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- wo叫大姐姐i 2017-06-10 00:00:00
- 基因芯片(genechip)(又稱DNA芯片、生物芯片)的原型是80年代中期提出的。基因芯片的測序原理是雜交測序方法,即通過與一組已知序列的核酸探針雜交進行核酸序列測定的方法,在一塊基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探針。當溶液中帶有熒光標記的核酸序列TATGCAATCTAG,與基因芯片上對應位置的核酸探針產生互補匹配時,通過確定熒光強度Z強的探針位置,獲得一組序列完全互補的探針序列。據此可重組出靶核酸的序列。 基因芯片技術由于同時將大量探針固定于支持物上,所以可以一次性對樣品大量序列進行檢測和分析,從而解決了傳統核酸印跡雜交(Southern Blotting 和 Northern Blotting 等)技術操作繁雜、自動化程度低、操作序列數量少、檢測效率低等不足。而且,通過設計不同的探針陣列、使用特定的分析方法可使該技術具有多種不同的應用價值,如基因表達譜測定、突變檢測、多態性分析、基因組文庫作圖及雜交測序等。 熒光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR) 是1996 年由美國Applied Biosystems 公司推出的一種新定量試驗技術,它是通過熒光染料或熒光標記的特異性的探針,對PCR產物進行標記跟蹤,實時在線監控反應過程,結合相應的軟件可以對產物進行分析,計算待測樣品模板的初始濃度。 PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;剛開始時, 探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。或者使用熒光染料SYBR。SYBR可以結合到雙鏈DNA上面,當體系中的模板被擴增時,SYBR可以有效結合到新合成的雙鏈上面,隨著PCR的進行,結合的SYBR染料越來越多,被儀器檢測到的熒光信號越來越強,從而達到定量的目的。
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熒光定量PCR試劑本生(天津)健康科技有限公司供應:移液器吸嘴,離心管,凍存管,培養皿全系熒光定量PCR耗材,產品包括:PCR單管、PCR八聯管、96孔板、384孔板。
CG編號 產品描述 包裝規格 DBI-2073 Bestar? SybrGreen qPCR Master Mix
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DBI-2231 Bestar? HRM Master Mix
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DBI-2233 Universal qPCR Mix (Taqman probe)
DBI-2234 Universal qPCR Mix (Taqman probe)
DBI-2235 High-throughput qPCR Mix (Taqman probe)
DBI-2236 High-throughput qPCR Mix (Taqman probe)包裝規格:
25 ml
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1 ml
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200 Reaction
100 Reaction (50uL)熒光定量PCR試劑
產品優勢:本生生物代理實驗室R耗材品種全,可替代儀器原廠耗材,性價比高,質量穩定,對用戶可以節省實驗成本。
適應客戶:醫院檢驗科PCR實驗室,驗室;第三方檢測機構,科研院所,大專院校,制藥廠,試劑生產廠家,疾控,檢驗檢疫。
- 熒光定量PCR耗材的使用和選擇注意事項!
高通量的96孔PCR板和8聯管是在聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction ,PCR)中,主要作為參與擴增反應的引物、Taq DNA聚合酶、dNTP、模板核酸、Mg、緩沖液等的承載物。醫療級聚丙烯(PP)材質因其極高的純凈度和穩定性,能更好適應PCR反應過程中反復高低溫設定,并且能夠實現高溫高壓滅菌操作,常常被用于PCR耗材的生隨著熒光定量PCR技術的普及,該技術被廣泛用于遺傳、生化、免疫、醫藥等領域,不僅應用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎研究,還可用于疾病的診斷或任何有DNA,RNA的研究領域。
如何正確使用96孔PCR孔板
PCR板有透明和乳白色可選,其中乳白色更適合用于頂部采集熒光信號的新型熒光定量PCR儀(如伯樂CFX系列,ABI 7500fast 以上型號, Roche 480系列),但如果熒光定量PCR儀是底部光源的,則應選擇透明的。
PCR板根據裙邊設計又可分為無裙邊、半裙邊和全裙邊三種設計模式,不同廠家的熒光定量PCR儀會設計不同的切角或邊緣凸起,請選擇適合該PCR儀的板子。
PCR板又分100ul體積(矮板)和200ul體積(高板),根據機型的不同選擇,選擇不同高度孔板,避免高度錯誤對機器造成破壞和加熱不均導致數據失真。
當使用96孔板做熒光定量PCR實驗的時候,推薦使用光學膜代來密封反應孔。
加樣后會在管壁上飛濺一些小液滴,另外反應體系內也會有一些氣泡,需要離心去掉掛壁液滴和氣泡。請使用專用的微孔板離心機解決上述問題。
PCR板屬于一次性消耗品,生產一次成型,不建議剪開使用容易造成實驗誤差增加,不能清洗或部分重復利用。不要為了節省一點小錢,而給實驗帶來后續分析上的困擾。
樣本量少,用8聯管做實驗又該注意哪些呢?
8聯管也分乳白和透明兩種,選擇方式和孔板一樣,根據PCR儀的熒光信號采集方式決定。
8聯管同樣也有0.1ml(矮管)和0.2ml(高管),根據PCR儀的加熱模塊體積確定。
8聯管的蓋子一般有光學平蓋和凸型圓蓋之分,光學平蓋適用于熒光定量PCR,圓蓋適用于普通PCR。
使用單管或8聯管做實驗,并且樣本數量不多的時候,建議在樣品加熱塊(TRAY)上對稱地安放樣品,是縱向放置,并且優先放在第6列或第7列,然后逐漸向兩邊放置。這樣做的好處是熱蓋壓下來的時候不至于發生傾斜,各個反應管的受力和受熱都比較均勻,提高孔與孔之間的數據精密性。也可以在加熱模塊四角的位置,放置4個單管平衡熱蓋壓力,避免擴增少量樣本時出現管子變形的情況。
管蓋沒有蓋好造成PCR反應液熱蒸發,影響反應溫度的準確控制及反應也各成份的濃度,同時也成為一個污染源。不但會因壓蓋時由于粗心或者用力不均致使部分蓋子變形,而且還會造成樣品的交叉污染,所以我們推薦用獨立管蓋的8聯管,每管蓋一體,確保樣本獨立反應,避免交叉污染。
注:以上資料僅供參考!
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熒光定量PCR特點:現代分子生物學研究中的重要工具
熒光定量PCR(qPCR,Quantitative Polymerase Chain Reaction)技術是一種用于定量分析特定DNA或RNA序列的實驗技術。近年來,隨著生物醫學研究的迅猛發展,熒光定量PCR已成為分子生物學中不可或缺的工具。其獨特的優勢,如高靈敏度、精確度和實時監控等,使其廣泛應用于基因表達分析、疾病診斷、基因拷貝數檢測以及病原微生物檢測等多個領域。本文將深入探討熒光定量PCR的主要特點,并分析其在現代分子生物學研究中的重要性和應用前景。
一、實時監控與高靈敏度
熒光定量PCR的大特點之一是能夠實時監控PCR反應過程中的DNA擴增情況。在傳統PCR中,擴增結果通常通過凝膠電泳檢測,而熒光定量PCR則通過熒光染料或熒光探針實時檢測PCR產物的增加量,從而可以在擴增的每一個循環中獲取數據。這一過程不僅能提供定量數據,還能精確地反映每個樣本中目標基因的初始濃度。
熒光定量PCR具有極高的靈敏度,能夠檢測到極低濃度的DNA或RNA樣本。即使是微量的基因或病原微生物,也可以通過這種方法實現準確的定量分析,這對于早期診斷和低拷貝數基因檢測至關重要。
二、廣泛的應用領域
熒光定量PCR的應用范圍極為廣泛,涵蓋了從基礎研究到臨床應用的多個領域。在基因表達研究中,qPCR被廣泛用于分析特定基因在不同條件下的表達水平變化。通過比較不同樣本中目標基因的表達量,研究人員可以揭示基因調控的機制和與疾病發生的關系。
在臨床診斷中,熒光定量PCR也發揮了重要作用。例如,病毒載量的檢測、癌癥相關基因突變的檢測等,均可通過qPCR進行定量分析。熒光定量PCR還可用于檢測病原體,如細菌、病毒等微生物的感染水平,從而為疾病的早期診斷和提供可靠的依據。
三、快速高效且具有高精確性
熒光定量PCR的另一個顯著特點是其高效性。與傳統的PCR方法相比,qPCR不僅能夠在較短時間內完成實驗,還能通過使用專門的熒光探針或染料,提高對特定DNA或RNA序列的檢測精度。不同于傳統PCR僅能提供陽性或陰性的結果,熒光定量PCR能量化每個樣本的擴增過程,提供更加詳細的數據,確保實驗結果具有更高的可靠性。
這種高效性和精確性使得熒光定量PCR成為了臨床實驗室、研究機構以及生物技術公司日常工作中的工具。通過精確控制每一個PCR周期,熒光定量PCR能夠有效減少實驗中的誤差,提高實驗結果的可重復性。
四、定量化與高通量檢測
隨著大規模篩選和高通量數據分析的需求不斷增加,熒光定量PCR技術也在高通量檢測中發揮著越來越重要的作用。通過多重PCR反應,研究人員可以同時檢測多個目標基因,這大大提高了實驗的通量和效率。熒光定量PCR的定量化能力使其在基因組學、轉錄組學等高通量分析中,成為了數據采集的核心技術。
五、結論
熒光定量PCR憑借其高靈敏度、實時監控、高精度及廣泛的應用領域,已成為分子生物學研究和臨床診斷中的重要工具。其在基因表達分析、病原檢測、基因突變篩查等方面的優勢,使其在科研和臨床工作中扮演著至關重要的角色。隨著技術的不斷發展,熒光定量PCR的應用前景將更加廣闊,為生命科學領域帶來更為深遠的影響。
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