和RGB熒光，化學(xué)發(fā)光和磷屏成像等多種檢測。無論您的實驗室進(jìn)行哪種成像，例如普通的Western Blot、Southern印跡、2D和2D DIGE、可視化組織或小型模式動物成像都可高質(zhì)量實現(xiàn)。

慢性髓系白血病(Chronic myeloid leukemia, CML)是一種由造血干細(xì)胞染色體t(9；22)(q34；q11)易位引起，并在分子水平上形成Bcr-Abl融合基因的骨 髓增生性疾病。使用酪氨酸激酶抑 制劑(Tyrosine kinase inhibitors, TKIs)可以緩解疾病，但TKIs耐藥性是治 療失敗或誘發(fā)急性白血病的主要問題。

根據(jù)Abl激酶結(jié)構(gòu)域點突變的不同，TKIs的耐藥機(jī)制主要包括Bcr-Abl依賴型和非Bcr-Abl依賴型。Bcr-Abl依賴型的耐藥性最常見，它會干擾小分子酪氨酸激酶抑 制劑伊馬替尼（Imtatinib, IM）結(jié)合和隨后的激酶抑 制。然而，超過50%的耐藥CML患者中并沒有Bcr-Abl突變。

▲ 慢性髓系白血病

蛋白激酶C(Protein kinases C, PKCs)在細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、增殖、凋亡和造血干細(xì)胞分化等多種細(xì)胞過程中發(fā)揮作用，并和Bcr-Abl協(xié)調(diào)參與對惡性細(xì)胞轉(zhuǎn)化至關(guān)重要的幾種信號通路。實驗和臨床證據(jù)表明，使用PKC抑 制劑可以有效地治 療CML。最近，不同的PKC亞型也被報道參與CML細(xì)胞的耐藥，但是，PKC信號在CML TKIs耐藥中的作用并不清楚。

▲ 蛋白激酶C的晶體結(jié)構(gòu)

近日，貴州醫(yī)科大學(xué)王季石教授課題組根據(jù)先前的研究結(jié)果：一種泛PKCs抑 制劑星孢菌素(Stauroporine)在低濃度下可以有效地逆轉(zhuǎn)K562R細(xì)胞(沒有任何突變)的IM耐藥，因此推測Bcr-Abl非依賴型IM耐藥可能是由PKC亞型介導(dǎo)。在此基礎(chǔ)上，鑒于白血病干細(xì)胞(Leukemia stem cells)在CML TKIs耐藥中起基礎(chǔ)性作用，研究首次在Bcr-Abl非依賴型TKI耐藥的CML患者CD34+細(xì)胞中檢測到9種PKCs亞型的表達(dá)。對PKC亞型異常表達(dá)所介導(dǎo)的機(jī)制進(jìn)行深入研究時，使用博鷺騰AniView100多模式動物活體成像系統(tǒng)拍攝的活體成像實驗結(jié)果，從體內(nèi)進(jìn)一步證明PKC-β的過表達(dá)與腫瘤耐藥密切相關(guān)，表明靶向PKC-β過表達(dá)可能是克服CML耐藥的一種新的治 療機(jī)制。

相關(guān)成果已發(fā)表在期刊《Journal of Cellular Physiology》。

▲抑 制PKC-β可增強(qiáng)IM對CML細(xì)胞的體內(nèi)殺傷作用

(a) 博鷺騰AniView100拍攝的不同藥物處理的CML小鼠模型中白血病細(xì)胞的活體示蹤成像圖。LY333531: PKCβ 抑 制劑。

(b) 流式細(xì)胞儀檢測各組小鼠CD33+和CD45+細(xì)胞。

(c) 直方圖顯示流式細(xì)胞儀檢測的各組小鼠CML細(xì)胞的差異。

(d) 各組小鼠的生存曲線。

(e、f) 比較各組小鼠脾 臟體積和重量。

(g、h) Wright‘s染色檢測各組小鼠外周血中CML的進(jìn)展情況。統(tǒng)計學(xué)處理采用t檢驗。**表示p<0.01，*表示p<0.05。

參考文獻(xiàn)

1、Ma D, et al. PKC‐β/Alox5 axis activation promotes Bcr‐Abl‐independent TKI‐resistance in chronic myeloid leukemia[J]. Journal of Cellular Physiology, 2021.

2、Zubair M S, et al. Cembranoid Diterpenes as Antitumor: Molecular Docking Study to Several Protein Receptor Targets[C]// International Conference on Computation for Science & Technology. 2015.

病毒性疾病爆發(fā)是水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)最嚴(yán)重的問題，具有傳播快、發(fā)病快和致死率高等特點，對水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失；而疫苗免疫是對其進(jìn)行防控的最有效措施。在水產(chǎn)動物免疫途徑中，注射方式效果較好，但不適合漁業(yè)生產(chǎn)；浸浴免疫操作簡單，適合在魚苗和魚類大規(guī)模養(yǎng)殖中推廣使用，但是浸浴疫苗的應(yīng)用需要克服生物屏障等阻礙作用，才能使疫苗發(fā)揮出理想的免疫效果。

研究發(fā)現(xiàn)，納米載疫苗靶向遞呈技術(shù)是解決水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)實現(xiàn)疫苗高效免疫保護(hù)最安全有效的手段之一；單壁碳納米管(SWCNTs)是一種高效的疫苗載體，具有高穿透性、高承載力、易修飾性和安全性等特性；甘露糖受體(Mannose receptor)是抗原呈遞細(xì)胞上的標(biāo)志性受體，能夠結(jié)合甘露糖修飾的抗原物質(zhì)，可以作為疫苗的靶點。

近日，西北農(nóng)林科技大學(xué)動物科技學(xué)院朱斌教授課題組運用納米載疫苗靶向遞呈技術(shù)，構(gòu)建靶向性碳納米管載疫苗系統(tǒng)，選擇高效的疫苗載體(單壁碳納米管)來突破生物屏障的限制，并利用合適的佐劑(甘露糖修飾的抗原物質(zhì))來增強(qiáng)疫苗的免疫效果，使疫苗充分發(fā)揮治療和免疫保護(hù)效果。這些研究成果相繼發(fā)表在期刊Vaccines和Journal of Nanobiotechnology，可以為其它水產(chǎn)動物納米載疫苗系統(tǒng)的研究、應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)，對漁業(yè)的可持續(xù)發(fā)展和水產(chǎn)品食品安全生產(chǎn)具有重要意義。

文章一

草魚呼腸孤病毒(GCRV)已被公認(rèn)為是所有水生病毒物種中最具致病性，VP7作為GCRV的外衣殼蛋白，是一種可以誘導(dǎo)宿主免疫反應(yīng)的主要抗原。通過構(gòu)建靶向浸沒疫苗遞送系統(tǒng)(CNTs-M-VP7)，該系統(tǒng)由SWCNTs作為疫苗載體，GCRV VP7蛋白作為抗原，甘露糖作為抗原呈遞細(xì)胞靶向部分。結(jié)果表明CNTs-M-VP7疫苗可通過粘膜組織(皮膚，腮和腸)進(jìn)入魚體內(nèi)，呈現(xiàn)給免疫相關(guān)組織，顯著誘導(dǎo)的成熟和呈遞過程，從而引發(fā)強(qiáng)大的免疫反應(yīng)。

a、CNTs-M-VP7納米疫苗的制備過程；

b、巨噬細(xì)胞對納米疫苗的吸收；

c、魚組織中納米疫苗的攝取；

d、用博鷺騰多模式動物活體成像系統(tǒng)檢測接種魚體內(nèi)和體外熒光的分布；

e、草魚接種后，用GCRV人工攻擊后的相對存活百分比(每組n =100)。

文章二

鯉春病毒血癥(Spring viremia of carp，SVC)是危害最嚴(yán)重的水產(chǎn)病毒性疾病之一，SVCV作為SVC的病原，其表面糖蛋白(G)被認(rèn)為是一種主要抗原，可以誘導(dǎo)原發(fā)性宿主免疫反應(yīng)。通過化學(xué)修飾的方法將SVCV的抗原蛋白(G)、功能化單壁碳納米管和功能化甘露糖進(jìn)行結(jié)合，構(gòu)建了靶向性碳納米管載疫苗系統(tǒng)(SWCNTs-MG)。結(jié)果表明SWCNTs-MG通過提高疫苗進(jìn)入魚體的含量，并增強(qiáng)對抗原呈遞細(xì)胞的靶向呈遞作用，進(jìn)而提高疫苗浸浴免疫的效果。

a、SWCNTs-MG納米疫苗的制備過程；

b、納米疫苗在體內(nèi)和體外的安全性評估；

c、鯉魚巨噬細(xì)胞體外納米疫苗的攝取；

d、魚組織中納米疫苗的攝取；

e、用博鷺騰多模式動物活體成像系統(tǒng)檢測接種魚體內(nèi)和體外熒光的分布；

f、在接種的鯉魚中用SVCV人工攻擊后的相對存活百分比。

Tips   AniView 100多模式動物活體成像系統(tǒng)

AniView 100多模式動物活體成像系統(tǒng)作為廣州博鷺騰生物科技有限公司推出的高靈敏度動物活體成像系統(tǒng)，其采用全密閉抗干擾暗箱，避免外界光源及宇宙射線對拍照影響的同時，配合零缺陷、科研級高靈敏背部薄化、背部感應(yīng)型冷CCD相機(jī)，極大地提高成像的靈敏度。AniView 100可以檢測到<100個Luciferase標(biāo)記細(xì)胞，或＜10ng FITC。

參考文獻(xiàn)：

1、Zhang C ,  Wang G X ,  Zhu B . Journal of Nanobiotechnology, 2020, 18(1).

2、Zhu B, Zhang C, Zhao Z, Wang GX. Vaccines(Basel). 2020;8(1):87. 

3、張晨.[D]. 西北農(nóng)林科技大學(xué),2019.

肝癌是最常見的致命癌癥之一。目前臨床上主要采用手術(shù)切除癌變肝組織，同時以化療、放療等方式阻止正常肝細(xì)胞被感染惡化來治 療肝癌；但是，化療會濫殺濫傷各組織的正常細(xì)胞，并產(chǎn)生極大的副作用，而且在肝癌細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移或再生后也難以治愈。

因此，設(shè)計與制造出更好的用于肝癌治 療的藥物，是醫(yī)藥研究人員亟待解決的難題。如何提高藥物療 效，不僅可以從藥物結(jié)構(gòu)本身出發(fā)，而且可以從藥物載體入手。選擇新型藥物載體或靶向基團(tuán)，可以使有效藥物分子直接作用于癌癥患處，提高藥物靶向性，減少藥物對正常組織的傷害，減輕患者的疼痛。

近日，遼寧新藥研發(fā)重 點實驗室李麗教授課題組成功構(gòu)建并制備了兩種甘草次酸修飾的金屬有機(jī)框架藥物載體，并通過組織分布和活體成像實驗，驗證載體具有明顯的肝靶向性。該成果已發(fā)表在納米技術(shù)與精密工程領(lǐng)域國際權(quán)威期刊《Nanotechnology》。

1. 甘草次酸（GA）

甘草次酸（Glycyrrhetininc Acid，GA）是從中草藥甘草中提取分離出來的具有抗 炎、抗病毒、抗?jié)兊榷喾N藥理活性的甘草酸苷元。近期研究發(fā)現(xiàn)，在肝細(xì)胞膜上鑲嵌著許多GA特異性受體，可與GA特異性結(jié)合，因此，GA作為藥物靶向分子進(jìn)行修飾的藥物載體已經(jīng)成為研究熱點和一種新的靶向性治 療肝癌的有效途徑。

2. 金屬有機(jī)框架（MOFs）

金屬有機(jī)框架材料（Metal-organic Frameworks，MOFs），是一類通過組裝無機(jī)金屬離子與有機(jī)配體形成的具有多孔隙、高比表面積的新型材料。它的最 大的優(yōu)點是具有良好的生物相容性，而且會在體內(nèi)特定環(huán)境中自行分解，減少藥物在體內(nèi)的副作用，降低耐藥性，提高藥物治 LX率。

通過在MOFs表面修飾GA，可以實現(xiàn)MOFs的肝靶向性，并且MOFs的孔隙率高，具有超大比表面積，可以有效裝載藥物，提高載藥能力。

兩種MOFs載體：Uio-66-COOH-1,4-丁二胺-GA與UiO-66-NH2-GA。

3. 小鼠體內(nèi)靶向性研究

DiR熒光染料，DiR＠Uio-66-COOH-1,4-丁二胺-GA和DiR＠Uio-66-ＮＨ2-GA 在小鼠體內(nèi)不同時間段的熒光成像圖

DiR熒光染料，DiR＠Uio-66-COOH-1,4-丁二胺-GA和DiR＠Uio-66-ＮＨ2-GA 在心、肝、脾、肺、腎的熒光成像圖

關(guān)于多模式動物活體成像系統(tǒng)

AniView100多模式動物活體成像系統(tǒng)是廣州博鷺騰生物科技有限公司全新推出的高靈敏度、多模式動物活體成像系統(tǒng)。其采用一級背部薄化、背部感光超低溫CCD相機(jī)，具有極高的檢測靈敏度。大功率全波長鹵素?zé)艏ぐl(fā)光源配合精密復(fù)雜的全局光源和萬向鵝頸管點狀光源光路系統(tǒng)，再加上頂 級的光譜轉(zhuǎn)換能力和多組濾光片組合，極大的提高了熒光信號的特異性，并大大縮短曝光時間。

急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia, AML)是一組具有髓系特征的多發(fā)性異質(zhì)性惡性腫瘤。通過化療、放療、造血干細(xì)胞移植、支持性治療和靶向治療等方式，可以提高患者五年總存活率；但是，與其他血液腫瘤相比，AML的治療效果較差，最常見的表現(xiàn)是緩解后復(fù)發(fā)。因此，對于復(fù)發(fā)和化療耐藥的患者來說，迫切需要尋找新的具有有效和可控副作用的治療藥物和技術(shù)。

溶瘤病毒（Oncolytic Virus, OVS）是一類具有復(fù)制能力的腫瘤殺傷型病毒，通過直接溶解感染的腫瘤細(xì)胞和間接增強(qiáng)宿主的抗腫瘤免疫力來介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的破壞。其種類有：新城疫病毒（Newcastle disease virus, NDV）、單純皰疹病毒-1（Herpes simplex virus-1, HSV-1）、呼腸孤病毒（Reovirus）和溶瘤腺病毒（Oncolytic adenovirus）等。由于OVS優(yōu)先破壞腫瘤細(xì)胞，而對正常細(xì)胞無害，同時越來越多的研究證據(jù)表明，AML細(xì)胞感染溶瘤病毒會顯著增加腫瘤細(xì)胞的死亡率，這為AML的治療提供了新的方法和思路，已經(jīng)在多個臨床試驗中進(jìn)行了安全性和可行性的探索。然而，B淋巴細(xì)胞會對血液循環(huán)中的OVS產(chǎn)生中和抗體(Neutralizing Bntibodies、NAbs)，從而阻止病毒的傳播，最終會降低病毒的治療效果。

▲  OVS的雙重作用模式，優(yōu)先靶向并殺死癌細(xì)胞，而對正常細(xì)胞幾乎沒有有害的影響

間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)是一類存在于多種組織(如骨 髓、臍帶血和臍帶組織、胎盤組織、脂肪組織等)，具有多向分化潛力的多能干細(xì)胞。在過去的十年中，MSCs被認(rèn)為是OVS的理想載體，其原因有：(1)、MSCs為病毒提供了一個復(fù)制場所；(2)、MSCs能避免被免疫系統(tǒng)清除；(3)、MSCs確保病毒能到達(dá)腫瘤部位；(4)、MSCs會分泌細(xì)胞因子，增強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng)。然而，攜帶溶瘤病毒的人臍帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞(Human umbilical cord-derived MSCs, Huc-MSCs)的抗腫瘤效果及其分子機(jī)制尚不清楚。

▲  間充質(zhì)干細(xì)胞的分化潛力

近日，貴州醫(yī)科大學(xué)成體干細(xì)胞轉(zhuǎn)化研究重點實驗室趙星和何志旭教授課題組首次報道Huc-MSCs作為呼腸孤病毒的細(xì)胞載體，并使用博鷺騰AniView100多模式動物活體成像系統(tǒng)檢測攜帶呼腸孤病毒的Huc-MSCs和MSCs在活體內(nèi)對AML的治療 效果和抗腫瘤效果。該工作有助于提升研究人員對MSCs攜帶OVS的抗腫瘤機(jī)制的理解，并可能為臨床治療AML提供新的策略。相關(guān)成果已在國際著名期刊《International Immunopharmacology》發(fā)表。

評價攜帶呼腸孤病毒的Huc-MSCs在體內(nèi)的治療效果。根據(jù)熒光素酶報告基因可用于體內(nèi)移植的Huc-MSCs的定量，將呼腸孤病毒(Luc-MSCs-Reo)負(fù)載于Huc-MSCs，并靜脈注射注射到AML小鼠模型內(nèi)。通過博鷺騰AniView100多模式動物活體成像系統(tǒng)進(jìn)行成像，結(jié)果顯示Huc-MSCs位置同腫瘤THP-1細(xì)胞定位相同。小鼠的Kaplan-Meier生存曲線結(jié)果表明，接受呼腸孤病毒感染的Huc-MSCs的小鼠的中位存活時間比接受裸鼠呼腸孤病毒的小鼠顯著增加。這些數(shù)據(jù)證實了Huc-MSCs作為呼腸孤病毒載體具有良好的治療效果。

▲  攜帶呼腸孤病毒的Huc-MSCs對AML小鼠模型的治療作用

評價攜帶呼腸孤病毒的MSCs的體內(nèi)抗腫瘤效果。建立具有免疫活性的小鼠AML模型，通過博鷺騰AniView100多模式動物活體成像系統(tǒng)進(jìn)行成像，結(jié)果顯示標(biāo)記DIR的MSCs和呼腸孤病毒感染的MSCs對C1498腫瘤具有腫瘤歸巢能力，提示攜帶呼腸孤病毒的MSCs維持其固有的向腫瘤細(xì)胞遷移的能力。根據(jù)各組的腫瘤體積和重量、腫瘤中的病毒RNA定量顯示、治療后小鼠血清干擾素-γ和腫瘤壞死因子-α水平及免疫組織化學(xué)法觀察到腫瘤中CD8的表達(dá)結(jié)果，可得MSCs有效地將呼腸孤病毒運送到腫瘤部位，并觸發(fā)小鼠的免疫反應(yīng)，對腫瘤生長有明顯的抑 制作用。這些結(jié)果證實了MSCs載體能夠增強(qiáng)呼腸孤病毒的抗腫瘤效果。

▲  攜帶呼腸孤病毒的MSCs對C57BL/6小鼠C1498腫瘤的治 療作用

2020年10月22日，由Wioletta Rut?、Katarzyna Groborz、Linlin Zhang和Xinyuanyuan Sun等在《nature chemical biology》期刊發(fā)表了《SARS-CoV-2 Mpro inhibitors and activity-based probes for patient-sample imaging》的文章。

SARS-CoV-2的主要蛋白酶（Mpro）是關(guān)鍵的靶標(biāo)，作者首先獲得了該蛋白酶的熒光底物(HyCoSuL)靶向庫，并確定了P4-P2位點的底物特異性，比較了SARS-CoV和SARS-CoV-2主要蛋白酶的底物偏好性。其次，作者設(shè)計并合成了一種有效的SARS-CoV-2YZ劑（Ac-Abu-dTyr-Leu-Gln-VS）和兩種活性探針，其中一種探針與SARS-CoV-2 Mpro配合物的晶體結(jié)構(gòu)被確定。ZH，作者觀察了SARS-CoV-2 Mpro在COVID-19感染患者鼻部咽上皮細(xì)胞中的活性。這些數(shù)據(jù)為COVID-19有效診斷和ZL的化合物設(shè)計提供了支撐。

在本次研究中，作者使用美國Azure Biosystems Sapphire平臺檢測SARS-CoV-2 Mpro 探針的敏感性，其中YZ劑是Ac-QS5-VS(Ac-Abu-dTyr-Leu-Gln-VS)，活性探針是Bodipy-QS5-VS(Bodipy-PEG(4)-Abu-dTyr-Leu-Gln-VS)。Sapphire以其超高的分辨率，更寬的動態(tài)范圍和更高的檢測靈敏度助力此項研究。

▲ Sapphire雙模式多光譜激光成像系統(tǒng)

?   雙模式成像：掃描檢測和CCD成像雙模式。

?   4個固態(tài)激光器激光激發(fā)：488nm(藍(lán)色)、520nm(綠色)、658nm(紅色) /685nm/638nm、784nm(NIR)，給用戶更多熒光選擇。

?   WY的3種檢測器設(shè)計：PMT，APDs和CCD檢測器，PMT檢測器用于藍(lán)色熒光檢測和磷屏成像；3個獨立的APD檢測器用于綠色、紅色熒光檢測和雙近紅外熒光檢測，高分辨CCD用于高靈敏化學(xué)發(fā)光檢測。

?   掃描方式：4通道同時掃描，掃描更快速。

?   分辨率更高：可達(dá)10微米的分辨率，成像更清晰。

?   動態(tài)范圍更寬：同時定量低豐度蛋白和高豐度蛋白，定量更準(zhǔn)確 。